全 文 ：实验研究 45中国医药指南 2010 年 3 月第 8 卷 第 7 期 Guide of China Medicine, March 2010, Vol.8, No7
杏香兔耳风Ainsliaea fragrans Champ.为我国传统中药，民间以全草
入药，具有清热补虚、凉血止血、利湿解毒、发表祛风等作用。已有
研究发现，杏香兔耳风中具有良好的抗炎效果，本实验测定了3种杏香
兔耳风提取物对常见菌的抑制作用，阐明了其抑菌活性，旨在能开发
出一种天然的抑菌药，为杏香兔耳风临床开发利用提供理论基础。
1 材料、试剂与仪器
1.1 材料
杏香兔耳风提取物A、杏香兔耳风提取物B和杏香兔耳风提取物
C，由本院制剂室提供，置于冰箱中冷藏备用。
1.2 供试菌种
细菌：大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus
aureus）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）、沙门菌（Salmonella sp.）；霉菌：黑
曲霉（Aspergillus niger）、桔青霉（Penicillium citrinum）；酵母菌：啤酒酵
母（Saccharomyces cerevisiae）由南京师范大学生科院和南京中医药大学
微生物实验室提供。
1.3 培养基[1]
牛肉膏蛋白胨培养基（用于细菌的培养），具体组成为：牛肉膏
3g、蛋白胨10g、NaCl 5g、琼脂15~20g、水1000mL、pH 7.2~7.4；马
铃薯葡萄糖培养基（用于霉菌和酵母菌的培养），具体组成为：马铃
薯200g、葡萄糖20g、琼脂15~20g、水1000mL、pH自然（将马铃薯去
皮，切成小块，置于锅中并加水1000mL，煮沸半个小时，用双层纱布
过滤，取其滤液加葡萄糖20g，加琼脂15~20g，并加水补足1000mL，调
pH成自然）。
1.4 试剂
乙醇、氢氧化钠、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉、苯甲酸钠、山梨酸
钾所用试剂均为分析纯，市售的猪肉、茄子、豆腐。
1.5 仪器与设备
HH-2 型恒温水浴锅（国华电器有限公司），DRP-9082 型电热恒
温培养箱（上海森信实验仪器有限公司），KS-120D 超声波清洗器（宁
波海曙科声超声设备有限公司），D-1 型自动蒸气灭菌锅（北京发恩
科贸有限公司），DGF30/7-IADC 型电热鼓风干燥箱（南京实验仪器
厂），超净工作台（苏州安泰空气技术有限公司），手动（可调试）
移液枪（上海大龙医疗设备有限公司）
2 实验方法
2.1 菌悬液的制备
取试管若干，装入融化的培养基灭菌后摆成斜面。在无菌条件
下用划线法将供试菌种移接入相应的斜面培养基上，每个菌种活化
多支，放入培养箱中，细菌 37℃下培养 18~24h，酵母菌和霉菌于 江西省医药学校（330200）
3种杏香兔耳风提取物抑菌活性的研究
李桂兰 芮 成
【摘要】目的 研究杏香兔耳风提取物 A、杏香兔耳风提取物 B 及杏香兔耳风提取物 C 的抑菌活性。方法 采用琼脂扩散法和平板稀释法，
探讨了 3 种杏香兔耳风提取物的抑菌活性，测定了其抑菌直径和最低抑菌浓度。结果 3 种杏香兔耳风提取物对细菌有良好的抑制作用，酵
母菌次之，霉菌最弱。结论 3 种杏香兔耳风提取物均有较好的开发利用价值。
【关键词】杏香兔耳风；抑菌 琼脂扩散法
中图分类号：R927.1 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2010）07-0045-03
28℃下培养 48h。然后取出置于 4℃冰箱中冷藏。取出活化好的菌
种，无菌操作，用适量的灭过菌的生理盐水洗入已灭菌的干净试管中，
然后根据实验的需要采用比浊法 [2] 配置成含菌数为 106~107CFU/mL
的菌悬液，备用。
2.2 滤纸片扩散法测定杏香兔耳风提取物的抑菌能力
参考姚淑敏 [3] 的方法并略有改进，将配制好灭过菌的固体培养基
溶化后倒入培养皿中，每皿 20mL，待冷却、凝固后，用无菌吸管分
别加入 0.1mL 相应的待试菌悬液，用无菌涂布器将菌液涂布均匀，制
成含菌平板，置 37℃恒温箱中 15min 后取出，目的使琼脂表面干燥，
待用。选择吸水性强的新华一号定性滤纸，用打孔器打成若干直径为
6mm 的圆形滤纸片，分装于洁净干燥的小培养皿内，50 张 / 皿，干
热灭菌后，浸在提取液中，备用。在超净台里将平板平均分为 6 个
区，对角设置对照组，用无菌镊子镊取浸有提取液的滤纸片贴在含菌
平板上，用浸有无菌水的滤纸片作对照。每菌做 3 次重复，取其平均
值。放入培养箱恒温倒置培养，细菌置 37℃培养 24h，霉菌和酵母菌
置 28℃下培养 48h，取出后测出滤纸片抑菌圈直径大小，比较抑菌效果。
2.3 最低抑菌浓度（MIC）的测定
参照谢主兰 [4] 的方法略有改动，将配置的固体培养基在 121℃、0.1
MPa 条件下灭菌 30min，当灭菌培养基冷却至 50℃左右时，在无菌条
件下准确量取不同体积的提取液加入固体培养基中，配制成浓度 5%、
2.5%、1.25%、0.625%、0.313%、0.156%、0.078% 的杏香兔耳风提取
物系列培养基，每个浓度做 3 个重复。以不加提取物溶液的培养基为
阴性对照。冷却凝固后，每平皿加入 0.1mL 的菌悬液，涂匀，将细菌
置于 37℃下培养 24h，霉菌和酵母菌置于 28℃下培养 48h，观察生长
情况以不长菌的最低提取物溶液浓度为该提取物的最低抑菌浓度。
2.4 抑菌或杀菌活性的初步探讨[5]
用滤纸片法测定杏香兔耳风提取物对四种细菌的抑菌或杀菌效
果，37℃下恒温培养24h后，再分别从平板透明抑菌圈中挑取一小块
琼脂进行液体培养18h后，再涂平板，于37℃下恒温培养24h后，观察
各平板上菌落的生长情况，有菌落生长即表示提取液对细菌具有抑菌
作用，无菌落生长即表示提取液对细菌具有杀菌作用。
3 结 果
3.1 滤纸片扩散法测定杏香兔耳风提取物的抑菌能力
3种杏香兔耳风片提取物的抑菌作用结果见表1。由表1可知3种杏香
兔耳风提取物对供试细菌都有一定的抑制作用，其中杏香兔耳风提取
物A对大肠杆菌抑菌效果最好，抑菌圈直径达到（12.2±0.27）mm，其
DOI:10.15912/j.cnki.gocm.2010.07.008
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次为金黄色葡萄球菌、沙门菌、枯草芽孢杆菌。杏香兔耳风提取物B对
金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强，抑菌圈直径达到（15.8±0.16）mm，
其次为沙门菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌。阔瓣含笑对大肠杆菌的抑
菌效果最好，抑菌圈直径达到（19.0±0.36）mm，其次为沙门菌、枯草
芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌。杏香兔耳风提取物C对啤酒酵母有微弱的
抑菌效果，抑菌圈直径为（7.2±0.15）mm。杏香兔耳风提取物A和杏
香兔耳风提取物B对霉菌和酵母菌以及杏香兔耳风提取物C对霉菌都无
明显的抑菌作用。
表1 3种杏香兔耳风提取物的抑菌效果
供试菌种
抑菌圈直径(mm)
提取物A 提取物B 提取物C CK
大肠杆菌 12.2±0.27 9.7±0.12 19.0±0.36 -
金黄色葡萄球菌 11.2±0.48 15.8±0.16 8.7±0.33 -
枯草杆菌 10.7±0.21 8.8±0.29 9.8±0.24 -
沙门菌 11.0±0.25 10.3±0.24 11.3±0.34 -
黑曲霉 - - - -
桔青霉 - - - -
啤酒酵母 - - 7.2±0.15 -
注：“-”表示无抑菌作用
3.2 最低抑菌浓度（MIC）的测定
杏香兔耳风提取物A、杏香兔耳风提取物B和杏香兔耳风提取物C
对供试菌的最低抑菌浓度实验结果见表2~4。表2~4中的数据进一步表
明，3种提取物对细菌的抑菌能力明显大于酵母菌和霉菌。从表2可以
看出，随着提取物溶液浓度的增加，3种杏香兔耳风提取物抑菌作用
相应增强，杏香兔耳风提取物A对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和沙门
菌的最低抑菌浓度（MIC）为0.313%，对枯草芽孢杆菌为0.625%；杏
香兔耳风提取物A浓度较高时对酵母菌也有一定的抑菌作用，其MIC
为10%。从表3可知，杏香兔耳风提取物B对金黄色葡萄球菌的MIC为
0.156%，对沙门菌的MIC为0.625%，对大肠杆菌和枯草杆菌的MIC
为1.25%。由表4可以看出，杏香兔耳风提取物C对大肠杆菌的MIC为
0.156%，对金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌和沙门菌的MIC分别为
1.25%、0.625%和0.313%；对酵母菌的MIC为2.5%。可见3种提取物在
较低浓度下对细菌都有较明显的抑制作用，在较高浓度时对酵母菌有
一定的抑制作用，对霉菌基本无抑制。
3.3 抑菌或杀菌活性的初步探讨
由表5可知，杏香兔耳风提取物A和杏香兔耳风提取物B对金黄色
葡萄球菌和枯草杆菌有杀菌作用，而对大肠杆菌和沙门菌可能是抑菌
作用；杏香兔耳风提取物C对四种细菌可能都是抑菌作用。
4 讨 论
对一种未知抑菌物质中有效成分抗菌效力的测定，通常是借鉴抗
生素微生物检定法，即利用物质抑制或杀死细菌或真菌的程度作为客
观指标来衡量物质中有效成分效力的一种方法。根据实验设计原理的
不同，检定法一般分为稀释法、比浊法和琼脂扩散法。稀释法包括液
体稀释法和固体稀释法，现在已不用来测定抗菌物质的效价，而以之
测定抗菌物质的最低抑菌浓度和最低杀菌浓度。该方法程序繁琐，实
验结果亦受多种因素影响，即使控制实验条件一致，也会因逐级稀释
表2 杏香兔耳风提取物A对供试菌的最低抑菌浓度（MIC）
浓度(%) 10.000% 5.000% 2.500% 1.250% 0.625% 0.313% 0.156% 0.078% 0.000%
大肠杆菌 - - - - - - + ++ +++
金黄色葡萄球菌 - - - - - - + ++ +++
枯草杆菌 - - - - - + ++ ++ +++
沙门菌 - - - - - - + ++ +++
黑曲霉 + + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++
桔青霉 + + ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
啤酒酵母 - + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++
注：“+++”代表菌落数很多，“++”代表菌落数较多，“+”代表菌落数较少，“-”代表无菌落
表3 杏香兔耳风提取物B对供试菌的最低抑菌浓度（MIC）
浓度(%) 10.000% 5.000% 2.500% 1.250% 0.625% 0.313% 0.156% 0.078% 0.000%
大肠杆菌 - - - - + + ++ +++ +++
金黄色葡萄球菌 - - - - - - - + +++
枯草杆菌 - - - - + ++ ++ +++ +++
沙门菌 - - - - - + ++ ++ +++
黑曲霉 + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
桔青霉 + + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++
啤酒酵母 + + ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
注：“+++”代表菌落数很多，“++”代表菌落数较多，“+”代表菌落数较少，“-”代表无菌落
表4 杏香兔耳风提取物C对供试菌的最低抑菌浓度（MIC）
浓度(%) 10.000% 5.000% 2.500% 1.250% 0.625% 0.313% 0.156% 0.078% 0.000%
大肠杆菌 - - - - - - - + +++
金黄色葡萄球菌 - - - - + ++ +++ +++ +++
枯草杆菌 - - - - - + ++ +++ +++
沙门菌 - - - - - - + ++ +++
黑曲霉 + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++ +++
桔青霉 + + ++ ++ +++ +++ +++ +++ +++
啤酒酵母 - - - + ++ +++ +++ +++ +++
注：“+++”代表菌落数很多，“++”代表菌落数较多，“+”代表菌落数较少，“-”代表无菌落
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造成的误差、物质分散的不均匀，导致所得的 MIC 值可能会有偏差。
琼脂平板扩散法是利用抗菌物质在琼脂中扩散使其周围的细菌生长受
到抑制而形成抑菌圈，根据抑菌圈大小来判断细菌和真菌对抑菌物质
的敏感程度，得出抗菌物质的抑菌作用大小和抗菌谱的一种方法。此
法简便、易操作，但因抑菌圈大小受多种因素影响，如培养基成分、
pH 值、琼脂来源和浓度、培养温度和时间、药效、药液浓度等，即
使控制条件一致，也会因不同菌种生长到肉眼可见所需时间不同、不
同物质扩散系数不同，因而精确度不够高，一般只能用于定性或初步
判断其作用强弱。因此本实验采用稀释法和扩散法共同对杏香兔耳风
提取物的抑菌效果进行检测，以求达到一个更加准确的结果。
由表 1~5 可知，3 种杏香兔耳风提取物对所选的细菌都有较强的
抑菌作用，其中杏香兔耳风提取物 A 对大肠杆菌抑菌效果最好，杏香
兔耳风提取物 B 对金黄色葡萄球菌的抑菌效果最好，杏香兔耳风提取
物 C 对大肠杆菌的抑菌效果最好，其抑菌圈直径分别为（12.2±0.27）、
（15.8±0.16）、（19.0±0.36）mm，最低抑菌浓度分别为 0.313%、0.156%、
0.156%。但是 3 种杏香兔耳风提取物对酵母菌的抑制作用不强，对霉
菌基本无抑制作用。杏香兔耳风提取物 A 和杏香兔耳风提取物 B 对金
黄色葡萄球菌和枯草杆菌杀菌作用，而对大肠杆菌和沙门菌可能是抑
菌作用 ；杏香兔耳风提取物 C 对 4 种细菌可能都是抑菌作用。因此，
3 种杏香兔耳风提取物具有良好的临床开发应用价值。
参考文献
[1] 沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验[M].北京:高等教育出版社,
1999.
[2] 范秀容,李广武.微生物学实验[M].2版.北京:高等教育出版社,
1989.
[3] 姚淑敏.芦荟提取物抑菌作用的研究[J].食品科学,2002,23(4):
137-139.
[4] 谢主兰,吴文龙.榕树叶抑菌作用的试验研究[J].食品研究与开
发,2004,23(2):7-9.
[5] 胡静丽.杨梅叶提取物抑菌作用的研究[D].杭州:浙江大学,2002.
表5 3种杏香兔耳风提取物的抑菌或杀菌的初步探讨
杏香兔耳风提取物A 杏香兔耳风提取物B 杏香兔耳风提取物C
大肠杆菌 + + +
金黄色葡萄球菌 - - +
枯草杆菌 - - +
沙门菌 + + +
注：“-”代表无菌落，“+”代表有菌落
对乙酰氨基酚为苯胺类解热镇痛药 [1]，具有良好的解热镇痛作用，
临床用于发热头痛、风湿痛、神经痛等，其毒性低于非那西丁，且对
NSAID 过敏的哮喘患者和儿童也比较安全。对乙酰氨基酚的胃肠不良
反应较少，近几年对其毒副作用的研究和新用途的研究在不断深入，
穆兆英等 [2] 报道１例对乙酰氨基酚致胃出血病例 ；王士凡等 [3] 曾报道
此药可引起血小板减少性紫癜，停药后患者恢复正常。此药物过量或
长期服用可引起肝脏损害，严重者可致肝昏迷甚至死亡，所以使用时
应注意 [4]。市场上出现的解热镇痛药“小儿对乙酰氨基酚灌肠液”退
热效果好，毒副作用小，避免口服所致的胃肠道不良反应，适合儿科
患者使用，而该药的工艺简单清楚，含量测定准确，我们仿制的制剂
所做的加速稳定性和长期稳定性试验结果都符合标准规定，仿制此药
有理论依据和试验依据。高效液相色谱法对对乙酰氨基酚进行了定量
分析，为该制剂质量标准的制定提供了方法和依据。一些对乙酰氨基
酚高效液相色谱法的质量标准控制方法的参考，如下：
色谱条件一[5]：色谱柱：ZORBAX SB2C18（416mm×250mm，
5μm）；流动相：甲醇-水（10∶90）；流速：1.0mL/min；检测波
长：249nm；进样量为20μL；理论板数按对乙酰氨基酚峰计算应不 黑龙江省哈尔滨市红十字中心医院药剂科（150076）
小儿对乙酰氨基酚灌肠液质量标准研究
陈 滨 杨飞雪
【摘要】目的 建立对乙酰氨基酚质量标准控制方法。方法 采用高效液相色谱法测定对乙酰氨基酚的含量：用十八烷基硅烷键合硅胶为填
充剂；以甲醇 -0.75% 醋酸溶液（25 ∶ 75）为流动相；检测波长为 250nm。结果 对乙酰氨基酚在 0.4~2.4μg（R=0.9999）范围有良好的
线性关系，平均回收率为 98.42%，RSD=0.69%（n=6）。结论 方法简单、快速、准确、专属性强，适用于乙酰氨基酚的质量标准控制。
【关键词】对乙酰氨基酚；质量标准；高效液相色谱法
中图分类号：R927.11 文献标识码：B 文章编号：1671-8194（2010）07-0047-03
低于3000。
色谱条件二[6]：以Kromasil-C18柱（150mm×416mm，5μm），乙
腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液-三乙胺（10∶90∶0.12）为流动相，流
速1.0mL/min，检测波长222nm。
色谱条件三[7]：色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm，5µm），流动
相为甲醇-水（73∶27），检测波长为264nm。
1 材料与仪器
1.1 药品
对照品 ：对乙酰氨基酚（C8H9NO2）（110754-200219）购于中国
药品生物制检定所。供试品为黑龙江省医药工业研究所分析室制备
（批号 20061201）。
1.2 试剂
甲醇：色谱纯；醋酸溶液：分析纯；水为重蒸水，用前经 0.45μm
微孔滤膜滤过。
1.3 仪器