全 文 ：兖州卷柏（Selaginella involven Spring）为卷柏
科植物兖州卷柏的全草，与被《中国药典》收载的卷
柏 S.tamariscina(Beauv.)Spring、垫状卷柏 S.pulvinata
(Hook.et Grev.)Maxim 等卷柏属植物具有止血 、抑
菌、消炎、抗肿瘤、抗突变、降血糖、免疫和镇痛等药
理活性。 卷柏属化学成分主要为以穗花杉双黄酮
（amentoflavone）为主的双黄酮类化合物，穗花杉双
黄酮具有抗肿瘤、抗炎、抗菌、血管舒张作用等生理
活性[1-5]，是卷柏类药材的特征性成分。 本文建立一
种快速有效的穗花杉双黄酮分析方法，比较生长季
节兖州卷柏中穗花杉双黄酮的含量，从而为兖州卷
柏的质量控制提供理论依据。
1仪器与试剂
1.1 仪器
Agilent 1200 型高效液相色谱仪 (配备低压四
不同生长季节兖州卷柏中穗花杉双黄酮的含量变化
龙红萍 1,2，徐康平 1，李 炜 3，李 静 1，邝俊维 1，谭桂山 1
（1. 中南大学药学院，湖南 长沙 410013；2. 永州职业技术学院药学系，湖南 永州 425100；
3. 湖南九芝堂医药有限公司，湖南 长沙 410008）
【摘要】 目的：建立兖州卷柏中特征成分穗花杉双黄酮的含量测定方法，比较不同生长季节兖州卷柏中穗花双黄
酮的含量。 方法：采用HPLC法对样品中总黄酮醇苷和总内酯进行定量分析。 对样品中穗花双黄酮进行定量分析。 结
果：5月份穗花杉双黄酮含量最高，9月份后穗花杉双黄酮含量有所降低，12月份穗花杉双黄酮含量最低。结论：不同季
节兖州卷柏中穗花杉双黄酮含量差异较大，此结果为适时采收兖州卷柏质量评价和合理开发利用提供依据。
【关键词】 兖州卷柏；穗花杉双黄酮；含量测定；高效液相色谱法
【中图分类号】 R529.3 【文献标识码】A 【文章编号】1673-016x(2011)01-0076-03
Changes of amentoflavones content of selaginella involven spring in different
growing season
Long Hongping1,2, Xu Kangping1, Li Wei1, Li Jing1, Kuang Junwei1, Tan Guishan1
（1. School of Pharmaceutical Sciences, Central South University, Changsha 410013, China; 2. Pharmacy Department, Yongzhou
Vocational and Technical College, Yongzhou 425100, China; 3. Hunan Jiuzhitang Pharmaceutical Co. Ltd. Changsha 410008, China）
[Abstract] Objective To compare the amentoflavone content changes of Selaginella involven Spring in the
different growing season. Methods Using HPLC to quantitative analysis the amentoflavone of the sample. Results
The amentoflavone content was highest in May, began reducing from September and was lowest in December .
Conclusion There were significant different of amentoflavone content in Selaginella involven Spring between
different seasons, this result can be used to provide the basis to gather the Selaginella involven Spring at the right
moment and reasonably developed .
[Key words] Selaginella involven Spring; amentoflavone; change of content
收稿日期：2011-03-01
通讯作者：谭桂山，E-mail：tgs395@yahoo.com.cn.
湖南师范大学学报（医学版）
J Hunan Normal Univ（Med Sci）
2011，8（1）76
元泵、自动进样器、柱温箱、DAD 检测器、ChemSta-
tions 色谱工作站， 美国安捷伦科技有限公司)，U-
VProbe-2450紫外可见分光光度仪(日本岛津公司)；
BP211D电子天平(0.00001 g，德国塞多利斯公司)。
1.2 试剂和药物
穗花杉双黄酮（amentoflavone）对照品（自制，
UV、IR、H1NMR、C13NMR 鉴定结构， 经 HPLC 检
测，归一法计算纯度＞99.0%）。 乙腈为色谱纯，水为
纯净水并经 0.45μm 水系滤膜过滤，其余试剂为分
析纯。兖州卷柏药材 于 2009年 4~12月的 15日采
自福建，经本院李劲平副教授鉴定为 Selaginella in-
volven Spring。
2方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Agilent C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)，
流动相：乙腈-0.2%醋酸水溶液，梯度洗脱（CAN%:
0 min 25%, 20 min 30%）， 流速为 1.2 mL/min，柱
温：25℃，检测波长为 338 nm，进样量为 10 μL。
2.2 对照品溶液的配制[6]
精密称取穗花杉双黄酮约 30.00 mg， 置 100
mL 容量瓶中，甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，
经 0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取药材粗粉（过 20 目筛）约 10.0 g，至
索氏提取器中，加氯仿 100mL 回流脱脂至无色，滤
过，残渣挥净氯仿后加入甲醇 100 mL，加热回流提
取 3 次，60 min/次，合并提取液，趁热过滤，减压浓
缩， 转移至 50 mL容量瓶中， 甲醇稀释至刻度，摇
匀，经 0.45微孔滤膜滤过。
2.4 方法可行性考察
精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10 μL，按
上述色谱条件进样， 穗花杉双黄酮色谱理论塔板数＞
10000， 对称因子为 1.04， 与相邻杂质峰的分离度＞
1.5，对照品穗花杉双黄酮以及供试品色谱图见图 1。
2.5 线性关系
精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10、20、40 μL，
按上述色谱条件分别进样测定峰面积，以峰面积(Y)
为纵坐标、进样量(X) (μg)为横坐标进行线性回归求
得线性方程为：Y=2018X＋9.54（r=0.99998）。 结果表
明，进样量在 0.06~1.2 μg范围内线性关系良好。
2.6 回收率试验[7]
精密称取已知穗花杉双黄酮含量的兖州卷柏叶粉
末 5 g，精密加入一定量的穗花杉双黄酮对照品（加
入量为样品含量的 80%、100%、120%）， 按2.3项
下供试品溶液的配制方法制备和测定， 计算回收
率，结果见表 3。 结果表明本法回收率良好。
2.7 精密度试验
分别精密吸取2.2对照品溶液，在同一天连
续进样 6 次及连续 3 天，按2.1项下色谱条件测
定，记录色谱图。 测定穗花杉双黄酮峰面积值。 结
果：日内 RSD=0.51%(n=6)，日间 RSD=0.60%(n=3)，
表明本方法精密度较高。
2.8 重复性实验
取同一批兖州卷柏（7 月采集），分别按2.3项
图 1 高效液相色谱图
A, 对照品; B, 供试品; 1, 穗花杉双黄酮
表 3 穗花杉双黄酮回收率试验结果
编号
1
2
3
4
5
6
7
8
9
取样量（μg）
5.00
5.00
5.00
5.10
5.10
5.10
5.00
5.00
5.00
样品含量（μg）
11.85
11.85
11.85
12.087
12.087
12.087
11.85
11.85
11.85
加入量（μg）
9.696
9.696
9.696
12.12
12.12
12.12
14.544
14.544
14.544
测得总量（μg）
21.463
21.421
21.504
24.088
24.231
24.053
26.3053
26.190
26.279
回收率（%）
99.14
98.71
99.57
99.02
100.2
98.73
99.39
98.6
99.21
平均回收率（%） RSD(%)
99.17 0.51
不同生长季节兖州卷柏中穗花杉双黄酮的含量变化 龙红萍等 77
下方法平行制备成 5份供试品溶液。精密吸取供试
品溶液 10 μL 注入液相色谱仪，按2.1项下色谱
条件测定，并记录峰面积，采用外标法以峰面积计
算穗花杉双黄酮的含量。 结果 RSD＝0.48%(n＝5)，表
明本方法重复性良好。
2.9 稳定性试验
分别精密吸取供试品溶液 10 μL，室温下于 0、
2、4、8、12、24、48 h 注入液相色谱仪，按2.1项下
色谱条件测定，并记录峰面积。结果 RSD＝0.19%(n=
7)，表明供试品溶液 48 h内稳定性良好。
2.10 供试品含量测定[3-4]
精密吸取对照品溶液与供试品溶液，按上述色
谱条件进样测定，外标法计算含量，结果见表 5。
3 讨 论
3.1 提取方法选择
在提取方法的考察试验中，分别考察了超声与
加热回流提取，提取 2、3、4次，提取 30、60、90 min。
结果表明，回流提取 3 次，每次 60 min 可将穗花杉
双黄酮提取完全， 且提取前先用氯仿脱脂处理，色
素类杂质干预少。
3.2 意义
由测定结果可以看出不同季节的兖州卷柏，其
有效成分穗花杉双黄酮的含量也存在很大变化。 5
月份含量最高，9 月份后含量有所降低，12 月份黄
酮含量最低；这说明 4~7月有利于穗花杉双黄酮的
积累。为了兖州卷柏的质量，必须在 4~7月采收。该
方法操作简单、快速、准确。灵敏度高，重现性好，可
为兖州卷柏的质量控制提供理论依据。
参考文献：
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部, 2010: 157.
[2] 徐智，贾素洁，谭桂山, 等.垫状卷柏中双黄酮的药理活性
研究[J]. 中国现代医学杂志, 2004, 14(4): 88-90.
[3] Cao Y, Tan, Chen J, et al. Bioactive flavones and bi-
flavones from Selaginella moellendorffii [J]. Hieron.Fito,
2010, 81(4): 253-258.
[4] Cao Y, Tan, Chen J, et al Anitimicrobial selaginellin
derivative from Selaginella pulvinata[J]. Bioorg Med Chem
Lett, 2010, 20(8): 2456-2460.
[5] Tan W J, Xu J C, Li L, et al. Biaoctive compounds of in-
hibing xanthine oxidase from Selaginella labordei [J]. Nat
Prod Res, 2009, 23(4): 393-398.
[6] 孙兴力, 周金彩, 龙红萍, 等. 不同生长季节银杏叶中总
黄酮醇苷和总内酯的含量变化 [J]. 中南药学, 2009,7(8):
564-567.
[7] 张建华, 杨帆, 徐康平, 等. 高效液相色谱法快速测定卷
柏药材中穗花杉双黄酮含量 [J]. 中南药学 , 2009, 7(7):
487-489.
表 5 供试品测定结果
采集时间
4 月
5 月
6 月
7 月
8 月
9 月
10 月
11 月
12 月
样品数
6
6
6
6
6
6
6
6
6
总黄酮醇含量 (%)
2.333±0.224
2.869±0.288▲
2.560±0.194
2.3789±0.188
2.3676±0.187
2.3088±0.164
2.1632±0.158
2.1187±0.146
1.9535±0.134
湖南师范大学学报（医学版），2011，8（1）78