全 文 ：仲恺农业技术学院学报 , 17(4):55～ 58 , 2004
Journal of Zhongkai Agrotechnical College
文章编号:1006-0774(2004)04-0055-04
　
收稿日期:2004-06-02
作者简介:陈新芳(1968-), 女 , 广东兴宁人 , 实验师.
五指毛桃花粉扫描电镜样品的制备
陈新芳1 , 刘春玲2 , 杨秉耀1
(1.华南农业大学 测试中心 , 广东 广州 510642;
2.广州中医药大学 中药学院 , 广东 广州 , 510405)
摘要:采用离心法和双固定临界点干燥法对五指毛桃(Ficus simplicissima Lour)的花粉进行了制样
研究.结果表明 , 双固定临界点干燥法效果较理想 ,花粉形态非常清晰 、饱满 、立体感强.
关键词:五指毛桃(Ficus simplicissima Lour);花粉;扫描电镜;样品制备
中图分类号:Q944.42　　　　　文献标识码:B
　　应用扫描电镜观察植物微形态特征是植物系统分类学研究中不可缺少的手段之
一[ 1 ～ 3] .而扫描电镜观察到的这类特征是否真实 、可信 ,关键在于样品的制备.由于五指毛
桃(Ficus simplicissima Lour)的花粉粒极小 ,肉眼难以看到 ,故制备这样的样品有一定的难度.
花粉扫描电镜样品制备的方法有离心法 、风干法[ 4～ 8] 、新鲜花粉直接制片[ 9～ 11] 、戊二醛固定
法[ 12 ,13] 、醋酸酐分解法[ 13 ,14]等.迄今为止 ,国内尚未见有关五指毛桃花粉扫描电镜研究的
报道 ,作者以五指毛桃的花粉粒为例 ,探讨扫描电镜样品的制备技术 ,从而找出一种较理想
的制备方法 ,为其他类似的细微样品制备提供理论依据.
1　材料与方法
1.1　供试样品
　　新鲜五指毛桃(Ficus simplicissima Lour)雄花若干朵 ,采集于广东省河源市源城区桂山林
场.
1.2　方法
1.2.1　离心法　在显微镜下取五指毛桃的花药 ,并将花药里的花粉粒刮出 ,放入φ(戊二醛)
=0.04的溶液中固定 4 h ,在 1 500 r/min下离心 5 min ,然后用 0.1 mol/L的磷酸缓冲液漂洗
3次 ,每次 10 min ,再用ω(四氧化锇)=0.01后固定 1.5 h ,用 0.1 mol/L的磷酸缓冲液漂洗 3
次 ,每次 10 min ,分别经φ(乙醇)=0.5 、0.7 、0.8 、0.9 、1.0进行梯度脱水各 1次 ,每次 10 min
(上述每一步都要离心),再取底部的液体滴到干净的铜台上自然干燥.
1.2.2　双固定临界点干燥法　在显微镜下切取带有五指毛桃花粉粒的花药 3个 ,并用解剖
针刺破 ,放入φ(戊二醛)=0.04的溶液中固定4 h ,然后用0.1mol/L的磷酸缓冲液漂洗3次 ,
每次 10 min ,再用ω(四氧化锇)=0.01后固定 1.5 h ,用 0.1mol/L 的磷酸缓冲液漂洗 3次 ,每
次 10 min ,分别经φ(乙醇)=0.5 、0.7 、0.8 、0.9 、1.0进行梯度脱水各1次 ,每次 10 min ,最后用
醋酸正戊酯过渡 2次 ,每次 15 min ,用液化 CO2 在 HCP-2型临界点干燥仪中进行样品干燥
2.5 h ,装台.
　　上述方法都经 IB.5型离子溅射仪喷金 ,并在 Philips XL 30环境扫描电子显微镜下观察
拍照 ,加速电压为 15 kv.
2　结果
　　通过扫描电镜观察发现 ,离心法制备出的花粉粒表面不干净 , 视野不美观 ,花粉粒边缘
不完整 ,因表面粘有大量的花粉囊壁和花药碎片等杂质 ,而且表面已塌陷 、严重变形 ,结构不
够清晰(图 1).而双固定临界点干燥法制备出的花粉粒形态非常清晰 、饱满 ,表面有细微突
起 ,基本无变形 , 立体感强(图 2 、3).在电镜下 ,正常的花粉粒呈近球形和长球形两种类型 ,
它们的长径约 7.9μm ,短径约 6.6 μm ,在长径的顶部有一个圆形的萌发孔(图 4).
图 1　离心法制出的五指毛桃花粉(Bar=10 μm)
Fig 1　Ficus simplicissima Lour pollen prepared
with centrifugation
图 2　双固定临界点干燥法制出的五指
毛桃花粉(Bar=10μm)
Fig 2　Ficus simplicissima Lour pollen prepared with
double fix preparation technique
3　讨论
　　花粉扫描电镜样品的制备方法有多种 ,其中离心法较为常用.本文有目的地选用离心
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法和双固定临界点干燥法.
图 3　放大的五指毛桃花粉(Bar=10μm)
Fig 3　Ficus simplicissima Lour pollen by magnification
图 4　五指毛桃花粉的萌发孔(Bar=2μm)
Fig 4　An aperture of Ficus simplicissima Lour pollen
　　用离心法制备的五指毛桃花粉表面不干净 ,是因为在取样过程中 ,把花粉囊壁和花药碎
片也一起刮了下来 ,而且操作的每一步骤都需离心 ,故花粉囊壁和花药碎片就粘在花粉表
面.所有的花粉表面已塌陷 、变形 ,是因为没有进行临界点干燥处理 ,又由于花粉组织幼嫩 ,
其本身含水分较多 ,在样品自然干燥处理过程中 ,因表面张力的作用 ,其表面结构易发生皱
缩 、塌陷 、变形等.故这种方法较适用于那些细胞壁和蜡质层较厚的植物组织.双固定临界
点干燥法制备的花粉表面干净 ,形态非常清晰 、饱满 ,基本无变形 ,立体感强.首先 ,在取样
过程中 ,只取出花药 ,然后用解剖针刺破花药 ,以便花粉能释放出来.由于没有弄破花粉囊
壁 ,因而花粉表面基本无杂质 ,保持照片的美观.其次 ,采用临界点干燥法基本消除了样品
的表面张力 ,从而保存了样品良好的微形态结构.此法有别于常规的组织制样 ,取五指毛桃
的花药作为一个组织块(刺破花药 ,以便花粉释出),操作简单 、方便 ,适合开展花粉形状和大
小方面的研究 ,且观察时间不受季节的影响.故此法较适用于那些比较幼嫩和含水较多的
动植物组织.笔者认为双固定临界点干燥法是进行细微花粉研究较理想的方法.至于是否
还有其他更好的方法 ,尚有待进一步研究.
参考文献:
[ 1] 　袁永明 , 彭泽祥 , 陈家瑞.豆科黄华族植物叶解剖特征及其系统学与生态学意义[ J] .植物学报 ,
1991 , 33(11):840-847.
[ 2] 　方炎明.我国金缕梅科叶部微形态的研究———气孔器的表面形态[ J] .南京林业大学学报 , 1990 , 14
(4):30-35.
[ 3] 　王贤荣 ,向其柏.樱属植物叶腺体形态研究及其在分类中的意义[ J] .南京林业大学学报 , 1997 , 21
(4):63-67.
57第 4 期 陈新芳 , 等:五指毛桃花粉扫描电镜样品的制备 　　
[ 4] 　邹乐敏 , 张西民 ,张志德 , 等.根据花粉形态探讨梨属植物的亲源关系[ J] .园艺学报 , 1986 , 13(4):
219-224.
[ 5] 　MARCUCCI M C.Distinguishing apple clones and cultivars by surface morphology and pollen physiology[ J] .J
Amer Soc Hort Sci , 1984 , 109(1):10-19.
[ 6] 　汪小兰.几种金花茶花粉的扫描电镜观察[ J] .武汉植物学研究 , 1985 , 3(2):131-135.
[ 7] 　施宗明 ,范眸天.芒果品种的花粉形态[ J] .云南植物研究 , 1998 , 20(1):63-66.
[ 8] 　HAROLD W F.Identification of clones within four fruit species by pollen exine pattens[ J] .J Amer Soc Hort Sci ,
1977 , 102(5):552-560.
[ 9] 　汪祖华 , 周建涛.桃种质的亲源演化关系研究———花粉形态分析[ J] .园艺学报 , 1990 , 17(3):161-
168.
[ 10] 陆修闽 , 陈青瑛 , 张丽梅 ,等.枇杷杂交新品种“早钟 6 号”与亲本花粉形态观察比较[ J] .园艺学报 ,
2002 , (6):271-273.
[ 11] 周建涛 , 汪祖华.核果类种花粉形态研究初报[ J] .江苏农业学报 , 1990 , 6(3):57-63.
[ 12] 罗新书 ,陈学森 , 郭延奎 ,等.杏品种孢粉学研究[ J] .园艺学报 , 1992 , 19(4):319-325.
[ 13] 束际林 ,陈　亮 , 王海思 ,等.茶树及其他山茶属植物花粉形态 、超微结构及演化[ J] .茶叶科学 , 1998 ,
18(1):6-15.
[ 14] 康素红 ,包满珠 , 陈龙清 ,等.梅花品种分类的花粉学研究[ J] .园艺学报 , 1997 , 24(2):170-174.
Studies on the specimen preparation techniques of scanning
electron microscope of Ficus simplicissima Lour
CHEN Xin-fang1 , LIU Chun-ling2 , YANG Bing-yao1
(1.Instrumental Analysis &Research Center , South China Agricultural University , Guangzhou 510642 , China;
2.College of Chinese Traditional Medicine , Guangzhou University of Traditional Chinese
Medicine , Guangzhou 510405 , China)
Abstract:Ficus simplicissima Lour pollen prepared with centrifugation and critical point dryer of dou-
ble fix preparation technique were studied in this paper.The results showed that critical point dryer of
double fix preparation technique was ideal.
Key words:Ficus simplicissima Lour;pollen;scanning electron microscope(SEM);specimen prepa-
ration
【责任编辑　冯元璋】
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