全 文 ：【摘要】目的:了解松塔球提取物的抑突变作用 。 方法:不同剂量(50、250和 500 mg/kg)的松塔球碱性提取物溶液与环磷酰胺(50
mg/kg)联用 ,连续 4 d腹腔注射昆明小鼠 , 取骨髓制片 ,计数含微核的骨骼嗜多染红细胞 。 结果:50 mg/kg松塔球提取物溶液和环磷
酰胺联用时与环磷酰胺组比较微核率差异无统计学意义(P>0.05);松塔球提取物 250和 500 mg/kg剂量与环磷酰胺联用组微核率明
显低于环磷酰胺组(P<0.05),其微核抑制率分别为 22.35%、65.35%。雌性和雄性小鼠组间微核率差异无统计学意义(P>0.05)。 结
论:松塔球提取物可有效抑制环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞微核的产生 , 并且存在明显的剂量_反应关系 ,具有抑突变性 , 提示松塔球
提取物对肿瘤的防治可能具有积极的作用 。
【关键词】松塔球提取物;小鼠;微核;环磷酰胺;抑突变
中图分类号:R996.2 文献标识码:A 文章编号:1004-616X(2010)01-0059-03
【ABSTRACT】 OBJECTIVE: To investigate the anti_mutation effect of the extracts of pinecones.METHODS: The
anti_mutation effect of extracts of pinecones was measured by micronucleus test , with different doses of pinecones alkaline
extract solution(50、 250 and 500 mg/kg) as samples , cyclophosphamide as the positive group.RESULTS: The mice
marrow cells MN rate of high , middle and low doses of extract solution plus cyclophosphamide treatment groups:16‰±
0.58‰, 34.75‰±0.85‰ and 40.25‰±0.48‰, respectively.Compared with physiological saline group the difference
in MN rate was statistically significant (P <0.01).For extract solution in low dose group compared with CP group , the
difference was not statistically significant (P>0.05) .In the high and middle dose groups , the difference was
statistically significant(P<0.05), inhibition rates were 22.35% and 65.35%, respectively.Between male and female
mices the difference was not statistically significant (P >0.05).CONCLUSION:The extracts of pinecones could suppress
mice marrow cells induced by cyclophoshomide , with an obvious dose_response relation.It also showed anti_mutation
effects.The extracts of pinecones may have positive effect on tumor prevention.
【KEY WORDS】 The extracts from pinecones;mice;micronuclei;cyclophoshomide;anti_mutation
近年来 , 研究发现松塔球提取物含有高效低毒的抗
癌活性成分 ,松塔球提取物含皂甙 、酚类 、挥发油 ,挥发油
中含柠檬烯(limonene)等 [1]。微核(micronuclei ,MN)是真核
类生物细胞中经辐射或化学药物的作用而产生的一种
异常结构 [2] ,微核的形成与肿瘤的发生有一定的联系 。微
核是恶变的先兆之一 ,先于癌细胞出现 ,早于临床症状出
现之前 [3]。因此 , 研究松塔球提取物拮抗微核形成的作
用 ,对利用松塔球提取物防治癌症具有积极的意义 。
收稿日期:2009-07-12;修订日期:2009-10-12
基金项目:国家自然科学基金(30860365)
作者简介:昌思思(1986- ),女 ,汉族 ,云南省呈贡人 ,学士 ,研究方向:免疫
规划。
＊Correspondence to:MA Zhi_min , E-mail:mazhimin2125499@yahoo.com.cn
The anti -mutation effect of
extracts from pinecones
CHANG Si-si 1 ,MA Zhi-min1 , ＊, SONG Zheng -rui 1 ,
LIU Guang -ming 2
(1 .School of Public Health , Dali University , Dali 671000 ;
2.School of Pharmacy , Dali University , Dali
671000 , China)
松塔球提取物的
抑突变性研究
昌思思 1/马志敏 1 , ＊/宋正蕊 1/刘光明 2
(1.大理学院公共卫生学院 , 云南 大理 671000;
2.大理学院药学院 ,云南 大理 671000)
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癌变 畸变 突变
检测研究
CARCINOGENESIS, TERATOGENES IS ＆ MUTA GENESIS
第 22卷 第 1期 1月1 O
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癌变 畸变 突变
检测研究
目前 ,肿瘤治疗主要以手术 、放疗 、化疗和生物治疗
为主 ,但其疗效欠佳 ,且副作用大 、毒性高 [ 4]。随着对癌
症研究的深入 , 如何从天然产物中提取有效成分 , 确定
中药抗肿瘤最强的部位是当今肿瘤研究的热点之一。我
国松塔资源丰富 , 其抗肿瘤活性提取物价格低廉 , 如何
结合中国的现状 , 充分利用本国资源 , 发掘中国医药学
宝库 ,为中药基础研究的焦点。通过小鼠微核试验来探
讨松塔球提取物对环磷酰胺诱发微核的影响 ,研究松塔
球提取物的抗突变作用 ,从而为研制出高效 、低毒 、廉价
的抗肿瘤药物累积资料 。
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 受试物 云南松 (pinus yunanensis)的松塔
球碱性提取物 D(黑色膏状物 ,含木脂素 、二萜类等混合
物),由大理学院药学院刘光明教授提供。称取研磨后的
药品溶于生理盐水中 , 配制成 30%的溶液 , 4 ℃低温保
存备用 ,用前水浴加热溶解。
1.1.2 主要试剂 环磷酰胺(cyclophoshomide , CP),
上海华联制药有限公司生产的结晶粉剂 , 临用时用生理
盐水稀释至 20 mg/ml;10%Giemsa染液 , 上海三爱思
试剂有限公司生产;甲醇 ,天津市风船化学试剂科技有限
公司生产;小牛血清 ,云南邓川蝶泉生物制品公司生产。
1.1.3 实验动物 昆明种成年小鼠 24只 ,由大理学院
实验动物中心提供 ,体重(32.64±0.99)g ,雌雄各半。
1.2 方 法
1.2.1 实验动物饲养条件 小鼠以 613昆明正大有
限公司 (中泰合作)饲料饲养 。小鼠生活区饲养温度
17 ～ 25 ℃。
1.2.2 实验分组 将 24只昆明种小鼠随机分成6
组 ,每组 4只 ,雌雄各半 。分别为:阴性对照组(生理盐
水), 阳性对照组(CP , 50 mg/kg), 松塔球提取物组
(250 mg/kg),松塔球提取物各剂量(50 、250 、500 mg/
kg)分别与 CP(50 mg/kg)联用组 ,具体见表 1。
1.2.3 实验方法 基于动物短期给药剂量可控制 , 且
吸收较为完全 , 操作容易等特点 , 故各处理组给药方式
均为腹腔注射 ,每天 1次 ,连续给药 4 d ,末次给药后 24
h ,颈椎脱臼法处死小鼠 ,取胸骨 , 分别将其骨髓挤于预
滴小牛血清的载玻片上混匀直接推成骨髓片 ,每只小鼠
各制片 2张 。自然干燥后 ,甲醇固定 10 m in ,Giemsa 染
液染色 8 ～ 15 min ,晾干待检 。
1.2.4 微核观察 油镜下双盲法计数含有微核的骨
髓嗜多染红细胞 (PCE), 每只小鼠胸骨骨髓片计数 1
000个细胞 , 每组雌雄动物分别计数微核率的均值 , 雌
雄之间无明显性别差异时合并计算 ,最后计算各组的微
核率(MCN , ‰)和微核抑制率(IR , %)。
1.2.5 统计学方法 实验数据使用 SPSS 16.0软件
分析 ,显著性检验用 χ2检验 。
2 结 果
2.1 松塔球提取物对 CP诱发小鼠骨髓 PCE微核的
抑制作用
结果见表 2 , 松塔球提取物 D 溶液处理组小鼠骨髓
PCE 的微核率较阴性对照组低(P<0.05),说明松塔球
提取物 D 对小鼠骨髓 PCE微核的产生有一定的抑制作
用。CP 阳性对照组的微核率与 NS 阴性对照组的比较
微核率差异有统计学意义(P<0.01)。低剂量的松塔球
提取物 D溶液加CP 组与 CP 阳性对照组比较微核率差
异无统计学意义(P >0.05), 说明低剂量还不足以抑制
CP 诱发的小鼠骨骼 PCE微核的产生;中 、高剂量的松
塔球提取物 D溶液加CP 组微核率明显低于 CP 对照组
(P <0.05), 说明中 、高剂量松塔球提取物 D 能明显抑
制CP 诱发的小鼠骨骼 PCE微核的产生。
CARCINOGENESIS, TERATOGENES IS ＆ MUTA GENESIS
Vol.22 No.11月1 O
3 讨 论
化学致癌物可引起生物大分子的损伤 、DNA 链断
裂 、染色体畸变 ,使机体出现各种损伤 ,引起突变 ,诱发
肿瘤 ,造成早衰和寿命缩短等现象 。骨髓细胞对化学致
癌物十分敏感 , 受到损伤后可在细胞 、分子水平发生损
伤[ 5]。据报道 , 化学致癌物可以引起染色体异常 、骨髓
细胞微核率增加等表现 [ 6-7]。
本研究提示 , CP 阳性组与 NS 阴性组 、不同剂量
松塔球提取物 D溶液加 CP 组与 NS 组比较微核率差
异均有统计学意义(P <0.05), 符合实验设计要求 , 实
验系统是可靠的。小鼠胸骨骨髓的 PCE 微核试验结果
表明:松塔球提取物 D 溶液在低剂量时对 CP 所致小鼠
微核增加没有拮抗作用;在中 、高剂量时有拮抗作用;当
松塔球提取物 D溶液剂量大于 250 mg/kg , 浓度大于
10%时 ,随其含量的增加其抑制作用也增加 ,存在剂量_
反应关系;各处理组中小鼠雌雄比较微核率差异均无统
计学意义(P>0.05),说明性别差异对松塔球提取物的
抑突变活性无影响。这可为今后对抗肿瘤药物进行药效
经济学研究提供依据 。我们的实验说明当松塔球提取物
D 溶液剂量大于 250 mg/kg ,浓度大于 10%时 , 该药品
可能对肿瘤的发生具有预防作用 。
综上所述 , 松塔球提取物可有效抑制环磷酰胺诱导
的小鼠骨髓细胞微核的产生 , 具有抑突变性 , 并且存在
明显的剂量_反应关系 , 在雌雄性别之间微核率差异无
统计学意义 。从而说明松塔球提取物对肿瘤的防治可能
具有积极的作用 。
参考文献
[ 1] 周勇义 , 郭启华 .抗癌药物研究动态简介 [ J] .化学教育 ,
2004 , 5:10-13.
[ 2] 杨 鑫 ,丁 怡 ,张东明 ,等 .华山松松塔化学成分的研究
[ J] .中国中药杂志 ,2005 ,30(7):518-520.
[ 3] 叶幼珠 .谈谈我国抗癌药物发展趋势[ J] .海峡药学 , 1995 , 3
(7):63-64.
[ 4] 杨 杰 ,高 峰 ,孙 洋 ,等 .中药抗癌的分子药效探讨 [ J] .
中华中医药学刊 , 2007 ,25(3):577-579.
[ 5] 郑金龙 .DNA 分子水平的放射效应研究[ J] .国外医学:放射
医学核医学分册 , 1996 ,20(1):321.
[ 6] 王 冰 .电离辐射诱发哺乳动物染色体畸变[ J] .国外医学:
放射医学核医学分册 , 1998 ,22(17):81.
[ 7] 李 欣 ,张 静 .番茄红素抗突变作用的实验研究 [ J] .癌
变 ·畸变 ·突变 , 2006 , 18(4):327-330.
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2.2 松塔球提取物对不同性别小鼠骨髓细胞微
核率的影响
结果见表 3 , 各处理组中雌雄小鼠微核率比较差异
均无统计学意义(P >0.05)。镜下所见如图 1 、图2。
癌变 畸变 突变
检测研究
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