全 文 ：百分比均明显升高 ,推测 Bcl-2可能通过阻断细胞
凋亡的公共信号传递通路 ,达到抑制或阻断多种细
胞及细胞系的细胞凋亡过程。与模型组比较 ,地塞
米松组 Bcl-2总面积 、积分光密度 、面积百分比均明
显降低 ,提示地塞米松可通过抑制 Bcl-2的表达促
进细胞凋亡 。平喘灵组与模型组比较 Bc l-2的表达
无显著性差异 ,提示平喘灵可能并非通过调节 Bc l-2
的表达发挥治疗哮喘的作用 。 Fas可在多种细胞广
泛表达 ,具有介导细胞凋亡 、介导 A ICD(activa ted in-
duced cell dea th)作用 、调节炎症反应及多种免疫生
理病理作用 [ 12] 。平喘灵及地塞米松组肺组织 Eos
等炎症细胞 Fas表达明显升高 ,提示皮质激素以及
平喘灵均可诱导哮喘模型肺组织嗜酸性粒细胞 、淋
巴细胞等炎症细胞的凋亡 ,这也可能是平喘灵治疗
支气管哮喘的作用机制之一。
参考文献:
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铁苋菜对溃疡性结肠炎模型大鼠抗氧化和抗 NO自由基作用
邓　莉 , 　胡晋红* , 　鲁　莹 , 　钟延强
(第二军医大学长海医院药学部 ,上海 200433)
收稿日期:2006-01-18
作者简介:邓　莉(1973～ ),女 ,博士;研究方向:抗溃疡性结肠炎药物研究;E-m ail:lilideng2004@126. com. Tel:021-25074588转 805;
*通讯作者:胡晋红(1949～ ),女 ,教授 ,博士生导师 , E-mai l:hu jh@ smm u. edu. cn.
关键词:铁苋菜;溃疡性结肠炎;抗氧化;抗 NO;iNOSm RNA表达;大鼠
摘要:目的:考察铁苋菜的抗氧化及抗 NO作用 ,对铁苋菜治疗 UC模型机制进行初步探讨。方法:生化方法测定模型对
照组 、SPSA阳性对照药组 、铁苋菜给药高 、中 、低剂量组大鼠肠组织中 SOD、MDA、GSH-Px以及 NO、 iNOS的水平;RT-PCR
方法测定正常组 、模型组及铁苋菜中剂量给药组大鼠肠组织中 iNOS mRNA的表达。结果:铁苋菜中高剂量给药可以显
著降低模型组肠组织中 MDA的水平 , 显著升高 SOD、GSH-Px的水平;铁苋菜中 、高剂量可以显著降低模型大鼠 NO及
iNOS水平。并且铁苋菜中剂量给药组的 iNOS mRNA的表达显著低于模型组。结论:铁苋菜具有抗氧化和抗 NO作用 ,
铁苋菜通过抑制 iNOS基因表达抑制 iNOS,减少 NO过量生成 , 是铁苋菜发挥抗 UC作用的机制之一。
中图分类号:R285. 6　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)01-0036-04
Antiox idative and antin itrosative effects of Copperleaf on ulcerative colitis rats
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2007年 1月
第 29卷　第 1期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
January 2007
Vo .l 29　No. 1
DENG Li, 　HU Jin-hong* , 　LU Y ing, 　ZHONG Yan-qiang
(D epartm ent o fPha rmacy , Changha iHosp ita l, S econdM ilitaryM ed icalUn iversity, Shangha i200433 , Ch ina)
KEYWORDS:copperleaf;A calypha austra lis L;u lce ra tive colitis;antiox ida tion;NO;iNOS;rat
ABSTRACT:AIM:To investigate the antiox idative and an tinitrosative effects of coppe rleaf (Acalypha australis
L) on TNBS-induced ulce rative co litis rats. METHODS:U sing b iochem ica lme thod, the activity o f an tioxida tive
enzyme SOD, GSH-Px andMDA were de term ined in no rmal, model and three rat’ s groupsw ith low , moderate and
high copperleaf decoc tion respective ly. A t the same time, the p roduc tion ofNO and the activ ity of iNOS w ere also
measured. The expression of iNOSmRNA was a lso de te rm ined in norma l, mode l andmoderate-copperleaf decoction
ra ts g roups th rough RT-PCR method. RESULTS:The index SOD andGSH-Px increased andMDA reduced signif-
ican tly in high-andmoderate-copperleaf decoction g roups compared w ith themode lg roup. The production ofNO the
activ ity of iNOS reduced significantly in high-and moderate-copperleaf decoction groups compared w ith the mode l
group. RT-PCR resu lts demonstrated tha t the exp ression of iNOS mRNA was significan tly inh ib ited in TNBS-in-
duced ulcerative co litis ra ts afte r be ing treated w ith moderate-dosage copperlea.f CONCLUSION:A ca lypha aust-
ra lis L. has an tioxidative and antinitrosa tive e ffects which is probably one o f the mechanism o f copperleaf for trea-
ting UC.
　　铁苋菜 [ 1]是大戟科植物铁苋 (Acalypha australis
L)的全草 ,其性微苦涩 ,平 ,具有清热解毒 、利湿 、收
敛 、止血的作用 , 《内经》云:“苦能燥湿 ”, “涩能固
泄 ”,故认为铁苋菜具有固肠止泄之用。民间常用
于慢性肠炎及小儿慢性迁延性腹泻 [ 2] 。溃疡性结
肠炎(U lceratiV e Co litis, UC)是以慢性迁延性的腹
泻 、腹痛 、便血等为症状 ,以肠黏膜慢性非特异的的
炎症与溃疡为病理特点的一种肠道炎症性疾病 , 目
前缺乏有效的治疗药物和措施。在前期的工作中 ,
我们利用 TNBS(2, 4, 6三硝基苯磺酸钠 )诱导的实
验性溃疡性结肠炎大鼠模型考察了铁苋菜水提液的
药效 ,证实了铁苋菜对 TNBS诱导的实验性溃疡性
结肠炎动物模型具有一定的治疗作用 [ 3] ,在此基础
上 ,本次实验重点考察了铁苋菜水提液抗氧化及抗
NO的作用 ,并利用 RT-PCR的方法考察了铁苋菜对
iNOS mRNA表达的影响 ,对铁苋菜抗溃疡性结肠炎
的机制进行初步探讨 。
1　材料
1. 1　实验动物 、试剂与药品
健康♂SD大鼠 60只 ,清洁级 ,体质量在 190 g
～ 200 g,购于中国科学院上海实验动物中心 ,动物
合格证号:[ SYXK (沪 )2002-0026] , 自由进食和
饮水。
TNBS购于 Sigma公司 , 5 (w /v)水溶液 ,批号
[ 71K5009] ;铁苋菜购于上海杨浦中药饮片厂 ,批号
为 [ 020313] ,经上海第二军医大学药学院生药教研
室陈万生副教授鉴定为大戟科植物铁苋菜的干燥全
草:柳氮磺胺吡啶 (SPSA)为上海三维制药有限公司
生产 ,批号 [ 200304C28] ,用刀片轻轻刮去外层包衣
后 ,粉碎过 80目筛 ,称取一定量的粉末 ,加入蒸馏水
配成 0. 1 g /mL的混悬液备用:SOD、MDA、GSH-Px
及 NO、 iNOs检测试剂盒和考马斯亮蓝蛋白测定试
剂盒均购于南京建成生物工程有限公司;小量柱离
心式组织 /细胞总 RNA抽提试剂盒购于上海华舜生
物工程有限公司;Reve rse TranscriptaseXL (AMV)、
Rnase Inh ih to t、DL2000M arke r购于宝生物工程大连
有限公司;iN0s、GAPDH引物均由上海博亚生物技
术有限公司合成。
1. 2　仪器与设备
TGL-16G高速台式冷冻离心机 (上海安亭科学
仪器厂);M-250电泳仪及有机玻璃水平电泳槽 (上
海百特科技有限公司 );Tg radient 96梯度聚合酶联
反应仪(德国 B iometra公司);FR-980生物电泳图像
分析系统 (上海复日科技有限公司 );UV-2100型紫
外可见分光光度计 (日本岛津公司 );TGL-16G高速
台式冷冻离心机(上海安亭科学仪器厂 ):旋转蒸发
仪(上海申生科技有限公司):W201B型恒温水浴锅
(上海申生科技有限公司 );XW-80A旋涡混合器
(上海琪特分析仪器有限公司);玻璃匀浆器 (上海
玻璃仪器厂)。
2　方法
2. 1　铁苋菜水提取液的制备
将 2 kg铁苋菜饮片粉碎成粗粉 ,加入 10倍量
的水 ,煎煮 2次 ,每次 1 h ,合并煎煮液 ,于旋转蒸发
仪减压浓缩至 2 L, 得到 1 g生药 /mL的浓缩液
备用 。
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第 29卷　第 1期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
January 2007
Vo .l 29　No. 1
2. 2　动物模型的制备 [ 4]
取健康 SD大鼠 ,禁食不禁水 24 h后 ,腹腔注射
2 的戊巴比妥纳 ,使大鼠轻微麻醉后 ,将直径 2 mm
的乳胶管经肛门轻轻插入大鼠体内大约 8 cm处 ,将
TNBS(125mg TNBS /kg体重)的 50 乙醇溶液 ,用
注射器一次性注入到大鼠的肠腔内 ,将大鼠的尾部
提起 ,倒置 30 s,使造模剂充分渗透入大鼠的肠腔。
2. 3　实验分组及给药
设立正常对照组 (norma l),将造模大鼠随机分
为模型对照组 (model)、铁苋菜给药高 (TXC3)、中
(TXC2)、低 (TXC l)剂量组 、SASP阳性对照药组
(SASP),每组 10只 。铁苋菜给药高 、中 、低剂量组 ,
每天分别按照 9. 5、6. 5、2. 5 g生药 /kg体重的剂量
给大鼠灌胃铁苋菜水提液;阳性对照药 (SASP)组 ,
每天按照 0. 3 g /kg剂量灌胃柳氮磺胺吡啶混悬液;
正常对照组及模型对照组大鼠每天灌胃同体积的生
理盐水 ,各组大鼠均在造模后 6 h开始给药 ,每天一
次 ,连续给药 10 d。
2. 4　样本采集
各组大鼠给药 10 d后 ,过量注射戊巴比妥钠致
死 ,剖开大鼠腹部 ,将距肛门 10 cm长的末段结肠取
出 ,沿肠系膜纵行切开 ,用冰生理盐水冲洗并用用滤
纸吸干表面水分 ,取病变部位的结肠组织少量放置
液氮罐中保存备用。
2. 5　各项生化指标的测定
从液氮罐中取出结肠组织 100 mg,加入冰生理
盐水 ,冰浴下匀浆配成 10 的结肠组织匀浆 ,分别
按照 MPO、SOD、MDA、GSH-Px以及 NO、 iNO s检测
试剂盒说明书进行测定;蛋白含量测定按照考马斯
亮蓝蛋白测定试剂盒说明书进行操作 。
2. 6　RT-PCR方法检测 iNO s mRNA的表达
从液氮罐中取出大鼠结肠组织 ,在液氮冷冻条
件下将组织捣碎成粉末 ,按照小量柱离心式组织总
RNA抽提试剂盒说明书进行操作 。将抽提的 RNA
进行紫外定量及甲醛变性琼脂糖电泳观察 RNA是
否降解 。 iNOs 的引物 1 (5′-TGGCTTGCCCTTG-
GAAGTTTCTC-3)引物 2(5′-TCCAGGCCATCTTGGT-
GGCAAGA-3′),取各样本 RNA 1. 5 μL, 以 O ligo
(dT)为引物 , AMV反转录酶合成 cDNA。以 cDNA
为模板 ,以 GAPDH为对照 ,在 PCR反应仪中扩增
iNO s和 GAPDH的 DNA ,反应参数为:94℃预变性 2
m in后;94℃变性 30 s, 51. 6℃退火 30 s, 72℃延
伸 1m in ,进行 31个循环后 , 72℃再延伸 10m in ,扩
增产物在 1 琼脂糖凝胶上进行电泳 ,并置于生物
电泳成像分析系统进行拍照 ,以 GAPDH校正作相
对量分析 ,应用 CM IAS-Ⅱ真彩色医学图象处理系统
对各组 PCR结果的积分光密度进行分析。
2. 7　统计学处理
各项计量指标均以 –x ±s表示 ,组间差异行 t检
验 ,采用 SPSS 10. 0软件进行统计分析 , P值小于
0. 05为有统计学意义 。
3　结果
3. 1　铁苋菜对 UC大鼠结肠组织 SOD、MDA、GSH-
Px的活力或水平的影响　结果见表 1。
TNBS诱导的模型大鼠肠组织 SOD和 GSH-Px
的活力与正常大鼠相比显著下降 (P <0. 01), MDA
的水平显著升高 (P <0. 01),几乎是正常肠组织
MDA水平的 3倍 ,说明模型大鼠发生了氧化损伤。
铁苋菜中 、高剂量组和 SASP组给药都可以显著升
高模型大鼠 SOD、GSH-Px的活力 ,显著下降 MDA的
水平 (P <0. 05),证明铁苋菜在抗 UC中发挥了抗
氧化作用 ,作用与 SPSA相当 。
表 1　 各组大鼠结肠组织中MDA的含量及
SOD和 GSH-Px的活力( x ±s n=10)
Tab le 1　Conten t ofMDA and act ivity of SOD and
GSH-Px in colon tissue
G roup
Dose
/g /kg
SOD
/nU /m gp rot
MDA
/nm ol /mgprot
GSH-Px
/U /m gp rot
N orm al - 95. 96±7. 74 4. 31±0. 32 15. 32±1. 76
m odel - 80. 67±7. 78 12. 18±0. 85 8. 04±1. 13a
SPSA 0. 3 115. 16±14. 07 8. 87±0. 83 13. 13±1. 25b
TXC 1 2. 5 80. 46±5. 69 11. 84±1. 05 9. 21±0. 94
TXC 2 6. 5 158. 68±10. 23 9. 38±0. 77 12. 75±1. 21d
TXC 3 9. 5 164. 93±7. 75 8. 39±0. 24 13. 04±1. 09c
　　模型组:P <0. 01与正常组比较;SASP, TXC 2, TXC 3:P <0. 05
与模型组比较;TXC 1:P >0. 05与模型组比较;TXC 2, TXC 3:P >
0. 05与 SASP组比较。
3. 2　铁苋菜对 UC模型大鼠结肠组织中 NO和 iN-
OS水平的影响　见表 2。
结果显示正常大鼠结肠组织中 N0的含量和
iNO s的活力很低 ,而造模后显著性升高 (P <0. 05),
证明 TNBS诱导的大鼠 UC模型 iNOS增加 ,促进了
过量的 NO生成 ,且过量的 NO参与了肠道的损伤。
铁苋菜中 、高剂量给药后 ,结肠组织中 NO的含量和
iNO s的活力显著性降低 (P <0. 05),并呈现剂量依
赖性 ,证明铁苋菜对 NO和 iNOS具有抑制作用。
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表 2　 铁苋菜水提取液对 UC模型大鼠结肠
组织中 NO和 iNO S的影响( x ±s n =10)
Tab le 2　E ffect of Acalypha decoct ion on the con tent ofNO
and the active ity of iNO s in colon t issue ofTNBS-
induced colitis rats
G roup Dose /g /kg NO /μmo l /gp rot iNO s /U /mgprot
Norm al - 0. 79±0. 29 0. 015±0. 012
Model - 2. 71±0. 83b 0. 84±0. 11b
SASP 0. 3 0. 89±0. 27 0. 45±0. 25
TXC 1 2. 5 2. 52±0. 63 0. 81±0. 13
TXC 2 6. 5 0. 98±0. 25c 0. 61±0. 12c
TXC 3 9. 5 0. 83±0. 35c 0. 58±0. 14c
　　 bP <0. 05与正常组比较;cP <0. 05与 TNBS模型组比较。
3. 3　铁苋菜对 UC模型大鼠结肠组织中 iNOS mR-
NA表达的影响
分别以正常组 、模型对照组及铁苋菜中剂量给
药组大鼠的总 RNA经反转录产生的 cDNA为模板 ,
加入合成好的 iNOS和 GAPDH的的引物进行 PgR
扩增。 PCR产物进行 1 琼脂糖凝胶电泳 ,电泳图
见图 1, 2, 3。由电泳图看出 ,正常大鼠结肠组织几
乎没有 iNOSmRNA的表达 ,而经过 TNBS造模后的
大鼠 ,在 PCR电泳图 574 bp位置处可见明显的 iN-
OS的表达 ,以 GAPDH校正 ,应用 CM IAS-Ⅱ真彩色
图 1　正常 SD大鼠结肠组织 iNOS mRNA表达的 PCR产
物图
图 2　TNBS模型大鼠结肠组织 iNOS mRNA表达的 PCR
产物图
图 3　经铁苋菜灌胃治疗的 UC模型大鼠结肠组织 iNOS
mRNA表达的 PCR产物图
医学图像处理系统对 PCR结果的积分光密度进行
相对量分析 , 结果见表 3。模型组大鼠结肠 iNOS
mRNA的相对表达量为 2. 216±0. 688,而经过铁苋
菜中剂量灌胃治疗后的模型大鼠其 iNOS mRNA的
相对表达量为 1. 301±0. 446,两组 iNOS mRNA的
相对表达量之间有显著性差异 (P <0. 05),证实铁
苋菜可以显著下调 UC模型大鼠的 iNOS mRNA的
表达 。
表 3　 PCR结果电泳积分光密度值( x ±s, n=6)
Tab le 3　 Densitomen try value ofPCR resu lt
组别 积分光密度 GAPDH 积分光密度 /GAPDH
正常对照组 0. 071 6±0. 002 1 1. 632±0. 103 0. 043 6±0. 001 2
TNBS模型组 3. 895±1. 010 1. 787±0. 171 2. 216±0. 688b)
铁苋菜给药组 2. 418±0. 847 1. 854±0. 0503 1. 301±0. 446
　　b)P <0. 05与铁苋菜给药组比较;b)P <0. 05与正常对照组比较。
4　讨论
溃疡性结肠炎的病因及发病机制至今尚不明
确 ,但是氧与 NO自由基参与了溃疡性结肠炎的发
病过程已经是一个不争的事实。氧自由基通过脂质
过氧化过程生成大量的 MDA ,并介导产生大量的炎
症介质 ,使组织细胞造成损伤。过量的 、致病性的
N0是由 iNOS催化 L-精氨酸生成 ,在 UC的过程中
发挥了一系列致病作用 [ 5] 。作为自由基与 O2 -反应
生成具有更强氧化性的 ONOO - ,对组织和细胞产生
毒性;N0可以促进血管发生 ,导致结肠组织发生充
血;可以介导 IL-2诱导微血管通透性增高 ,导致结
肠组织发生水肿和组织功能异常;通过调节 COX-2
依赖性的前列腺素的产生 ,促进 UC的炎症的发生;
NO还具有促进白细胞趋化 ,促进淋巴细胞激活 、促
进炎症介质释放的作用。另外 , NO对结肠电和结
肠运动有影响 , NO是抑制性 NANC神经递质 , NO
增多会导致括约肌松弛 ,可能也是 UC病人发生腹
泻的原因之一。因此 NO在溃疡性结肠炎的发病过
程中扮演重要角色。通过抑制 iNOS的表达 ,减少
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Vo .l 29　No. 1
iNOS的量 ,从而减少 NO的过量生成 ,目前也是开
发抗 UC药物的一个方向[ 6] 。铁苋菜中 、高剂量可
以显著降低模型大鼠结肠组织 MDA的水平 ,并能
提高 SOD和 GSH-Px的活力 ,证实铁苋菜具有抗氧
化能力 。同时通过检测各组肠组织中 NO和 iNOS
的水平 ,也证明铁苋菜具有降低模型大鼠 NO和 iN-
OS的作用 , RT-PCR结果证明铁苋菜具有抑制 iNOS
mRNA表达的作用 。铁苋菜是通过抑制 iNOS的基
因表达 ,抑制 iNOS从而达到减少 NO的过量生成 ,
发挥抗炎和保护肠黏膜的作用 。在对铁苋菜的植物
化学研究发现铁苋菜含有大量的咖啡苹果酸 、原儿
茶酸等天然酚酸类化合物 ,而这些天然酚酸类化合
物具有强大的抗氧化性 ,因此认为铁苋菜的抗氧化
抗 NO作用与这些化合物有关 ,铁苋菜对 UC模型的
治疗作用与铁苋菜的抗氧化抗 NO作用有关 ,但是
更深层的机制需要今后更深入的研究 。
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复方丹参滴丸防治大鼠早期糖尿病肾脏损害的研究
李佑生 , 　王文健 , 　马宇滢 , 　刘　毅 , 　何春燕 , 　何燕铭 , 　陈伟华 , 　应　健
(复旦大学附属华山医院中医科复旦大学中西医结合研究所 ,上海 200040)
收稿日期:2006-06-18
作者简介:李佑生(1964～ ),男 ,医学博士 ,主任医师 ,研究方向:中西医结合肾脏病防治 ,电话 , 0755-25533018转 3819。
关键词:复方丹参滴丸;糖尿病肾病;微量白蛋白尿;胰岛素抵抗;大鼠
摘要:目的:考察复方丹参滴丸对大鼠早期糖尿病肾脏损害的疗效。方法:采用高糖高脂喂饲加低剂量 STZ建立大鼠 2
型糖尿病肾病模型 , 给予复方丹参滴丸治疗 12周 , 动态观察血糖及尿微量白蛋白尿等指标。结果:复方丹参滴丸大剂量
时可降低血糖 、减少尿微量白蛋白 、减轻肾脏肥大 、减少尿量 ,而中低剂量可降低血清甘油三酯水平 ,疗效优于氯沙坦。
结论:复方丹参滴丸大剂量时有改善实验性大鼠 2型糖尿病肾脏病变 , 主要是改善微量白蛋白尿的作用。
中图分类号:R285. 6　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2007)01-0040-04
Effect of Compound Danshen Drop P ills on ear ly stage diabetic nephropathy in
ratm odels
LI You-sheng, 　WANG Wen-Jian, 　MA Yu-y ing, 　LIU Y i, 　HE Chun-yan, 　HE Yan-m ing, 　CHEN W ei-
hua, 　YING Jian
(D ept. of TCM , Huashan Hospita l Aff ilia ted toF udan Un iversity, Shangha i200040 , Ch ina)
KEYWORDS:Compound D anshen D rop Pills;diabetic nephropathy;m icroa lbum inuria;insulin resistance;rat
ABSTRACT:AIM:To explore the effect o fCompoundD anshenD rop P ills(CDDP) on early stage of d iabe tic ne-
phropa thy in ra tmode ls. METHODS:D iabe tic neph ropathy of type 2 diabe tes ra tmode lw as estab lished by feed-
ing w ith high g lucose high fat d ie tw ith low dose STZ injection. Rats w ere trea ted w ith CDDP then and blood g lu-
cose, urinary m icro-album in and o ther targets w ere measured at differen t time po in ts. RESULTS:H igh dose o f
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2007年 1月
第 29卷　第 1期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
January 2007
Vo .l 29　No. 1