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藏药湿生扁蕾抗大鼠实验性溃疡性结肠炎有效部位筛选研究



全 文 :制抗原递呈细胞(APC)在肿瘤组织的浸润、分化、成
熟及对抗原的趋化反应,诱导其表面人类白细胞抗
原 HLA-Ⅰ、Ⅱ类分子,免疫球蛋白超家族糖蛋白的
共刺激分子 B7-1、B7-2、CD40 和细胞间黏附分子低
表达或不表达〔6〕;直接或通过抑制抗原提呈细胞
(antigen-presenting cell APC)的抗原递呈和辅助信
号传递而使细胞毒 T 细胞(CTL)处于免疫无能状
态,抑制 Th1 细胞的活化和 Th1 类细胞因子(IL-2、
IFN-γ、TNF-β)产生,诱导 Th0 向 Th2 偏移,有助于
肿瘤细胞逃避宿主免疫,促进肿瘤发生发展〔7〕。
本研究结果表明,参慈胶囊配合顺铂能抑制
Lewis肺癌生长,二者合用有协同作用,其作用机制
可能与下调 TGF-β、IL-10 mRNA的表达有关。
参 考 文 献
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藏药湿生扁蕾抗大鼠实验性溃疡性
结肠炎有效部位筛选研究
景 明,陈 晖,刘喜平,李 硕
(甘肃中医学院,甘肃 兰州 730000)
摘要 目的:通过比较湿生扁蕾乙醇提取物各极性组分抗大鼠实验性溃疡性结肠炎的效果,筛选出湿生扁蕾
抗溃疡性结肠炎的有效部位。方法:乙醇回流提取湿生扁蕾,提取液浓缩并经石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃
取,得到极性不同的 5 部分产物。用三硝基苯磺酸(TNBS)乙醇溶液复制大鼠 UC模型,以柳氮磺胺吡啶(SASP)作
为阳性对照药,观察各组大鼠腹泻与粪便隐血的动物数、结肠组织形态学与组织内髓过氧化物酶(MPO)活性的变
化。结果:乙醇提取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物能显著减少 UC模型大鼠发生腹泻与粪便隐血的动物数(P <
0. 05) ;并且能显著改善 UC模型大鼠结肠局部组织形态学损伤;能显著降低 UC模型大鼠结肠组织中 MPO的水平
(P < 0. 05) ;与阳性对照药柳氮磺胺吡啶比较无显著性差异。结论:湿生扁蕾抗溃疡性结肠炎的活性成分在氯仿及
乙酸乙酯萃取物中含量较高,可对这 2 个组分作进一步的分离筛选研究。
关键词 湿生扁蕾;溃疡性结肠炎大鼠;有效部位
中图分类号:R285. 5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)12-1934-03
收稿日期:2011-06-13
基金项目:甘肃省科技支撑计划项目(0804NKCA119-08) ;兰州市科技计划项目(2008-1-172)
作者简介:景明(1963-) ,男,教授,主要从事中药新药的开发研究;E-mail:jm@ gszy. edu. cn。
湿生扁蕾为龙胆科扁蕾属植物湿生扁蕾 Gen-
tianopsis paludosa(Munro)Ma. 的干燥全草,藏药名
称机合斗,产于甘肃、青海、四川、西藏等地区,生长
在海拔 2 300 ~ 4 100 m的河滩草地、沟边、山坡。具
有清热解毒、健脾止泻等功效,主治肝炎、胆囊炎、热
病发斑、泄泻、肠胃炎、结膜炎、疮疥肿毒等症,民间
常用于治疗肠胃炎、小儿腹泻〔1〕。湿生扁蕾的主要
化学成分包括呫吨酮类、黄酮类和三萜类化合物,还
含有酚类、有机酸等〔2〕。笔者前期研究表明,湿生
扁蕾乙醇提取物有明显的抗炎、镇痛、解热作用,对
番泻叶所致小鼠腹泻有明显的对抗作用〔3,4〕。本实
验根据湿生扁蕾所含成分极性的不同,以不同极性
·4391· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
DOI:10.13863/j.issn1001-4454.2011.12.019
的溶剂分离出不同组分,观察对大鼠溃疡性结肠炎
模型的影响,初步筛选出湿生扁蕾抗实验性溃疡性
结肠炎的有效部位,为该药的进一步研究及综合开
发利用提供一定的理论依据。
1 材料与仪器
1. 1 实验动物 SPF 级 Wistar 大鼠,体质量(180
± 20)g,雌雄各半,合格证号 SCXK(甘)2011-0001,
由甘肃中医学院实验动物中心提供。
1. 2 药品和试剂 柳氮磺胺吡啶(SASP,海南红
惠制药有限公司) ,临用前用蒸馏水配成 0. 3 mg /mL
的混悬液;2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS,上海至鑫化
工有限公司) ;戊巴比妥钠(北京化学试剂公司) ;
MPO检测试剂盒(西安舟鼎国生物技术有限责任公
司) ;大便隐血检测试剂盒(上海凯创生物技术有限
公司)。其余试剂均为分析纯。湿生扁蕾经甘肃省
药品检验所宋平顺主任药师鉴定为 Centianopsis pal-
udosa(Munro)Ma. 。
1. 3 主要仪器 Primo 高速离心机(德国 Heraeus
公司) ;R-200 旋转蒸发仪(瑞士 BUCHI 公司) ;HH-
601 恒温水浴锅(金坛市恒丰仪器公司) ;玻璃匀浆
器(上海玻璃仪器公司) ;AE-240 电子天平(梅特勒-
托利多仪器上海分公司)。
2 方法与结果
2. 1 不同极性萃取物的制备 取湿生扁蕾粉末
(60 目)3 kg,用 70%乙醇回流提取 3 次,每次 1 h,
提取液回收乙醇后减压干燥,得 516 g 干浸膏,作为
乙醇提取物。取 126 g干膏,加 3 倍蒸馏水,超声处
理 10 min,依次用等体积的石油醚、氯仿、乙酸乙酯
和正丁醇各萃取 3 次,分别回收溶剂,减压干燥后得
石油醚萃取物 12. 4 g、氯仿萃取物 21. 2 g、乙酸乙酯
萃取物 24. 2 g、正丁醇萃取物 26. 8 g 和水溶性部分
40. 2 g。乙醇总提取物及各萃取物在给药前用
0. 5%羧甲基纤维素钠(CMC-Na)配成混悬液。
2. 2 动物造模、分组及给药〔5〕 取 Wistar 大鼠 90
只,禁食不禁水 24 h 后,腹腔注射 2%的戊巴比妥
钠,使大鼠轻微麻醉后,将直径 2 mm 的乳胶管经肛
门轻轻插入大鼠体内大约 8 cm处,将三硝基苯磺酸
(TNBS 125 mg /kg)的 50%乙醇溶液,用注射器一次
性注入到大鼠的肠腔内,每只 0. 5 mL,将大鼠的尾
部提起,倒置 30 s,使造模剂充分渗透入大鼠的肠
腔。正常对照组大鼠注入等量 50%乙醇溶液。湿
生萹蕾各提取物组均按含生药 4. 2 g /kg 给药,给药
体积均为 15 mL /kg;柳氮磺胺吡啶组每天按 0. 3 g /
kg灌胃 SASP混悬液;正常对照组和模型组动物每
天灌胃等体积 0. 5% CMC-Na 溶液;各组大鼠均在
造模后 6 h开始给药,1 /d,连续给药 12 d。
2. 3 对 UC 大鼠腹泻及便血的影响 隔日观察各
组大鼠粪便,并利用大便隐血检测试剂测定粪便隐
血,记录大鼠发生腹泻与粪便隐血的数量。结果见
表 1。正常对照组大鼠没有发生腹泻和便血,UC 大
鼠均出现了不同程度的腹泻、便血。与模型组比较,
乙醇组、氯仿部位组、乙酸乙酯部位组及 SPSA 组大
鼠发生腹泻、便血个数明显减少。
表 1 各组大鼠发生腹泻与便血的数量(n =10)
组别 第 1 天 第 3 天 第 5 天 第 7 天 第 9 天 第 12 天
正常对照组 0 0 0 0 0 0
模型组 10 10 9 8 6 4
柳氮磺胺吡啶组 10 9 8 6 2 0
乙醇组 10 9 8 5 2 0
石油醚部位组 10 10 8 8 5 4
氯仿部位组 10 7 6 4 1 0
乙酸乙酯部位组 10 9 6 4 1 0
正丁醇部位组 10 10 8 7 6 3
水溶性部位组 10 10 8 8 5 2
2. 4 对 UC大鼠结肠组织损伤和 MPO活性的影响
于末次给药后 2 h,脱颈椎处死大鼠,剖开腹部,将
距肛门 10 cm 长的末段结肠取出,沿肠系膜缘剪开
肠腔,用冰生理盐水冲洗,将黏膜面向上平铺,观察
黏膜损伤并按以下标准进行评分〔6〕:0 分,无炎症和
溃疡;1 分,局部充血但无溃疡;2 分,溃疡但无充血;
3 分,1 处溃疡及炎症;4 分,2 处或 2 处以上溃疡及
炎症;5 分,溃疡延伸超过 2 cm。同时取结肠组织
100 mg,加入冰生理盐水,在组织匀浆器中配成 10
%的结肠组织匀浆,按照 MPO检测试剂盒说明书进
行操作,测定 MPO酶的活性。结果见表 2。石油醚
部位组、正丁醇部位组、水溶性部位组及模型组大鼠
的结肠多数与相邻脏器轻度粘连,结肠充血水肿,肠
黏膜表面发生溃疡糜烂成糊状。乙醇组、氯仿部位
组和乙酸乙酯部位组及 SPSA 组均可以改善结肠充
血水肿等炎性症状,减少溃疡面积,促进溃疡形成。
·5391·Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月
模型组大鼠结肠组织 MPO 酶的活性比正常大鼠显
著升高,乙醇提取物、氯仿部位、乙酸乙酯部位及
SPSA均可显著降低结肠组织中 MPO活性。
表 2 对 UC大鼠结肠组织损伤和MPO
酶活性的影响(珔x ± s,n =10)
组别 结肠组织损伤评分 MPO/(U/g)
正常对照组 0 ± 0 0. 27 ± 0. 09
模型组 3. 86 ± 1. 32** 2. 54 ± 0. 14**
柳氮磺胺吡啶组 2. 19 ± 0. 74# 1. 08 ± 0. 11#
乙醇组 2. 21 ± 0. 81# 1. 47 ± 0. 12#
石油醚部位组 3. 35 ± 1. 02 2. 36 ± 0. 21
氯仿部位组 2. 12 ± 0. 69# 1. 44 ± 0. 16#
乙酸乙酯部位组 2. 23 ± 0. 85# 1. 51 ± 0. 15#
正丁醇部位组 2. 93 ± 0. 92 2. 31 ± 0. 19
水溶性部位组 3. 37 ± 1. 16 2. 27 ± 0. 14
注:与正常对照组比较,**P < 0. 01;与模型组比较,#P < 0. 05
2. 5 统计学处理 实验结果用 珋x ± s 表示,采用统
计软件 SPSS 13. 0 进行单因素方差分析处理,对大
体形态和组织学损伤等级资料采用秩和检验,以 P
< 0. 05 有统计学意义。
3 讨论
UC是世界卫生组织(WHO)定义的世界难治病
之一。由于目前对于 UC 的发病机制仍不清楚,至
今还没有治疗 UC 有效的药物,故为其治疗造成了
一定的困难。目前临床使用的药物如氨基水杨酸
类、皮质类固醇类和免疫抑制剂等只局限于缓解症
状,并且由于具有强烈的不良反应而使患者不能耐
受。故研究治疗 UC高效低毒的天然药物已成为患
者和药物工作者的期望。
为了探明藏药湿生扁蕾抗实验性 UC 的有效部
位,提高其药用价值,减少毒副作用,本研究对湿生
扁蕾全草的乙醇提取物依次用石油醚、氯仿、乙酸乙
酯、正丁醇萃取,观察各萃取物对三硝基苯磺酸诱导
的实验性 UC大鼠模型的影响。实验发现湿生扁蕾
乙醇提取物、氯仿和醋酸乙酯萃取部位均具有明显
的抗实验性 UC 作用。结果表明,湿生扁蕾乙醇提
取物具有抗实验性 UC 活性,且其活性部位主要是
氯仿部位和醋酸乙酯部位,而抗 UC 的主要化学成
分和机制有待进一部研究。
参 考 文 献
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收稿日期:2011-08-10
基金项目:中国科学院“科技支青工程”项目(2007)
作者简介:王聪庆(1972-) ,男,副主任药师,主要从事中药新药研究与开发;Tel:0931-8366121,E-mail:wcq. 666@ 163. com。
* 通讯作者:陈娟,Tel:0931-4968121,E-mail:chenjuanhua@ 163. com。
·制剂与质量·
大孔树脂分离纯化红景天苷工艺研究
王聪庆1,陈 娟2*
(1. 兰州市第二人民医院兰州肝病研究所,甘肃 兰州 730046;2. 中国科学院兰州化学物理研究所 /中国科
学院西北特色植物资源化学重点实验室,甘肃 兰州 730000)
摘要 目的:筛选分离纯化红景天苷的最佳树脂及其工艺参数。方法:采用静态吸附-解吸附方法,以红景天苷
的吸附率和解吸附率为评价指标,从 21 种不同型号的大孔树脂中筛选出最佳树脂;对树脂纯化工艺参数:上样液
浓度、上样液体积、上样液流速、洗脱溶剂、洗脱溶剂用量进行优化。结果:LSA-30 效果最好,吸附率和解吸率分别
为 63. 86%和 82. 39%;其最佳工艺为:上样液浓度为每 1 mL相当于原生药 0. 4 g,上样液体积(mL)与树脂重量(g)
之比为 4∶ 1,上样液流速为 1. 0 ~ 2. 0 mL /min,10 倍柱体积的 30%乙醇洗脱。产品红景天苷的质量分数为 10. 7%,
收率为 70. 6%。结论:该优选工艺可为红景天苷纯化的产业化生产提供依据。
关键词 红景天;红景天苷;大孔树脂;纯化
中图分类号:R286. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2011)12-1436-04
·6391· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 34 卷第 12 期 2011 年 12 月