全 文 ：2014年 第 4期 广 东 化 工
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穗花杉树皮中紫杉醇的提取与含量测定
牟利辉，成益韶，郑钦生
(嘉应学院 生命科学学院，广东 梅州 514015)

[摘 要]目的：建立并优化穗花杉树皮中紫杉醇的提取工艺并进行含量测定。方法：以紫外扫描和 HPLC相结合的方法测定紫杉醇含量，采
用正交实验法对提取过程中提取次数、提取溶剂、提取时间、料液比四因素进行优选实验。结果：影响从穗花杉中提取紫杉醇的主次因素为：
提取次数>提取溶剂>提取时间>料液比。结论：正交结果分析得提取次数为 3，提取溶剂为 75 %丙酮，提取时间为 2 h，料液比为 1∶7为优化选
出的紫杉醇最佳提取工艺，穗花杉树皮中紫杉醇的百分含量为 0.0034 %。
[关键词]穗花杉；紫杉醇；紫外扫描；高效液相色谱；含量测定
[中图分类号]R248.2 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2014)04-0097-01

Extraction and Determination of Paclitaxel Content in the Cortices of Amentotaxus
Angotaenia (Hance) Pilger

Mou Lihui, Cheng Yishao, Zheng Qinsheng
(Life Sciences Academy, Jiaying University, Meizhou 514015, China)

Abstract: Object: to establish and optimize the technics of paclitaxel content in the cortices of Amentotaxus angotaenia (Hance) Pilger. Method: using UV
scanning and HPLC method for index of paclitaxel contents, the method of orthogonal experiment which optimizing more than four factors was established. Result:
The sequence of factors is: extraction times> extraction solvent> extraction time> ratio of material and liquid. Conclusion: the orthogonal analysis indicate: three
times, 75% acetone, 2 hours, 1:7 of ratio of material and liquid is the best result, the content of paclitaxel in the cortices of Amentotaxus angotaenia (Hance) Pilger is
0.0034 %。
Keywords: Amentotaxus angotaenia (Hance) Pilger；paclitaxel；UV scanning；HPLC；content determination

穗花杉在《中国珍稀濒危保护植物名录》中列为濒危物种[1]。
因其形态结构和化学成分特殊，一直受到国内外学者的广泛关注。
癌症，已成为严重威胁人类健康的主要病症之一，仅次于心血管
疾病[2]。紫杉醇最初是从太平洋短叶红豆杉树皮中提取出来的[3]，
是红豆杉属植物特有的次生代谢产物，它是最具抗癌活性的天然
化合物之一[4]，也是目前国际市场上最热门的新型抗癌药物，被
广泛用于临床治疗癌症，取到良好效果，被认为是最近二十年来
天然抗癌领域的重大发现[5]。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
U—2800 型紫外分光光度扫描仪(日立公司)；紫杉醇对照品
(批号：100382-200301,中国药品生物制品检定所)；穗花杉树皮(采
自广东梅州)；甲醇(色谱纯，西陇化工股份有限公司)；其它试剂
皆为分析纯。
1.2 实验方法
1.2.1 工艺流程
穗花杉→干燥→粉碎→有机溶剂提取→非极性杂质的去除→
碱液洗涤法除杂→活性炭脱色→硅胶柱层析→紫外扫描定性分的
→高效液相色谱法测定含量。
1.2.2 水分含量测定
参照《中国药典》(2010版)的干燥失重测定法。
1.2.3 紫杉醇的提取
将穗花杉树皮用微波炉干燥[6]，粉碎成粗粉[7]，称取 8 g粉末，
用冷浸法提取[8]，提取液用正己烷萃取，浓缩，用氯仿溶解，加
入等体积 1 mol/L的 K2CO3溶液，搅拌，有机相用 K2CO3溶液和
蒸馏水分别洗涤[9]，加入活性炭脱色[10]，经无水硫酸钠脱水后浓
缩至干，备用。
1.2.4 紫杉醇的分离
将干燥提取物用硅胶柱色谱进行分离，以甲醇∶氯仿(3∶97)
洗脱液进行洗脱[11]，收集馏分共 10份，每份 10 mL，作为供试品
溶液。
1.2.5 HPLC法测定紫杉醇含量
1.2.5.1 色谱条件
色谱柱为岛津 SHIM PACK VP-ODS 250L*4.6，流动相∶甲醇
-水(58∶42)，检测波长：228 nm。
1.2.5.2 对照品溶液的制备
配制 0.1 mg/mL对照品甲醇溶液，备用。
1.2.5.3 供试品溶液的制备
将供试品洗脱馏分装在 10 mL容量瓶中，干燥，用甲醇定容，
即得。
1.2.5.4 紫杉醇含量计算公式
含量%=(AT×f×n 供)/m ×100%，f=WS/(n 对×AS)。
1.3 单因素试验
1.3.1 提取溶剂的选择
精确称取穗花杉树皮粉末，每份 8 g，共四份，分别加入乙酸
乙酯∶丙酮(1∶1)、95 %乙醇、75 %丙酮、95 %二氯甲烷这 4种
提取溶剂，提取时间为 10 h，料液比为 1∶10，提取次数为 2次，
得供试品溶液。
1.3.2 提取次数的选择
提取次数分别为 1、2、3、4次，其它条件同 1.3.1。
1.3.3 料液比的选择
料液比分别为 1∶4、1∶7、1∶10、1∶13，其它条件同 1.3.1。
1.3.4 提取时间的选择
提取时间分别为 2 h、6 h、10 h、14 h，其它条件同 1.3.1。
1.4 正交试验
根据单因素实验结果，采用正交试验进一步考察提取次数、
提取溶剂、提取时间、料液比四个因素对紫杉醇提取量的影响，
每个因素考查四个水平。因此采用 L16(44)正交表进行试验。
2 结果与分析
2.1 水分含量测定
穗花杉树皮的平均水分含量为 0.26 %。
2.2 单因素试验
2.2.1 提取溶剂的选择
从测定数据表明 95 %乙醇的提取率最高，故应选择 95 %乙
醇作为提取溶剂。
2.2.2 提取次数的选择
由测定数据表明提取次数宜选 2次。
2.2.3 料液比的选择
料液比为 1∶10时，紫杉醇的提取量最高。
2.2.4 提取时间的选择
最佳的提取时间为 10 h，随着提取时间的延长，提取量的反
而减少。
2.3正交试验结果
最佳的实验条件为：提取次数为 3，提取剂为 75 %丙酮，提
取时间为 2 h，料液比为 1∶7；影响提取量的主次因素为：提取
次数>提取溶剂>提取时间>料液比。

(下转第 88页)
[收稿日期] 2014-01-09
[作者简介] 牟利辉(1975-)，男，重庆人，讲师，硕士，主要从事天然产物及新药开发研究。
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照品溶液在室温下避光放置 3天内稳定。
2.5 专属性
分别制备浓度为 2 μg/mL的杂质 A、B、C、D、E单标溶液，
确定各组分的保留时间。取甲醇作为空白溶液进样，结果在主成
分和杂质的保留时间没有干扰，专属性满足要求。
2.6 样品的测定
制备一份供试品溶液按方法进行测定，结果显示，杂质 A为
0.08 %，未知杂质为 0.10 %，图谱见图 2。

表 1 双氯芬酸钠和杂质 A、B、C、D、E的线性方程、相关系数、检出限和定量下限
Tab.1 Calibration equations, LOD and LOQ of diclofenac sodium and impuritie A, B, C, D, E
组分 线性方程 相关系数 r 线性范围/(μg·mL-1) 相对响应因子 LOD/(μg·mL-1) LOQ/(μg·mL-1)
双氯芬酸钠 y=9,263.0x-130.3 0.9998 0.5~10 1.00 0.10 0.30
杂质 A y=13,049.1x+1,808.5 0.9997 0.5~10 1.50 0.07 0.20
杂质 B y=17,652.1x+2,320.9 0.9995 0.5~10 2.01 0.05 0.15
杂质 C y=10,825.1x+1,183.1 0.9997 0.5~10 1.22 0.09 0.25
杂质 D y=10,436.9x+1,177.3 0.9995 0.5~10 1.18 0.09 0.25
杂质 E y=31,196.5x-371.1 0.9996 0.5~10 3.38 0.03 0.09

表 2 杂质 A、B、C、D、E的回收率和精密度
Tab.2 Recovery and precision of impurities A, B, C, D, E
组分 加标量/(μg·mL-1) 平均回收率/% RSD/% 加标量/(μg·mL-1) RSD，n=6/% RSD，n=12/%
杂质 A 0.5，2.0，10.0 101.3，100.3，99.0 1.1 2.0 1.8 1.9
杂质 B 0.5，2.0，10.0 102.5，102.1，99.5 1.6 2.0 2.1 1.9
杂质 C 0.5，2.0，10.0 103.9，101.6，100.7 1.6 2.0 1.3 1.5
杂质 D 0.5，2.0，10.0 102.9，102.9，99.8 1.8 2.0 1.1 1.0
杂质 E 0.5，2.0，10.0 103.4，99.4，99.1 2.4 2.0 0.9 1.1


图 2 样品溶液图谱
Fig.2 Chromatograms for sample solution

3 结论
本文建立了超高效液相色谱法测定双氯芬酸钠的有关物质的
方法，本法准确、快速、灵敏度高，与传统高效液相色谱相比，
能有效节省分析时间和有机溶剂的消耗，适用于双氯芬酸钠的有
关物质的检测。

参考文献
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8(1)：3-4．
[2]潘云雪，杨直，鲍黎，等．RP-HPLC 法测定双氯芬酸钠注射液的含量
和有关物质[J]．中国药品标准，2011，12(6)：413-416．
[3]英国药典[S]．2009年版．2009：646-647．

(本文文献格式：池舒耀，孙晋红，彭蕾，等．超高效液相色谱法
测定双氯芬酸钠的有关物质[J]．广东化工，2014，41(4)：87-88)


(上接第 97页)
2.4 HPLC法对紫杉醇的含量测定
根据扫描结果，样品在 λmax=228 nm处有峰，说明穗花杉树
皮中含有紫杉醇成分。
用 SPSS17.0软件分析得回归方程为：A=0.015C+0.024，相关
系数 r为 0.9998。
由 HPLC法可见供试品溶液与标准品溶液在相同位置有色谱
峰，进一步证明穗花杉树皮中有紫杉醇成分的存在，根据 1.2.6.4
中的公式可计算出供试品中紫杉醇的百分含量为 0.0034 %。

参考文献
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(本文文献格式：牟利辉，成益韶，郑钦生．穗花杉树皮中紫杉醇
的提取与含量测定[J]．广东化工，2014，41(4)：97)