全 文 ：The amentoflavone content changes of selaginella involven spring after processed by
stri-frying
Sun Xingli1 ,Long Hongping2,Luo Hang 1, Zhou Zhenghua1,Wang Wenyuan1
（1. PharmacyDepartment,HunanYongzhouVocational andTechnical College, Yongzhou 425100; 2. School of Pharmaceutical Sciences,
Central SouthUniversity，Changsha 410013）
[Abstract] Objective To compare the amentoflavone content changes of selaginella involved spring after
processed by stri-frying . Methods The column of YMC-Pack ODS-AQ L1 (250 mm×4.6 mm，5 μm)was used,
The mobile phase was methanol: 0.2% acetic acid, gradient elution, and the temperature was 25℃, and detected
wavelength was at 257 nm, the flow rate was 1.0mL/min.Results The amentoflavone content of selaginella
involved spring after processed by stri-frying was the highest. Conclusion The method is sample, accurate with a
good repeatability, and can be used for the quality control of stir-frying product of selaginella involven spring,
The results provide certain evidence for approaching the process mechanism of selaginella involven spring.
[Key words] selaginella involved spring; amentoflavone; processed by stri-frying
兖州卷柏炭制前后穗花杉双黄酮的含量变化
孙兴力 1，龙红萍 2，骆 航 1 ，周振华 1，王文渊 1
（1. 湖南永州职业技术学院药学系，湖南 永州 425100；2. 中南大学药学院，湖南 长沙 410013）
【摘要】 目的：建立兖州卷柏中特征成分穗花杉双黄酮的含量测定方法，比较兖州卷柏炭制前后穗花双黄酮的含
量变化。 方法：YMC-Pack ODS-AQ L1 (250mm×4.6mm，5um)，流动相为甲醇-0.2%醋酸水溶液，梯度洗脱，柱温：
25℃，检测波长为 257nm，流速为 1.0ml/min。 结果：兖州卷柏炭制品的穗花杉双黄酮含量高于兖州卷柏生品。 结论：此
方法稳定可靠，重现性好，适用于兖州卷柏碳制品的质量控制，为兖州卷柏的炮制机理提供一定的依据 。
【关键词】 兖州卷柏；穗花杉双黄酮；炒制
【中图分类号】 R529.3 【文献标识码】A 【文章编号】1673-016X（2011）02-0082-03
收稿日期：2011-04-14
基金课题：国家自然科学基金资助项目(30873149);中南大学贵重仪器共享基金资助项目(ZKJ2008046)
通讯作者：孙兴力，E-mail：senxinli@163.com
兖州卷柏(Selaginella involven Spring)，又名金不
换、金扁柏、石养草等，为卷柏科植物兖州卷柏的全草
[1]。兖州卷柏与被《中国药典》收载的卷柏 S.tamariscina
(Beauv.)Spring、 垫状卷柏 S.pulvinata (Hook.et Grev.)
Maxim等卷柏属植物，具有活血通经之功效，常用于
经闭通经，症瘕痞块，跌扑损伤的治疗；炒炭后可化瘀
止血，用于吐血、崩漏、便血、脱肛[2-3]。 卷柏属化学成
分主要为以穗花杉双黄酮(amentoflavone)为主的双
黄酮类化合物，是卷柏类药材的特征性成分 [4-7]，穗
花杉双黄酮分析方法的建立及比较炭制前后其含
量变化，从而为兖州卷柏炭制品的质量控制提供理
论依据。
1仪器与试药
Agilent 1200 型高效液相色谱仪，DAD 检测器
(美国安捷伦科技有限公司 ) ；UVProbe-2450 紫外
可见分光光度仪 (日本岛津公司)；BP211D 电子天
平(0.00001 g，德国塞多利斯公司)。 穗花杉双黄酮
湖南师范大学学报（医学版）
J Hunan Normal Univ（Med Sci）
2011，8（2）82
(amentoflavone)对照品(自制，纯度＞99.0%)。 甲醇为
色谱纯，醋酸、乙醇等均为分析纯。 兖州卷柏药材
(采自于广西资源县)， 购于湖南九芝堂医药责任有
限公司，为 Selaginella involven Spring 的干燥全草。
兖州卷柏炭制品，我们依据 2010 年版《中国药典》
(一部)[2]， 以炭药色泽深浅的标准要求进行操作，把
握炒炭存性技术。 取兖州卷柏药材 1000 g，切断
长度约 0.5 cm，过 10 目筛，将细粉与小段分档，选
用清炒法分锅炒。将铁制炒锅用武火烧炭至 180℃，
将分档的药材投入锅内， 用中火人工不断翻炒 10
min，至药物表面呈焦褐色，内呈焦黄色，微喷水，熄
灭火星，取出，晾干。
2方法与结果
2.1 色谱条件[8] 色谱柱:YMC-Pack ODS-AQ L1 (250
mm×4.6 mm, 5 μm)，流动相：甲醇-0.2%醋酸水溶液，
梯度洗脱，流速为 1.0 mL/min，柱温：25℃，检测波
长为 257 nm，进样量为 20 μL。
2.2 对照品溶液的配制 精密称取穗花杉双黄酮约
20.00 mg，置 100 mL 容量瓶中，甲醇超声溶解并稀
释至刻度，摇匀，经 0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
2.3 供试品溶液的制备 精密称取兖州卷柏生品和
炭制品粗粉)各 10.0g，加石油醚 100 mL 回流脱脂 2
h，滤过，残渣挥净石油醚后，置 250 mL的圆底烧瓶
中，加入甲醇 120 mL,加热回流提取 2 次，90 min/
次，合并提取液，趁热过滤，减压浓缩，转移至 50
mL 容量瓶中，甲醇稀释至刻度，摇匀，经 0.45 微孔
滤膜滤过，即得。
2.4 方法可行性考察 分别精密吸取对照品溶液
与供试品溶液各 20 μL， 按上述色谱条件进样，穗
花杉双黄酮色谱理论塔板数＞8000， 对称因子为
0.98，与相邻杂质峰的分离度＞2.0，对照品穗花杉双
黄酮以及供试品色谱图见图 1。
图 1 高效液相色谱
A.对照品； B.供试品 1.穗花杉双黄酮
2.5 线性关系 精密吸取对照品溶液 2、4、6、8、10、
20、40 μL， 按上述色谱条件分别进样测定峰面积，
以峰面积(Y)为纵坐标、进样量(X) (μg)为横坐标进
行线性回归求得线性方程为：Y=3362X＋102.3 (r=
0.99998)。 结果表明：进样量在 0.06~1.2 μg 范围内
线性关系良好。
2.6 回收率试验 精密称取同一已知穗花杉双黄
酮含量的兖州卷柏叶粉末 5g 共 6 份， 精密加入一
定量的穗花杉双黄酮对照品，按2.3项下供试品
溶液的配制方法制备和测定，计算回收率，结果见
表 1。 结果表明本法回收率良好。
表 1 穗花杉双黄酮回收率试验结果
编号
1
2
3
4
5
6
取样量(g)
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
5.00
样品含量(mg)
30.85
30.85
30.85
30.85
30.85
30. 85
加入量(mg)
30.66
30.93
31.03
31.12
30.58
30.78
测得总量(mg)
61.34
61.32
61.56
61.74
61.46
61.29
回收率(/%)
99.44
98.51
98.97
99.26
100.1
99.13
平均回收率(%)
99.24
RSD(%)
0.53
兖州卷柏炭制前后穗花杉双黄酮的含量变化 孙兴力，等 83
2.7 精密度试验
分别精密吸取2.2对照品溶液，在同一天连
续进样 6 次及连续三天，按2.1项下色谱条件测
定，记录色谱图。 测定穗花杉双黄酮峰面积值。 结
果： 结果日内 RSD＝0.43%(n=6)， 日间 RSD＝0.51%
(n=3)，表明本方法精密度较高。
2.8 重复性实验
取同一批兖州卷柏样品，分别按2.3项下方
法平行制备成 5份供试品溶液。精密吸取供试品溶
液 10 μL 注入液相色谱仪，按2.1项下色谱条件
测定，并记录峰面积，采用外标法以峰面积计算穗
花杉双黄酮的含量。 结果 RSD＝0.36%(n＝5)，表明本
方法重复性良好。
2.9 稳定性试验
分别精密吸取供试品溶液 10 μL，室温下于 0、
2、4、8、12、24、48 h 注入液相色谱仪，按2.1项下
色谱条件测定，并记录峰面积。结果 RSD＝0.21%(n=
7)，表明供试品溶液 48小时内稳定性良好。
2.10 含量测定
精密称取兖州卷柏生品和炭制品给 6 份，按
照2.3项下方法制备，得 12 份供试样品溶液，精
密吸取对照品溶液与供试品溶液，按上述色谱条件
进样测定，外标法计算含量，结果见表 2。
3 讨 论
本实验在中医药理理论指导下，将传统与现代
方法相结合，探讨兖州卷柏炮生为熟过程中穗花杉
双黄酮含量的变化，所建立的兖州卷柏中的穗花杉
双黄酮的测定方法操作简单、快速、准确。 灵敏度
高，重现性好，可为兖州卷柏的质量控制提供理论
依据。 由测定结果可以看出兖州卷柏炭制后，有效
成分穗花杉双黄酮的提取率远高于生药，该结论可
为兖州卷柏炮制机理和工艺研究提供参考依据。
参考文献:
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杉双黄酮的含量变化 [J]. 湖南师范大学学报 (医学版),
2011,8(1):76-78.
表 2 样品中穗花杉双黄酮含量测定
1
2
3
4
5
6
穗花杉双黄酮含量 (mg/g)
5.967
6.243
6.513
6.342
6.145
5.738
平均值(%)
6.158
RSD(%)
0.28
穗花杉双黄酮含量 (mg/g)
7.913
8.054
8.214
7.769
8.343
8.187
平均值(%)
8.08
RSD(%)
0.21
湖南师范大学学报（医学版），2011，8（2）84