全 文 ：3.2　Nobiliside-A对色谱柱填料的选择性较大 ,同
样采用反相柱 ,其填料不同 ,峰形差异较大 ,且测定
得到的峰面积也不一样 ,这可能与柱填料对皂苷成
分的保留强度不一样所致 。在选择流动相系统时发
现 ,甲醇与水作为流动相峰形较好 ,峰宽较窄 ,这可
能与 Nobiliside-A在甲醇及含水甲醇中的溶解性较
好有关 。
3.3　雾化器载气流速和漂移管温度是 ELSD检测
器的两个重要可调参数[ 2] 。载气流速太低 ,会产生
大量液滴 ,从而增加基线噪音 ,而载气流速太高时雾
滴量下降导致信号降低。漂移管温度过高 ,分析样
品部分挥发导致检测器响应下降;温度降低 ,溶剂挥
发不够完全而导致基线不稳。在保证基线噪音较小
的情况下 ,温度以低一些为好 ,这样有助于得到较大
的颗粒 ,从而提高散射光的强度 。
3.4　ELSD最大的局限性就是流动相必须能够全
部蒸发 ,流动相要使用蒸发残渣低的 HPLC溶剂 ,以
避免不挥发物沉积在加热室及光学检测池气体中 ,
因此 ,只能选择挥发性化合物来调节流动相的 pH,
例如冰醋酸 、三乙胺等。本试验中采用冰醋酸来调
节 pH值以改善峰形。
3.5　ELSD的响应值与被测物浓度的关系曲线比
较复杂 ,在一定的范围内 ,峰面积的自然对数和浓度
的自然对数呈较好的线性关系。因为散射光强度的
增加速度快于粒子直径的四次方 ,当峰被冲洗出来
时 ,单位时间或单位体积溶剂中溶液粒子的数目为
常数 ,而这些粒子中溶质的浓度却在变化 ,因此当溶
剂挥发后 ,组成纯溶质粒子的大小与柱出口溶质的
浓度的立方根成正比[ 3] 。
参考文献:
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毛细管区带电泳法测定甜瓜蒂药材中葫芦素 B的含量
刘金丹 , 　孙国祥＊ , 　池剑玲
(沈阳药科大学药学院 ,辽宁 沈阳 110016)
收稿日期:2007-04-12
基金项目:国家自然科学基金重大研究计划资助项目(90612002)。
作者简介:刘金丹(1983～ ),女 ,硕士研究生 ,从事中药 HPCE系统研究。
＊通讯作者:孙国祥(1962～ ),男 ,博士 ,硕士生导师 ,研究方向:中药指纹图谱学体系及其信息学研究 ,电话:024-23986286, E-mail:gxswm-
wys@ 163.com
关键词:毛细管区带电泳;甜瓜蒂;葫芦素 B
摘要:目的:建立毛细管区带电泳法(CZE)测定甜瓜蒂药材中葫芦素 B含量的分析方法。方法:采用石英毛细管(75 cm
×75μmI.D.), 以 50mmol/L硼砂溶液(含 5%乙腈)为背景电解质 , 运行电压 12.0kV,紫外检测波长 228nm,以盐酸氯
丙那林为内标测定不同产地的甜瓜蒂药材中葫芦素 B含量。结果:测定葫芦素 B的线性范围为 0.15 ～ 1.2 mg/mL,以相
对峰面积对浓度回归的方程为 y=0.003 4x+0.058, 相关系数 r=0.999 2(n=6)。平均回收率 100.2%(RSD=2.2%)。
结论:该法简便快速 、重现性好 、低消耗和低污染 , 可用于测定甜瓜蒂药材中葫芦素 B的含量。
中图分类号:R284.1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2008)04-0570-04
DeterminationofcucurbitacinBinPedicelusMelobycapilaryzoneelectropho-
resis
LIUJin-dan, 　SUNGuo-xiang, 　CHIJian-ling
(ColegeofPharmacy, ShenyangPharmaceuticalUniversity, Shenyang110016 , China)
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KEYWORDS:capilaryzoneelectrophoresis;PedicelusMelo;cucurbitacinB
ABSTRACT:AIM:TodevelopanewmethodtodeterminecucurbitacinBinPedicelusMelobycapilaryzone
electrophoresis(CZE).METHODS:Althesampleswereanalysedonafusedsilicacapilary(75cm×75μmI.
D.)byusing50 mmol/Lsodiumboratesolution(containing5% acetonitrile)asthebackgroundelectrolytewith
therunningvoltageat12.0kVanddetectionwavelengthof265nm.Andclorprenalinehydrochloridewasapplied
astheinternalstandard.RESULTS:Theresultsshowedagoodlinearcorelationbetweenrelativepeakareaofcu-
curbitacinB(y)anditsconcentration(x)overtherangeof0.15 ～ 1.2 mg/mL.Regressionequationwasy=
0.003 4x+0.058, r=0.999 7, andtheaveragerecoveryforbaicalinwas100.2% withtheRSDat2.11%.
CONCLUSION:Themethodisrapid, simple, reproducibleandproduceslowpolution.Itservesasanovelway
todeterminecucurbitacinB.
　　甜瓜蒂为葫芦科一年生草质藤本植物甜瓜 Cu-
cumismeloL.的果蒂 ,别名瓜蒂 、苦丁香 ,治痰涎宿
食 、壅塞上脘 、胸中痞鞭 、风痰癫痫 、湿热黄疸 、四肢
浮肿 、鼻塞 、喉痹 ,可用于痰热郁积 、痰迷清窍 、精神
错乱 ,以及误食毒物 、停于胃脘 、尚未吸收者及湿热
黄疸。主要含葫芦素 B、E、D,异葫芦素 B,葫芦素 B
葡萄糖苷 ,以及葫芦素类化合物 ,尚含甾醇 、皂苷及
氨基酸 [ 1] 。实践证明甜瓜蒂治疗顽固性黄疸疗效
显著[ 2] 。所含葫芦素 B(结构见图 1)是抗肝炎 、肝
图 1　葫芦素 B结构
Fig.1　ThestructureofcucurbitacinB
癌的主要有效单体 [ 3] 。葫芦素片是近年研制成功
主要用于原发性肝癌治疗的药物 [ 4] 。药理实验证
明葫芦素具有体外细胞毒和抗肿瘤作用 、影响免疫
系统和提高免疫力 、抗化学环境致癌等作用 ,但是 ,
甜瓜蒂本身具有毒性 ,其水煎剂口服过量易引起严
重后果 [ 5] 。另外 ,服用葫芦素 BE后 ,部分病例可引
起腹部不适 、恶心 、轻度腹泻等胃肠道反应 ,少数病
例可出现短暂口干 、头昏。超大剂量使用时 ,可引起
严重贫血 、频繁呕吐和腹泻 ,甚至呼吸 、循环衰竭而
死亡[ 6] 。找到简易 、价廉的测定葫芦素 B的方法显
得很重要。文献中有 HPLC法测定葫芦素 B片的含
量及均匀度 [ 4] ,以及葫芦素滴丸中葫芦素 B的含
量 [ 7] ,但未见毛细管电泳法测定葫芦素 B的报道 。
本试验以毛细管区带电泳法测定甜瓜蒂药材中葫芦
素 B的含量 ,具有简便 、快捷和重现性好的特点 ,对
甜瓜蒂药材的质量控制提供了新参考。
1　仪器与试剂
　　沈阳辰阳 HPCE-3000高效毛细管电泳仪(沈阳
辰阳生物技术有限公司),数据由江申色谱工作站
(大连江申分离科学技术公司)记录 , KS-120D超声
波清洗器 (宁波科生仪器厂), RE-52旋转蒸发仪
(上海亚荣生化仪器厂), BS110S电子天平(北京赛
多利斯仪系统有限公司)。葫芦素 B(自制 ,色谱归
一化含量不低于 99.8%)。盐酸氯丙那林(辽宁沈
阳药大集琦药业有限责任公司)。硼砂 、硼酸 、SDS
为分析纯 ,庚烷磺酸钠 、乙腈为色谱纯。所用水为去
离子水。微孔滤膜(0.45 μm×25 mm,上海兴亚净
化材料厂)。 10批甜瓜蒂产于上海市南汇区(S1)、
宁夏中卫市中宁县(S2)、新疆师县(S3)、酒泉市安
西县(S4)、玉溪市通海县(S5)、济南市高官寨镇
(S6)、江西省萍乡市芦溪县 (S7)、沧州市沧县
(S8)、兰州市皋兰县(S9)、湖南省株洲县(S10),经
笔者鉴定均为葫芦科植物甜瓜 CucumismeloL.的果
蒂。
2　方法与结果
2.1　溶液配制
　　对照品溶液　精密称取葫芦素 B对照品 26.0
mg,置 5 mL量瓶中 ,用乙腈溶解并定容至刻度 ,摇
匀 ,即得。
供试品溶液　取于 60 ℃干燥 40min的甜瓜蒂
药材 2.0 g,精密称定 ,加 95%(体积百分数)乙醇 50
mL,回流提取 2 h,滤过 ,残渣加 95%(体积百分数)
乙醇 40mL继续回流 1.5 h,合并 2次滤液 ,减压浓
缩至 20mL,加 80 mL水沉 24 h,滤过 ,减压回收乙
醇至约 10 mL,用水定容至 25 mL,摇匀 ,即得 。
内标溶液　精密称取盐酸氯丙那林 0.176 0 g,
置 10 mL量瓶中 , 用水溶解并稀释至刻度 , 得到
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17.6mg/mL的内标储备液。取适量稀释为 8.8mg/
mL的内标溶液 。
2.2　电泳条件
　　石英毛细管 75 cm×75 μmI.D.,有效长度 63
cm(河北永年光导纤维厂);紫外检测波长 228 nm;
灵敏度 0.005 AUFS;运行电压 12 kV;电流约 102
mA;BGE为 50mmol/L硼砂(含 5%乙腈);重力进
样 20s,高度 8.5 cm。每次试验开始前用 BGE冲洗
毛细管柱 5min,再运行 5 min后进样 ,每两次运行
之间用 BGE冲柱 5 min,每天实验结束后依次用 0.1
mol/LNaOH和水冲洗毛细管 10min。
2.3　系统适用性试验
　　取葫芦素 B对照品溶液和 S1供试品溶液分别
进样分析 ,记录电泳图见图 2。对比迁移时间可知
图 2B中 15.2 min峰为葫芦素 B,其理论板数不低
于 3.1×104。在样品供试液中添加葫芦素 B对照
品液 ,进样 ,结果电泳峰增也显示该峰为葫芦素 B
峰 ,见图 2C。
图 2　葫芦素 B对照品(a),药材(b)和峰增益(c)电泳图
Fig.2　ElectropherogramsofcucurbitacinB(a),
sample(b)andspikedsample(c)
2.4　试验条件优化
2.4.1　提取溶剂选择
　　由于葫芦素 B为四环三萜类化合物 , 宜使用
水 、甲醇 、乙醇等溶剂进行提取 [ 8-11] 。分别以水 、
25%(v/v)乙醇 、50%(v/v)乙醇 、95%(v/v)乙醇和
甲醇为提取溶剂时(前三者乙醇醇沉 ,其他水沉)检
测甜瓜蒂电泳图 ,发现以 95%乙醇提取样品时葫芦
素 B与相邻峰分离好且峰形尖锐 。因此选择 95%
醇提并进行水沉 。
2.4.2　电泳条件优化
采用多种缓冲盐溶液为 BGE进行分离 ,分别考
察了 50 mmol/L硼砂 、50 mmol/L硼砂 (含 5%乙
腈)、 50 mmol/L硼砂-20 mmol/LSDS溶液 、 25
mmol/L硼砂-25 mmol/L硼酸溶液 、 10 mmol/L硼
砂 -10mmol/LSDS溶液 、10mmol/L硼砂 -10mmol/L
SDS溶液(含 1 mg/mL庚烷磺酸钠)作 BGE时的分
离情况。结果使用后 4者作背景电解质时 ,葫芦素
B与相邻峰分离不理想;使用 50 mmol/L硼砂(含
5%乙腈)能获得最理想分离。
2.4.3　内标物选择
由于 CE重复性不如 HPLC,为提高定量分析准
确度 ,故采用内标工作曲线法测定甜瓜蒂中葫芦素
B含量。试验了多种化合物 ,其中盐酸氯丙那林的
迁移时间和葫芦素 B的迁移时间接近且完全分离 ,
见图 2 ,因此选为内标 。
2.5　线性关系的考察
　　精密量取 1.52 mg/mL的葫芦素 B溶液 0.5,
1.0, 2.0, 3.0, 4.0mL分别置 5mL量瓶中 ,各加 8.8
mg/mL的内标溶液 1 mL,用 BGE稀释至刻度 ,摇
匀 ,得葫芦素 B浓度分别为:152、 304、 608、 912、
1 216μg/mL。重力进样 20 s,记录电泳图 ,以相对
峰面积 y对葫芦素浓度 x(mg/mL)回归得线性方程
y=0.003 4x+0.058, r=0.999 2(n=6),葫芦素 B
在0.15 ～ 1.2mg/mL范围内线性关系良好。
2.6　精密度试验
　　取线性关系考察项下 0.608mg/mL的葫芦素 B
对照品溶液 ,重复进样 6次 ,测定葫芦素 B相对迁
移时间的 RSD为 0.56%,相对峰面积 RSD=1.3%,
表明进样精密度较好。
2.7　重复性试验
　　精密称取 S1药材 5份分别制备供试液 ,各进样
20 s,记录电泳图 。结果葫芦素 B的相对迁移时间
的 RSD为0.18%,相对峰面积的 RSD为 1.5%,表明
方法的重复性良好 。
2.8　稳定性试验
　　制备 0.608 mg/mL葫芦素 B对照品溶液 ,分别
0、2、4、8、12h进样 ,结果葫芦素 B相对迁移时间的
RSD为0.86%,相对峰面积的 RSD为 1.6%,表明其
溶液在 12 h内基本稳定。
2.9　回收率试验
　　精密称取葫芦素 B对照品 38.0 mg,置 25 mL
量瓶中 ,用 10 mL乙腈溶解后 ,用 50 mol/L硼砂稀
释至刻度 ,得 1.52mg/mL的葫芦素 B对照品溶液 。
采用加入回收法 ,在已知含量的供试品溶液中 ,
加入一定量的葫芦素 B对照品溶液 ,按上述选定试
验条件测定 。测定 6次的平均回收率为 100.2%,
RSD为 2.11%, 表明该方法准确度合格。结果见
表 1。
2.10　样品测定
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　　取甜瓜蒂约 2.0 g,精密称定 ,按 “2.1”项制备
供试液 。精密加入 8.8mg/mL内标液 1 mL置 5 mL
量瓶中 ,用供试液定容至刻度 ,摇匀。进样 20 s,记
录电泳图(见图 3),以相对峰面积按标准曲线法计
算葫芦素 B含量见表 2。结果表明 ,宁夏中卫市中
宁县白马乡 、新疆师县 、甘肃省酒泉市安西县河东
乡 、云南玉溪市通海县和济南市高官寨镇的甜瓜蒂
药材中葫芦素 B含量较高 , 其他几个产地相对较
低 ,总体差异较大 ,可能与各地土壤 、气候 、采收时间
不同有关 。
表 1　 葫芦素 B回收率
Table1　 TherecoveryofcurcubitacinB
No. Added/μg Found/μgRecovery/% Mean/% RSD/%
1 520 511 98.3
2 520 505 97.1
3 520 522 100.4
4 520 535 102.8
5 520 528 101.5
6 520 524 100.8
100.2 2.11
表 2　 不同产地甜瓜蒂中葫芦素 B含量(n=3)
Table2　 ThecontentsofcucurbitacinBinPedicelusMelocultivatedindifferentplaces(n=3)
Sources S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10
Content/% 0.67 1.02 1.05 1.12 1.10 1.14 0.69 0.65 0.66 0.65
RSD% 1.4 1.1 0.7 1.0 1.0 1.3 2.7 1.8 2.0 1.3
图 3　葫芦素 B对照品(Standard)和甜瓜蒂样品电
泳图(S1-S10);1.内标 , 2.葫芦素 B
Fig.3　ElectropherogramsofcucurbitacinBstand-
ard(Standard)andPedicellusMeloSample
(S1-S10)
1.Internalstandard;2.cucurbitacinB
3　讨论
　　测定葫芦素 B波长常用 228 nm[ 4, 7, 10, 11] ,由于
葫芦素 B几乎不溶于水 ,回收试验时 ,不能直接把
葫芦素 B对照品加入甜瓜蒂供试液中 。乙腈对
BGE电性质影响小 ,所以用其配制葫芦素 B对照品
液 。回收试验用样品溶液在制备后要尽快实验 ,以
避免葫芦素 B析出而产生的干扰。在制备标准曲
线时 ,曾尝试用甲醇配制葫芦素 B对照品溶液 ,发
现葫芦素 B峰形不好 ,可能是由于甲醇和背景电解
质溶液的电导差异的影响。改用乙腈配制后 ,葫芦
素B的乙腈溶液峰形较好 ,但和内标溶液混合后 ,
内标峰形不好 。因此 ,葫芦素 B先用乙腈溶解后 ,
再用 50 mmol/L硼砂稀释 ,使得最终配制的葫芦素
B对照品溶液的溶剂和背景电解质(50 mmol/L硼
砂含 5%乙腈)电导性质相近 ,使葫芦素 B和内标都
获得较好峰形 。本试验建立了一种低消耗 、低污染 、
样品处理简单的控制甜瓜蒂药材质量新方法 。
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