全 文 ：作者简介：冯淑萍，主管中药师；Ｅ－ｍａｉｌ：ｆｓｐｘｓｔ＠１６３．ｃｏｍ
甜瓜蒂提取工艺研究
冯淑萍 （山西省运城市食品药品检验所，运城　０４４０００）
摘要：　目的 优选甜瓜蒂提取工艺条件。方法 以乙醇浓度、乙醇用量、提取时间和提取次数为考察因
素，以葫芦素Ｂ含量为评价指标，采用正交试验优选最佳提取工艺。结果 最佳工艺条件为采用超声波提
取法，乙醇浓度为５５％，５０倍量乙醇，提取２次，每次４５分钟。结论 该提取工艺稳定可行，评价指标
可控，对于规范甜瓜蒂的提取工艺和甜瓜蒂药材的质量控制具有一定的意义。
关键词：　甜瓜蒂；葫芦素Ｂ；正交试验；生产工艺；高效液相色谱法
中图分类号：Ｒ９１７．０１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００２－７７７７ （２０１４）０６－０６１４－０４
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　ｔｈｅ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｍｅｌｏ　Ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ
Ｆｅｎｇ　Ｓｈｕｐｉｎｇ（Ｙｕｎｃｈｅｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　Ｄｒｕｇ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ，Ｙｕｎｃｈｅｎｇ　０４４０００）
ＡＢＳＴＲＡＣＴ：　 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｏｆ　Ｍｅｌｏ
Ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒｅｇａｒｄｉｎｇ　ｔｈｅ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｔｈａｎｏｌ　ａｍｏｕｎｔ，ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｄｕｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅｓ　ａｓ　ｔｈｅ　ｔｅｓｔｉｎｇ　ｆａｃｔｏｒｓ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｉｓｏｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｉｎｄｉｃｅｓ，ｔｈｅ
ｏｐｔｉｍａｌ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ
ａｓ　ｆｏｌｏｗｓ：ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　ａｄｏｐｔｅｄ；５０ｔｉｍｅｓ　５５％ｅｔｈａｎｏｌ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ａｓ　ｔｈｅ　ｓｏｌｖｅｎｔｓ；
ｔｈｅ　ｒａｗ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｗａｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｔｗｉｃｅ（ｆｏｒｔｙ－ｆｉｖｅ　ｍｉｎｕｔｅｓ　ｆｏｒ　ｅａｃｈ　ｔｉｍｅ）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎｓ　Ｔｈｅ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ｉｓ　ｓｔａｂｌｅ，
ｆｅａｓｉｂｌｅ，ａｎｄ　ｗｉｔｈ　ｃｏｎｔｒｏｌａｂｌｅ　ａｓｓｅｓｓｍｅｎｔ　ｉｎｄｉｃａｔｏｒｓ，ｗｈｉｃｈ　ｉｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｔａｎｄａｒｄｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅ
ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｅｓｓ　ａｎｄ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｌｏ　Ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ．
ＫＥＹ　ＷＯＲＤＳ：　Ｍｅｌｏ　Ｐｅｄｉｃｅｌｕｓ；ｉｓｏｃｕｃｕｒｂｉｔａｃｉｎ　Ｂ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｄｅｓｉｇｎ；ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　ｐｒｏｃｏｓｓ　ＨＰＬＣ
　　甜瓜蒂为葫芦科植物甜瓜Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｍｅｌｏ　Ｌ．的
干燥果柄，具有催吐功效，用于治疗食物中毒、瘫
涎不化、癫痫［１］。现在将其用于治疗哮喘、黄疸型
传染性肝炎、糖尿病、中枢性呃逆、精神神经性疾
病以及戒酒等［２］。现代药理研究证实，甜瓜蒂具有
保肝、抗癌、免疫调节、抗炎等功效［３］．甜瓜蒂主
要含葫芦素系化合物，包括葫芦素Ｂ、葫芦素Ｅ、
葫芦素Ｄ、异葫芦素Ｂ、葫芦素Ｂ葡萄糖苷等，还
含有甾醇、皂苷及氨基酸［４］。葫芦素系化合物中，
葫芦素含量占８０％以上，是抗肝炎、肝癌的有效
单体［５］。国内现在收载甜瓜蒂的中药材标准均无含
量测定项，为更好的控制甜瓜蒂药材质量，充分有
效的提取葫芦素Ｂ，本文采用正交试验设计方法优
选甜瓜蒂最佳提取工艺，为甜瓜蒂药材的质量检测
提供参考。
１　仪器与试药
１．１　仪器
Ｗａｔｅｒｓ　ｅ２６９５高效液相色谱仪 （紫外可见光
检测器、自动进样器）；ＵＶ－２４５０紫外分光光度
计；ＫＱ３２００ＤＢ型数控超声波清洗器；ＡＢ１３５－Ｓ
电子天平。
１．２　试药
葫芦素Ｂ对照品，由成都曼思特生物科技有
限公司提供，批号 ＭＵＳＴ－１１０８１６０１。
甜瓜蒂采自山西运城夏县尉郭乡白张村，经陕
西中医学院雷国莲教授鉴定为葫芦科植物甜瓜
Ｃｕｃｕｍｉｓ　ｍｅｌｏ　Ｌ．的干燥果柄。甲醇为色谱纯，水
为重蒸水，其余为分析纯。
２　方法与结果
２．１　色谱条件
４１６ 中国药事２０１４年第２８卷第６期
DOI:10.16153/j.1002-7777.2014.06.007
色谱柱：岛津 ＶＰ－ＯＤＳ（２５０ｍｍ　Ｘ　４．６ｍｍ，
５μｍ）；十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动
相：甲醇－水 （６０∶４０）；检测波长为２２８ｎｍ；流
速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：３０℃；进样量：对照
品溶液、供试品溶液各进样１０μＬ。
在此色谱条件下，供试品中的葫芦素Ｂ与其
他杂质峰基本能达到基线分离，见图１。
ａ．对照品溶液；ｂ．供试品溶液；１．葫芦素Ｂ
图１ 甜瓜蒂 ＨＰＬＣ色谱图
２．２　正交试验设计
分别以乙醇浓度 （Ａ）料液比 （Ｂ）超声时间
（Ｃ）提取次数 （Ｄ）为考察因素，每个因素选取３
个水平，以葫芦素Ｂ含量为评价指标设计Ｌ９ （３４）
四因素三水平正交试验表，因素水平表见表１。
表１　正交试验因素水平表
　　　　因素
水平　　　　
提取溶剂 料液比 超声时间 提取次数
１　 ５５％乙醇 １：２５　 １５分钟 １
２　 ７５％乙醇 １：５０　 ３０分钟 ２
３　 ９５％乙醇 １：１００　 ４５分钟 ３
２．３　正交试验结果
按表１安排正交试验，按正交试验表各行所列
条件进行试验，所得供试品溶液测定葫芦素Ｂ的
峰面积并计算含量，进行方差分析以确定是否有
显著性差异。正交试验结果见表２，方差分析结
果见表３．由表２、表３可知，各因素对工艺的影
响顺序为Ｃ＞Ａ＞Ｄ＞Ｂ，得到Ａ１Ｂ２Ｃ３Ｄ２为优选方
案，即以５５％乙醇作提取溶剂，料液比为１：
５０，超声提取２次，每次４５分钟测定葫芦素Ｂ
的含量。
表２　正交试验结果
　　　因素
试验号　　　　　
１　 ２　 ３　 ４
Ａ　 Ｂ　 Ｃ　 Ｄ
葫芦素Ｂ含量
（ｍｇ·ｇ－１）
１　 １．００　 １．００　 １．００　 １．００　 ２．５２０４
２　 １．００　 ２．００　 ２．００　 ２．００　 ２．６０７９
３　 １．００　 ３．００　 ３．００　 ３．００　 ２．８４９０
４　 ２．００　 １．００　 ２．００　 ３．００　 ２．５１８０
５　 ２．００　 ２．００　 ３．００　 １．００　 ２．８５２９
６　 ２．００　 ３．００　 １．００　 ２．００　 ２．１８７８
７　 ３．００　 １．００　 ３．００　 ２．００　 ２．５４２２
８　 ３．００　 ２．００　 １．００　 ３．００　 ２．２７３８
９　 ３．００　 ３．００　 ２．００　 １．００　 ２．５７４７
Ｋ１ ７．９８　 ７．５８　 ６．９８　 ７．３４
Ｋ２ ７．５６　 ７．７３　 ７．７０　 ７．９５
Ｋ３ ７．３９　 ７．６１　 ８．２４　 ７．６４
Ｒ　 ０．２０　 ０．０５　 ０．４２　 ０．１９
５１６中国药事２０１４年第２８卷第６期
表３　方差分析结果
方差来源 离均差平方和 自由度 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 ０．０６　 ２　 ０．９８ ＞０．０５
Ｃ　 ０．２７　 ２　 ４．３１ ＞０．０５
Ｄ　 ０．０５　 ２　 ０．９２ ＞０．０５
误差 ０．００　 ２　 ０．０７
　注：Ｆ０．０５（２，２）＝１９
２．４　对照品溶液的制备!
精密称取葫芦素Ｂ对照品约１０．０６ｍｇ，置于
２５ｍＬ量瓶中，加适量５５％乙醇超声溶解，定容
得储备液。精密移取储备液１ｍＬ，置５ｍＬ量瓶
中，用 ５５％ 乙醇稀释，摇匀，制成每 １ｍＬ 含
８０．４８μｇ的溶液。
２．５　供试品溶液的制备
取本品粉末约１ｇ （过三号筛），精密称量，置
具塞锥形瓶中，精密加入５５％乙醇５０ｍＬ，超声
处理 （功率２５０Ｗ，频率４０Ｈｚ）４５分钟，放冷，
滤过，残渣再精密加入５５％乙醇５０ｍＬ，超声处
理４５分钟，放冷，滤过，合并滤液，用５５％乙醇
定容至１００ｍＬ量瓶中，０．４５μｍ滤膜滤过，取续
滤液，即得。
２．６　线性关系考察
精密量取葫芦素Ｂ对照品溶液 （８０．４８μｇ·
ｍＬ－１），分别进样１，２，４，８，１２，１６，２０μＬ注入
液相色谱仪，测定峰面积，以进样量 （μｇ）为横
坐标，峰面积为纵坐标，作标准曲线，得回归
方程：Ｙ＝１Ｅ＋０６Ｘ－３６６３７，ｒ＝０．９９９７
结果显示进样量在０．０８０４～１．６０８０μｇ范围内
有良好的线性关系。
２．７　精密度试验
取对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样５
次，测定峰面积，结果ＲＳＤ为０．４％ （ｎ＝５），表
明方法精密度良好。
２．８　稳定性试验
取同一供试品溶液，按上述色谱条件，分别在
０，３，６，９，１２，２４ｈ测定峰面积，结果ＲＳＤ为
１．４％，显示供试品溶液至少在２４小时内基本稳
定。
２．９　重复性试验
精密称取同一样品５份，按２．５项下方法制备
供试品溶液，测定峰面积并计算葫芦素Ｂ含量，
结果葫芦素 Ｂ 的平均含量为２．７２６７ｍｇ·ｇ－１，
ＲＳＤ＝１．５％ （ｎ＝５）。
２．１０　加样回收率试验
精密称取已知含量样品 （２．７１７９ｍｇ·ｇ－１）６
份，分 别 精 密 加 入 葫 芦 素 Ｂ 对 照 品 储 备 液
（８０．４８μｇ·ｍＬ－
１）１０ｍＬ，按２．５项下方法制备供
试品溶液，测得峰面积并计算含量，结果显示平均
回收率为１０２．７２％，ＲＳＤ＝０．６％，表明加样回收
率良好。
２．１１　工艺验证
按正交试验优选所得提取条件开展工艺验证试
验，以５５％乙醇作提取溶剂，料液比为１：５０，超
声提取２次，每次４５分钟测定葫芦素Ｂ的含量。
结果显示，按正交试验优化的醇提工艺，经３次提
取验证，工艺稳定可行。结果见表４。
表４　验证试验结果
样品
含量１
（ｍｇ．ｇ－１）
含量２
（ｍｇ·ｇ－１）
平均（ｍｇ·ｇ－１）
１　 ２．７３４５　 ２．７２６７　 ２．７３０６
２　 ２．７１２６　 ２．７１７５　 ２．７１５０
３　 ２．７２３３　 ２．７１９７　 ２．７２１５
平均值 ２．７２２４
３　讨论
３．１　提取溶剂的选择
葫芦素类是从葫芦科植物中提取的苦味苷元成
分，是一类高度氧化的四环三萜类化合物，具有多
种生物活性［６］。目前国内现有文献对葫芦素系化合
物的提取一般采用甲醇或乙醇［７－９］。预试验初步选
用甲醇、５０％甲醇、乙醇分别超声处理３０分钟的
提取方法测定葫芦素Ｂ的含量，结果表明乙醇的
提取率较高于甲醇和５０％甲醇，并考虑到在进行
中药的质量检测时，建议尽可能选用毒性较低的溶
剂，以减少对检验人员的危害，以及对环境的影
响［１０］。故本试验选择乙醇为提取溶剂，再进行不
同浓度的优化选择。
３．２　提取条件的选择
在确定乙醇为提取溶剂的前提下，预实验比较
了超声处理和加热回流对葫芦素Ｂ含量的影响，
结果表明，在同一浓度下乙醇提取液超声处理３０
分钟的提取率高于加热回流１小时，且超声提取法
操作简单，提取时间短，易于控制，误差较小，故
本试验选择超声处理的提取方法，再进行不同提取
时间的优化选择。
６１６ 中国药事２０１４年第２８卷第６期
参考文献：
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术出版社，２００６：３０３５－３０３７．
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［５］ 中华人民共和国卫生部药品标准 ［Ｓ］．ＷＳ３－Ｂ－３７１１－９８．
［６］ 华洁，马素珍，阎立萍．葫芦素滴丸与片剂的溶出对比研究
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［７］ 吴军侠，赵红霞．高效液相色谱法测定甜瓜蒂中葫芦素Ｂ
含量 ［Ｊ］．化学与生物工程，２０１０，２７ （１）：９２－９４．
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究 ［Ｊ］．药物分析杂志，２００７，２７ （６）：７９１－７９５．
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思考 ［Ｊ］．中国中药杂志，２００９，３４ （１９）：３７－３９．
（收稿日期　２０１３－０５－２２　　编辑　范玉明）
７１６中国药事２０１４年第２８卷第６期