全 文 ：乌桕根皮醇提物萃取部位抗猪大肠杆菌活性分析
陈国华1 , 何晓雯2 ,彭元丽1 ,邹坤1 ,周 媛1　(1.三峡大学 ,化学与生命科学学院 ,天然产物研究与利用湖北省重点实验室 ,湖北宜
昌 443002;2.湖北省宜昌市中心医院检验科 ,湖北宜昌 443003)
摘要　[目的] 探讨乌桕根皮醇提物各部位对猪大肠杆菌 4种血清型的抗菌活性。[方法] 用 95%乙醇 80 ℃回流提取乌桕根皮 , 将醇提
液浓缩后依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取 ,最后得到萃余的水相 , 测试各部位的抗菌活性。[结果] 醇提物的石油醚部位、正丁醇
部位和水部位没有抑制作用 ,乙酸乙酯部位对血清型K88、F41和 987P具有抑制效果 ,而对血清型K99无效。因此 ,用中药材防治猪大肠
杆菌疾病时 ,应该考虑到血清型差异。[结论] 乌桕根皮提取物可以在一定程度上防治大肠杆菌引起的猪病。
关键词　乌桕根皮;醇提萃取部位;猪大肠杆菌血清型;抗菌活性
中图分类号　S858.28　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2008)18-07663-01
Antibacterial Activity of Fractions of Ethanol Extracts from Root Bark of Sapium sebiferum against Escherichia coli from Swine
CHEN Guo-hua et al　(Hubei Key Laboratory of Natural Products Research and Development ,School of Chemistry and Life Science ,Three Gorges Uni-
versity, Yichang ,Hubei 443002)
Abstract　[Objective] The antibacterial activity of fractions of ethanol extracts from root bark of S .sebiferum was evaluated against 4 serotype of E.coli
from swine.[Method] Root bark of Sapium sebiferum was extracted by 95% ethanol , and ethanol extraction was fractioned by petroleun ether , ethyl ac-
etate and n-Butanol.Antibacterial activity of four fractions was tested.[ Result] The fractions of petroleun ether, n-Butanol and water didn t inhibited the
tested E.coli , and the fraction of ethyl acetate inhibited 3 serotypes of E.coli(K88 , F41 and 987P), but didn t express activity against K99 serotype.
So, when used Chinese traditional medicines to prevent and cure swine colibacillosis , it was better to choose some suitable ones according their serotype.
[ Conclusion] Root bark of S.sebiferum contained compounds displaying antibacterial activity against swine E.coli.
Key words　 Root bark of S.sebiferum;Fractions of ethanol extracts;Serotypes of swine E.coli;Antibacterial activity
基金项目　湖北省教育厅科学研究计划(Q200713002);三峡大学科研
启动基金(0620060113)。
作者简介　陈国华(1970-),男 ,湖南永州人 ,副教授 ,从事病原微生
物的防治研究。
收稿日期　2008-03-28
　　仔猪腹泻是目前规模化养猪生产中较严重的一种常见
多发病 ,有的猪场仔猪腹泻率高达 50%以上 ,死亡率达 15%
～ 20%[ 1] 。仔猪细菌性腹泻主要是由致病性大肠杆菌引起
的一类传染病 ,发病率和死亡率均很高[ 2] 。致病性大肠杆菌
耐药现象越来越严重 ,猪大肠杆菌腹泻导致的损失呈上升趋
势。所以 ,发掘新型的兽药意义重大。
1　材料与方法
1.1　试验药材　供试乌桕根皮采自湖北省宜昌市 亭区 ,
采集时间为 2007年 9月。乌桕根皮洗净后 ,在通风橱内晾
干 ,备用 。
1.2　提取方法　称取 2 kg干燥的乌桕根皮 ,粉碎 ,用 70%乙
醇 80 ℃回流提取 3次 ,收集提取液 ,过滤 ,收集滤液 , 50 ℃真
空浓缩。分别用石油醚 、乙酸乙酯 、水饱和正丁醇萃取 ,收集
各萃取部位和剩余的水相 ,将石油醚部位和乙酸乙酯部位真
空蒸干;正丁醇部位和水部位真空浓缩后冻干。干燥品保存
在 4 ℃冰箱内备用。
1.3　菌种培养　猪致病性大肠杆菌的血清型有 K88、K99、
987P 、F41 ,由中国兽医药品监察所提供。培养基为普通肉汤
培养基 ,由广东环凯微生物科技有限公司提供。试验菌种经
传代纯培养后 ,接种环菌种接种于普通肉汤培养基中 , 37 ℃
恒温箱培养 12 h , 使受试菌处在对数生长期即对药物最敏
感期。
1.4　抑菌试验　抑菌测试采用 Lehre等的双层琼脂纸片方
法 ,略有改变[ 3] 。在下层琼脂培养基凝固后 ,倒入上层琼脂
培养基(内含试验菌株 105 CFU/ml)。不同萃取物用石油醚 、
甲醇或水溶解至浓度为 4mg/ml ,将灭过菌的小滤纸片(直径
6 mm)分别浸透不同的药液 ,取出后风干 ,用浸泡灭菌水的滤
纸片作对照。最小抑菌浓度(MIC)为以肉眼不能观察到有细
菌生长的最低浓度 ,采用液体培养法测定 ,以 4 mg/ml为起
点 , 2倍稀释至 0.062 5mg/ml(培养液中浓度)。每组试验重
复 3 次。抗菌强弱以抑菌圈直径大小(除去滤纸片直径)
表示 。
1.5　数据处理　采用 SPSS 12.0 for Windows软件对多次抗
菌测试结果进行分析 ,试验数据以Mean±SD(mm)表示。
2　结果与分析
将培养皿于 37 ℃培养 24 h ,观察抑菌效果 ,记录各个抑
菌圈直径 ,然后用 SPSS 12.0 for Windows软件分析。对具有
抑菌活性的乙酸乙酯部位 ,采用液体培养的方法进行最小抑
菌浓度抗K88、K99、987P和F41测试。
　　由表 1 可知 ,醇提物乙酸乙酯部位对大肠杆菌血清型
K88、F41和 987P具有抑制作用 ,而对血清型K99没有抑制活
性 ,并且对F41的抑制作用大于对K88和 987P的作用 。研究
还表明 ,F41对乙酸乙酯部位更敏感(MIC为 0.25mg/ml),而
K88和 987P最小抑菌浓度较高(0.50mg/ml)。醇提物的石油
醚部位 、正丁醇部位和水部位没有活性。
表1　提取物对大肠杆菌4种血清型的抑菌效果 mm
Table 1　Inhibition effect of the extracts on 4 serotypes of E.coli
萃取部位
Extraction
fraction
大肠杆菌血清型
Serotypes of E.coli
K88 K99 F41 987P
石油醚 0 0 0 0
Petroleun ether
乙酸乙酯 2.33±1.12 0 3.56 ±1.33 2.44 ±0.53
Ethyl acetate
正丁醇 0 0 0 0
n-butanol
水Water 0 0 0 0
(下转第 7711页)
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2008 , 36(18):7663 ,7711　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　刘月娟　责任校对　卢瑶
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2008.18.119
蛋白质含量 、氨基酸总量 、必需氨基酸量与东北小鲵 、大鲵和
部分鱼类接近 ,而低于其他多数鱼类 ,但呈味氨基酸含量较
高。必需氨基酸占氨基酸总量的百分比和必需氨基酸与非
必需氨基酸的比值接近 WHO/FAO提出的 40%左右和 0.60
以上的要求[ 21] ,而且必需氨基酸含量稍高于WHO/FAO评分
模式 ,尤其是谷物食品中较为缺乏的赖氨酸含量较丰富 ,达
到鸡蛋蛋白质评分模式标准 ,较 WHO/FAO评分模式高出
30%以上。
表 6　商城肥鲵脂肪酸种类及含量 %
Table 6　Types and contents of fatty acid in Pachyhynobius shangchengensis
脂肪酸
Fatty acid
商城肥鲵
Pachyhynobius shangchengensis
大鲵[ 20]
Giant salamander
C14∶0 　　　　　1.56 　　微量
C16∶0 16.39 　　22.85
C16∶1 7.34 7.25
C18∶0 2.03 1.57
C18∶1 33.18 38.40
C18∶2 17.65 15.98
C18∶3 3.84 3.04
C20∶4 7.02 6.98
C20∶5(EPA) 3.68 　　　-
C22∶5 2.94 　　　-
C22∶6(DHA) 4.37 　　　-
饱和脂肪酸(SFA) 19.98 24.42
不饱和脂肪酸(UFA) 80.02 74.85
高度不饱和脂肪酸(HUFA) 39.50 28.71
　　商城肥鲵肌肉的营养价值还与总糖和脂肪含量有关。
从该次测得的结果看 ,商城肥鲵脂肪含量最低 ,糖类含量相
对适中。应当指出 ,商城肥鲵肌肉生化成分的含量 ,也与其
生活环境 、个体大小 、分析部位 、分析方法 ,特别是分析季节
有密切关系 ,该次取样时间恰逢商城肥鲵开始大量进食的季
节 ,属开始积累营养的时期 ,因此该研究所得各项数据较低 ,
其他季节取样 ,所得各项数据会有一定程度的上升 。
商城肥鲵肌肉脂肪酸的组成有 2个特点:①不饱和脂肪
酸含量很高 。占总脂肪酸的 80.02%,远高于饱和脂肪酸 ,为
饱和脂肪酸的 4倍以上;②不饱和脂肪酸中高度不饱和脂肪
酸的含量很高。平均含量高达 39.50%。这可能与其生活环
境有关 ,商城肥鲵生活在山涧溪水中 ,水体平均温度较低 ,高
度不饱和脂肪酸的存在有利于生理代谢的正常进行。另外 ,
商城肥鲵富含花生五烯酸即二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳
六烯酸(DHA),其含量分别达到 3.68%和 4.37%。EPA 和
DHA 具有极其重要的生理作用和药用价值 ,对商城肥鲵在低
温时保持膜的流动性和渗透性有重要意义。
4　结论
商城肥鲵属于低脂肪高蛋白的营养类型 ,是一种可贵的
野生自然资源[ 22] 。商城肥鲵肌肉能直接食用 ,也可将其蛋
白质分离出来作为食品添加剂 ,从而大大提高食品质量 ,这
对丰富人们的物质生活 、增强人们的体质 、促进人们身体健
康颇有益处。
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(上接第 7663页)
3　小结
赵坤等研究表明 ,中药注射液对猪源性 E .coli 的抑菌
效果优于多种抗生素 ,敏感率达 100%,比其他药物高出 10～
50百分点[ 4] 。对乌桕根皮醇提物萃取分离后发现 ,对猪源大
肠杆菌的 3种血清型具有抑制作用 ,表明乌桕根皮提取物可
以在一定程度上防治大肠杆菌引起的猪病;对K99没有抑制
作用 ,所以用中药材防治猪大肠杆菌疾病时 ,应该考虑血清
型差异。抗菌作用对血清型的选择性 、抗菌活性差异还有待
进一步的研究 ,以更好地利用中药材防治病原菌。
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