全 文 ：第 31 卷 第 10 期
2012 年 10 月
分析测试学报
FENXI CESHI XUEBAO(Journal of Instrumental Analysis)
Vol. 31 No. 10
1282 ～ 1287
收稿日期:2012 － 04 － 17;修回日期:2012 － 05 － 20
基金项目:国家自然科学基金资助(20675025，20975029)
* 通讯作者:魏永巨，博士，教授，研究方向:中药荧光分析，Tel:0311 － 87861162，E － mail:weiyju@ 126. com
薄层荧光扫描法测定喜树果中喜树
碱及 10-羟基喜树碱
王立屏1，2，魏永巨1*
(1． 河北师范大学 化学与材料科学学院，河北 石家庄 050024;2． 河北化工医药
职业技术学院，河北 石家庄 050026)
摘 要:建立了薄层荧光扫描法测定中药喜树果中喜树碱和 10-羟基喜树碱的方法。以无水甲醇为溶剂从喜
树果样品中提取喜树碱和 10-羟基喜树碱。在硅胶 H板上以氯仿 ∶ 丙酮(7 ∶ 3)为展开剂可使喜树碱与 10-羟
基喜树碱很好地分离。以荧光激发波长 350 nm线性扫描进行定量分析。在 0. 010 5 ～ 0. 063 0 μg范围内，喜
树碱的积分荧光强度 A与其质量 m呈线性，相关系数为 0. 998，加标回收率为 99%。在 0. 003 3 ～ 0. 033 0 μg
范围内，10-羟基喜树碱的积分荧光强度与质量呈线性，相关系数为 0. 999，加标回收率为 96%。该方法简
便，重复性好。以此方法测得喜树果样品中喜树碱和 10-羟基喜树碱的含量分别为 0. 122%和 0. 013%。
关键词:中药;喜树果;喜树碱;10-羟基喜树碱;薄层荧光扫描
中图分类号:O657. 7;TQ460. 72 文献标识码:A 文章编号:1004 － 4957(2012)10 － 1282 － 06
doi:10. 3969 / j. issn. 1004 － 4957. 2012. 10. 012
Determination of Camptothecine and 10-Hydroxycamptothecine in Common
Camptotheca Fruit by TLC － Fluorescence Scanning Method
WANG Li-ping1，2，WEI Yong-ju1*
(1． College of Chemistry and Material Science，Hebei Normal University，Shijiazhuang 050024，China;2． Hebei
Chemical ＆ Pharmaceutical College，Shijiazhuang 050026，China)
Abstract:A thin layer chromatography(TLC)－ fluorescence scanning method was established for the
determination of camptothecine(CPT)and 10-hydroxycamptothecine(10-HCPT)in Chinese herbal
medicine Xishuguo(Common camptotheca fruit，CCF)． Methanol was used as solvent to extract CPT
and 10-HCPT in CCF sample． The separation was carried out on silica gel H plate using chloroform －
acetone(7 ∶ 3)as developing agent． The determination was accomplished by fluorescence linear
scanning with excitation wavelength of 350 nm． In the quality range of 0. 010 5 － 0. 063 0 μg，there
is a linear relationship between integral fluorescence intensity and quality of CPT． The regression e-
quation was A = 474. 0 + 159 881. 2 m(μg)with a correlation coefficient of 0. 998． The spiked re-
covery of CPT was 99% ． In the quality range of 0. 003 3 － 0. 033 0 μg，a linear relationship be-
tween integral fluorescence intensity and quality of 10-HCPT was observed，and the regression equa-
tion was A = 51. 3 + 59 486. 2 m(μg)with a correlation coefficient 0. 999． The spiked recovery of
10-HCPT was 96% ． This method was simple and repeatable． Using this method，the contents of
CPT and 10-HCPT in a CCF sample were determined to be 0. 122% and 0. 013%，respectively．
Key words:traditional Chinese medicine;common camptotheca fruit;camptothecine;10-hydroxy-
camptothecine;TLC － fluorescence scanning
喜树果(Common camptotheca fruit，CCF)是我国特有的珙桐科植物喜树的干燥果实，别名千丈树、
水栗子，性寒、味苦涩、有毒，归肺、脾、肝三经，具有抗癌、散结、破血化瘀等功效。喜树果含生
物碱类化合物［1 － 2］，其中喜树碱(Camptothecine，CPT)和 10-羟基喜树碱(10-Hydroxycamptothecine，10-
HCPT)是主要活性成分，其分子结构如图 1 所示。研究表明，喜树碱及其衍生物可选择性作用于 DNA
第 10 期 王立屏等:薄层荧光扫描法测定喜树果中喜树碱及 10-羟基喜树碱
拓扑异构酶 I，抑制 DNA 转录、复制、分裂从而抑制肿瘤的生长［3］，对肺癌［4］、肝癌［5］、乳腺癌［6］、
膀胱癌［7］、直肠癌［8］和白血病［9］等有一定疗效。喜树果水提液具有较强的抗Ⅱ型单纯疱疹病毒(HSV-
2)作用［10］。喜树果浸膏的二甲亚砜溶液可促进色素细胞增殖、色素生成，治疗白癜风［11］，10-羟基喜
树碱在临床上还用于治疗银屑病［12］。
图 1 喜树碱(A)和 10-羟基喜树碱(B)的分子结构
Fig. 1 Molecular structures of camptothecin(A)and 10-hydroxycamptothecine(B)
喜树碱和 10-羟基喜树碱的含量测定多采用高效液相色谱法［13 － 14］、薄层扫描法［15］、毛细管电泳安
培法［16 － 17］和紫外分光光度法［18］等。周芳礼等［15］用薄层吸光扫描法测定了喜树果中喜树碱的含量，但
尚未见薄层荧光扫描法测定喜树碱和 10-羟基喜树碱的报道。本文建立了薄层荧光扫描法测定喜树果中
喜树碱和 10-羟基喜树碱含量的方法，喜树碱的测定灵敏度优于薄层吸光扫描法［15］，且本法能够测定
喜树果中含量较低的 10-羟基喜树碱。
1 实验部分
1. 1 仪器与试剂
CS-9301PC薄层扫描仪(Shimadzu);硅胶 H板(10 cm × 20 cm，青岛海洋化工厂);ZF-2 型三用紫
外灯。
喜树碱对照品(中国药品生物制品检定所，批号:100532 － 200401);10-羟基喜树碱对照品(中国
药品生物制品检定所，批号:100526 － 200301);喜树果药材(安国冷背医药药材公司);氯仿(分析
纯);丙酮(分析纯)。
1. 2 实验方法
对照品溶液的制备:精密称取喜树碱对照品 0. 001 05 g 于 50 mL 棕色容量瓶中，以甲醇溶解，定
容，配成 21. 0 mg·L －1的溶液;精密称取 10-羟基喜树碱对照品 0. 000 33 g于 50 mL棕色容量瓶中，以
甲醇溶解，定容，配成 6. 6 mg·L －1的溶液。
喜树果供试品溶液Ⅰ的制备:精密称取喜树果药材(过 60 目筛)0. 450 9 g，准确加入 25 mL无水甲
醇，称重，于 60 ℃恒温水浴中恒温 1 h，取出冷却，补足重量，取上清液作为供试品溶液。
喜树果供试品溶液Ⅱ的制备:精密称取喜树果药材(过 60 目筛)1. 993 6 g，准确加入 50 mL无水甲
醇，室温放置隔夜(冷浸提取 24 h)，取上清液作为供试品溶液。
薄层色谱分离:用定量毛细管将喜树碱、10-羟基喜树碱对照品溶液和喜树果供试品溶液分别点样
于硅胶 H板上，以氯仿 ∶ 丙酮(7 ∶ 3)为展开剂，上行展开。
薄层荧光扫描:用 CS-9301PC薄层扫描仪进行荧光线性扫描，激发波长 λex = 350 nm，光斑:0. 4
mm ×10. 0 mm，2#滤光片(截止波长 400 nm)。
2 结果与讨论
2. 1 色谱展开剂的确定
通过实验比较了氯仿 ∶ 丙酮(7 ∶ 3)及氯仿 ∶ 丙酮 ∶ 甲醇(8 ∶ 2 ∶ 1)2 种展开剂的效果。实验结
果表明，当采用氯仿 ∶ 丙酮 ∶ 甲醇(8 ∶ 2 ∶ 1)作为展开剂时，由于喜树碱在甲醇中的溶解性较好，其
斑点随溶剂走到前沿;而采用氯仿 ∶ 丙酮(7 ∶ 3)时，喜树碱和 10-羟基喜树碱的 R f 值均适中，故确定
其为展开剂。
由于喜树碱和 10-羟基喜树碱在喜树果药材中的含量相差很大，若要同时提取同时展开，则喜树碱
的浓度会过高，因此，选择分别提取二者后，分别进行薄层荧光扫描测定。
3821
分析测试学报 第 31 卷
图 2 不同含量喜树碱的薄层荧光色谱图
Fig. 2 Thin layer fluorescence chromatograms of CPT
with different contents
λex = 350 nm，beam size:0. 4 mm ×10. 0 mm
2. 2 喜树果中喜树碱含量的测定
2. 2. 1 喜树碱浓度与积分荧光强度的关系 精
密吸取喜树碱对照品溶液 0. 5、1. 0、1. 5、2. 0、
2. 5、3. 0 μL 点于同一硅胶 H 簿层板上，展开，
扫描斑点荧光强度，如图 2 所示。在 0. 010 5 ～
0. 063 0 μg范围内，斑点积分荧光强度(A)与点样
量(m)呈良好的线性关系，回归方程为:A =
474. 0 + 159 881. 2 m(μg)，相关系数 r = 0. 998。
2. 2. 2 稳定性试验 准确吸取喜树碱对照品溶
液(21. 0 mg·L －1)1. 0 μL，喜树果供试品溶液Ⅰ
2. 0 μL，点于同一硅胶 H板上，展开，于 120 min
内每间隔 10 min 扫描斑点荧光强度，结果表明:
喜树碱对照品及喜树果供试品溶液在 2 h 内荧光
强度稳定，荧光强度的相对标准偏差(RSD)分别
为 0. 52%和 0. 69%。
2. 2. 3 精密度试验 分别准确吸取喜树碱对照品溶液 1. 0 μL，重复点样于同一硅胶 H 板上，展开，
扫描斑点荧光强度，8 次积分荧光强度的 RSD为 0. 88%。
2. 2. 4 重复性试验 准确吸取喜树碱对照品溶液 1. 0、2. 0、3. 0 μL，5 种不同浓度供试品溶液Ⅰ2. 0
μL点于同一硅胶 H 板上，考察方法的重复性。对照品系列回归方程为:A = 592. 8 + 153 735. 2 m
(μg)，r = 0. 999。供试品积分荧光强度的 RSD(n = 5 )为 1. 5 %，实验结果见表 1。
表 1 喜树碱测定的重复性实验结果
Table 1 Test results for reproducibility of CPT
Weight m / g Area(积分荧光强度) Measured value m /μg Content /% Average content /% RSD sr /%
0. 447 9 7 274. 7 0. 043 46 0. 121 3 0. 122 1. 5
0. 453 0 7 252. 2 0. 043 32 0. 119 5
0. 449 6 7 256. 4 0. 043 34 0. 120 5
0. 447 3 7 330. 3 0. 043 83 0. 122 5
0. 445 5 7 399. 6 0. 044 28 0. 124 2
2. 2. 5 回收率试验 准确称取喜树果药材(过 60 目筛)0. 400 1 g于 25 mL容量瓶中，按 “1. 2”供试
品溶液Ⅰ同法制备供试品溶液。
精密吸取喜树果供试品溶液 1. 0 μL，重复点样于硅胶 H 板上，准确吸取喜树碱对照品溶液 0. 5、
1. 0、1. 5、2. 0 μL分别点于样品点上，展开，扫描斑点荧光强度，测定其含量。回归方程:A =
3 294. 2 + 154 749. 0 m(μg)，相关系数 r = 0. 999。加标回收率结果见表 2。由表 2 可见，喜树碱的平均
加标回收率为 99%，RSD为 2. 2%。
表 2 喜树碱测定的回收率实验结果
Table 2 Test results for recovery of CPT
Content of
CPT m /μg
Added
m /μg
Area
Measured
value m /μg
Recovery
R /%
Average recovery
珔R /%
RSD
sr /%
0. 017 66 0. 010 5 5 006. 93 0. 028 35 102 99 2. 2
0. 017 66 0. 021 0 6 570. 61 0. 038 13 97
0. 017 66 0. 031 5 8 238. 73 0. 048 57 98
0. 017 66 0. 042 0 9 805. 97 0. 058 37 97
2. 2. 6 样品测定 分别精密吸取不同浓度的喜树果供试品溶液Ⅰ 2. 0 μL，点于同一硅胶 H板上，展
开，扫描斑点荧光强度，测定喜树果中喜树碱的含量。薄层扫描图见图 3，测定结果见表 3。喜树果样
品中喜树碱的含量为 0. 122%，该结果与文献［15］报道的不同产地喜树果药材中喜树碱含量的测定结
果相比较合理。
4821
第 10 期 王立屏等:薄层荧光扫描法测定喜树果中喜树碱及 10-羟基喜树碱
表 3 喜树果中喜树碱含量的测定结果
Table 3 Determination results of CPT in CCF
No. Area Measured m /μg Weight m / g Content /% Average content /% RSD sr /%
1 7 645. 998 0. 044 86 0. 460 7 0. 121 7 0. 122 1. 6
2 7 139. 242 0. 041 69 0. 433 3 0. 120 3
3 6 858. 745 0. 039 93 0. 402 2 0. 124 1
图 3 喜树果中喜树碱的薄层荧光色谱图
Fig. 3 Thin layer fluorescence chromatogram
of CPT in CCF sample
λex = 350 nm，beam size:0. 4 mm ×10. 0 mm
2. 3 喜树果中 10-羟基喜树碱含量的测定
2. 3. 1 10-羟基喜树碱浓度与积分荧光强度的关
系 精密吸取 10-羟基喜树碱标准溶液 0. 5、
1. 0、2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 μL 点于同一硅胶 H
簿层板上，展开，扫描斑点荧光强度，如图 4 所
示。在 0. 003 3 ～ 0. 033 0 μg 范围内，积分荧光
强度与点样量之间线性关系良好，回归方程为:
A = 51. 3 + 59 486. 2 m(μg)，相关系数 r = 0. 999。
2. 3. 2 稳定性试验 准确吸取 10-羟基喜树碱
对照品溶液(6. 6 mg·L －1)2. 0 μL，喜树果供试
品溶液Ⅱ 2. 0 μL，点于同一硅胶 H板上，展开，
每隔 10 min 分别扫描斑点荧光强度。10-羟基喜
树碱对照品及喜树果供试品在 1. 5 h 内荧光强度
图 4 不同含量 10-羟基喜树碱的薄层荧光色谱图
Fig. 4 Thin layer fluorescence chromatograms of 10-
HCPT with different contents
λex = 350 nm，beam size:0. 4 mm ×10. 0 mm
稳定，积分荧光强度的 RSD 分别为 1. 6% 和
2. 8%，可用于薄层定量。
2. 3. 3 精密度试验 分别准确吸取 10-羟基喜
树碱标准溶液 2. 0 μL，重复点样于同一硅胶 H
板上，展开，扫描斑点荧光强度，8 次积分荧光
强度的 RSD为 0. 51%。
2. 3. 4 重复性实验 准确吸取 10-羟基喜树碱
对照品溶液 1. 0、2. 0、3. 0 μL，5 种不同浓度喜
树果供试品溶液Ⅱ 2. 0 μL 点于同一硅胶 H 板
上，考察方法的重复性。对照品系列的回归方程
为:A = 104. 9 + 55 062. 7 m(μg )，r = 0. 999。
供试品的 RSD(n = 5)为 2. 0 %，实验结果见
表 4。
表 4 10-羟基喜树碱测定的重复性实验结果
Table 4 Test results for reproducibility of 10-HCPT
Weight m / g Area Measured value m /μg Content /% Average content /% RSD sr /%
1. 995 6 667. 8 0. 010 22 0. 012 8 0. 013 2. 0
1. 988 9 685. 9 0. 010 55 0. 013 3
2. 004 4 701. 3 0. 010 83 0. 013 5
2. 002 5 694. 7 0. 010 71 0. 013 4
1. 992 3 679. 6 0. 010 44 0. 013 1
2. 3. 5 回收率实验 准确称取喜树果药材(过 60 目筛)1. 508 9 g于 25 mL容量瓶中，按喜树果供试品
溶液Ⅱ同法制备喜树果供试品溶液。
精密吸取供试品溶液 2. 0 μL，重复点样于硅胶 H板上，准确吸取 10-羟基喜树碱对照品溶液 0. 5、
1. 0、1. 5、2. 0、2. 5 μL分别点于样品点上，展开，扫描斑点荧光强度，测定含量。得到回归方程:
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分析测试学报 第 31 卷
A = 1 023. 2 + 59 812. 2 m(μg)，r = 0. 999。加标回收率结果见表 5，10-羟基喜树碱的平均加标回收率为
96%，RSD为 4. 2%。
表 5 10-羟基喜树碱的回收率实验结果
Table 5 Test results for recovery of 10-HCPT
Content of 10-HCPT
m /μg
Added
m /μg
Area
Measured
m /μg
Recovery
R /%
Average
recovery 珔R /%
RSD
sr /%
0. 016 69 0. 003 3 1 204. 79 0. 019 39 92 96 4. 2
0. 016 69 0. 006 6 1 407. 86 0. 022 80 93
0. 016 69 0. 009 9 1 596. 14 0. 025 97 94
0. 016 69 0. 013 2 1 839. 75 0. 030 06 101
0. 016 69 0. 016 5 2 007. 11 0. 032 88 98
图 5 喜树果中 10-羟基喜树碱的薄层荧光色谱图
Fig. 5 Thin layer fluorescence chromatogram of
10-HCPT in CCF sample
λex = 350 nm，beam size:0. 4 mm ×10. 0 mm
2. 3. 6 样品测定 分别精密吸取不同浓度的
喜树果供试品溶液Ⅱ 2. 0 μL，点于同一硅胶 H
板上，展开，扫描斑点荧光强度，测定喜树果
中 10-羟基喜树碱的含量。薄层扫描图见图 5，
测定结果见表 6。结果显示，喜树果中 10-羟基
喜树碱的含量为 0. 013%。
3 结 论
喜树果中喜树碱和 10-羟基喜树碱的含量
可用薄层荧光扫描法进行测定。以氯仿 －丙酮
(7 ∶ 3)为展开剂，在硅胶 H 板上展开，能够
使喜树碱与 10-羟基喜树碱很好地分离，以线
性荧光扫描法测量斑点的荧光强度，可以测定
喜树果药材中两者的含量。以此方法测得喜树果样品中喜树碱的含量为 0. 122%，10-羟基喜树碱的含
量为 0. 013%。
表 6 喜树果中 10-羟基喜树碱含量测定结果
Table 6 Determination results of 10-HCPT in CCF sample
No． Area Measured m /μg Weight m / g Content /% Average content /% RSD sr /%
1 744. 687 0. 011 66 2. 254 4 0. 012 9 0. 013 2. 3
2 661. 448 0. 010 26 1. 993 6 0. 012 9
3 640. 231 0. 009 90 1. 993 1 0. 012 4
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《中国无机分析化学》征稿征订启事
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《中国无机分析化学》是由北京矿冶研究总院主办的无机分析化学专业性学术期刊。本刊包括岩
矿分析、冶金分析、材料分析、环境分析、化工分析、生物医药分析、食品分析、仪器研制、综述评
论、技术交流、信息之窗等栏目。读者对象为从事无机分析化学及相关技术的广大科研人员、工程技
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《中国无机分析化学》一直秉承 “读者第一，作者至上，以人为本，以质为根”的办刊理念，全
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