全 文 ：用数量将这些关系精确地表示出来。该方法具有快速 、简便等特
点 , 有望成为中药快速鉴别的新方法。
参考文献:
[ 1] 　徐永群 ,孙素琴 ,许锦文.红外指纹图谱库与阵列相关系数法快速
鉴别中药材 [ J].光谱学实验室 , 2002, 19(5):606.
[ 2] 　徐永群 ,邓三尧 ,李兴旺 , 等.阵列相关系数比对法在中药鉴别中
的应用研究 [ J].光谱学与光谱分析 , 2007, 27(11):2239.
[ 3] 　董　彬 ,孙素琴 ,周红涛 , 等.红外光谱和聚类分析法无损快速鉴
别赤芍 [ J] .光谱学与光谱分析 , 2002, 22(2):232.
[ 4 ] 　孙素琴 ,张　宣 ,秦　竹 ,等.FTIR直接鉴别植物生药材 [ J] .光谱
学与光谱分析 , 1999, 19(4):542.
[ 5 ] 　周　欣 ,孙素琴 ,黄庆华.FTIR对不同产地陈皮的鉴别研究 [ J] .
光谱学与光谱分析 , 2007, 27(12):2453.
[ 6 ] 　邹华彬 ,袁久荣 ,杜爱琴 ,等.甘草水提取物红外指纹图谱共有峰率
和变异峰率双指标序列分析法 [ J].中成药 , 2004, 26(10):779.
[ 7 ] 　邹华彬 ,袁久荣 ,袁　浩.秘鲁产人参保健品 HPLC和四维 UV指纹
图谱研究 [ J] .中成药 , 2003, 25(4):261.
收稿日期:2010-03-21;　修订日期:2010-09-18
基金项目:教育部 “春晖计划 ”科研合作立项项目(No.Z2006-1-83015)
作者简介:薛　梅(1964-),女(汉族),江苏扬州人 ,现为石河子大学化学
化工学院教授 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学和有机合成等方面的研
究工作.
＊通讯作者简介:李炳奇(1951-), 男(汉族),山东宁津人 , 现任石河子大
学化学化工学院教授 ,学士学位 ,主要从事天然产物化学的研究工作.
天山堇菜鞣质的提取及抗氧化活性研究
薛　梅 1 ,王立梅 2 ,吴建芳3 ,李炳奇 1＊
(1.石河子大学化学化工学院 ,新疆 石河子　832003;2.大连水产学院 ,辽宁大连　116023;
3.石河子大学生命科学学院 ,新疆 石河子　832003)
摘要:目的 探讨天山堇菜鞣质的体外抗氧化作用。方法 采用超声波法提取天山堇菜中的鞣质 , 选用邻二氮菲-Fe2+氧
化法 、二苯代苦味肼基自由基法 ,测定其对羟自由基(· OH)、二苯代苦味肼基自由基(DPPH· )的清除能力 , 并与抗氧化
剂 VC、茶多酚进行比较 。结果与结论 天山堇菜鞣质对羟自由基 、二苯代苦味肼基自由基均有清除作用 , 在一定范围内 ,
清除效果随质量浓度的增大而加强。其抗氧化能力与浓度呈依赖关系。
关键词:鞣质;　抗氧化;　DPPH· ;　· OH
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.02.048
中图分类号:R284.2　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)02-0371-02
　　天山堇菜 ViolatianshanicaMaxim为堇菜科堇菜属植物 ,以全
草入药。全草主要用于各种发热 、受寒 、感冒 、胸膜炎 、肺炎 、咽炎 、
疔疮肿痈等 [ 1] 。天山堇菜全草经预实验检出含有挥发油 、黄酮类 、
生物碱 、氨基酸 、粘液质皂苷 、鞣质等物质 [ 2, 3] 。国内外学者对其化
学成分做了一些研究 ,但对其鞣质的相关研究还未见报道。
在现有的自由基及抗氧化分析中 ,一般的做法是人工建立活
性氧或自由基的发生体系 ,然后检测其中产生的自由基及抗氧剂
或自由基清除剂对所产生自由基的抑制清除行为。通过 Fenton
反应产生的 · OH,可使邻二氮菲-Fe2+水溶液氧化为邻二氮菲-
Fe3+, 从而使邻二氮菲-Fe2+在 536 nm处的最大吸收峰消失 , 从
而可知体系中· OH的变化。 DPPH· (二苯代苦味肼基自由基)
是一种大分子的稳定自由基抗氧化剂 ,通过紫外可见光全波长扫
描 , 确定 DPPH自由基在 517 nm处有一强吸收(深紫色),当自由
基清除剂与其单电子配对使其吸收逐渐消失 ,其褪色程度与其所
接受的电子数量成定量关系 ,因而可用分光光度计法进行定量分
析。本实验利用 Fenton反应法和 DPPH分析法测定天山堇菜鞣
质清除羟自由基和二苯代苦味肼基自由基的能力 ,以评价样品的
抗氧化能力。
1　材料与仪器
1.1　试剂与仪器 天山堇菜(购自新疆喀什市);没食子酸对照
品(中国药品生物制品检定所);干酪素(北京奥博星生物技术责
任有限公司);DPPH(美国 Sigma公司);碳酸钠 、丙酮 、邻二氮菲 、
硫酸亚铁 、无水乙醇 、双氧水等均为分析纯。
1.2　仪器 KQ-250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司);R-205型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司);SHB-
B95型循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);S54紫
外分光光度计(上海棱光技术有限公司)。
2　方法
2.1　天山堇菜鞣质溶液的提取及含量测定
2.1.1　标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液 1.0, 2.0, 3.0,
4.0, 5.0 ml, 分别置 25 ml棕色量瓶中 , 各加入磷钼钨酸试液 1
ml, 再分别加水 11, 10, 9, 8, 7ml,用 29%碳酸钠溶液稀释至刻度 ,
摇匀 , 放置 30 min以相应的试剂为空白 , 在 760 nm的波长处测
定吸光度 ,以吸光度为纵坐标 , 浓度为横坐标 , 绘制标准曲线 , 其
回归方程为 Y=0.167 0X+0.035 6, R=0.999 5, 在 1.08 ～ 5.40
μg/ml范围内 , 浓度与吸光度有良好的线性关系。
2.1.2　鞣质样品溶液的提取与含量测定 准确称取天山堇菜粉
末 6 g, 按 1∶30的料液比加入 40%丙酮 , 浸泡 30 min, 超声提取
30 min, 提取液冷却后抽滤。所得滤渣再按上述方法提取两次 ,
合并滤液。旋转蒸发浓缩后离心 , 取上清液定容至 50 ml容量
瓶 , 作为鞣质样液。按照 《中国药典》 2005年版方法 [ 4]测定鞣质
含量。
2.2　天山堇菜鞣质清除羟自由基能力的测定 [ 5]
2.2.1　不同浓度的天山堇菜鞣质对羟自由基清除能力的测定
精密量取 2.0 ml磷酸盐缓冲液(PBS, pH=7.4), 蒸馏水 4.0 ml
于试管中 ,作为空白参比管;精密量取 2.0 mlPBS1.0 ml、邻二氮
菲(1.5 mmol/L)、1.0 mlFeSO4(1.5mmol/L)和 2 ml蒸馏水 , 作
为未损伤管;精密量取 2.0 mlPBS、 1.0ml邻二氮菲(1.5 mmol/
L)、1.0 mlFeSO4 (1.5 mmol/L)、 1.0 ml水和 1.0 mlH2O2
(0.02%),作为损伤管;精密量取 2.0 mlPBS、 1.0 ml待测样和
3.0 ml蒸馏水作为样品参比管;精密量取 2.0 mlPBS、1.0 ml邻
二氮菲(1.5 mmol/L)、1.0 mlFeSO
4
(1.5mmol/L)、 1.0ml待测
样和 1.0 mlH
2
O
2
作为样品管。
将上述管置恒温水浴锅中 , 37℃保温 60 min, 在 536 nm处测
·371·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.2 时珍国医国药 2011年第 22卷第 2期
定吸光值。以茶多酚 、VC作对照。按下式计算清除率:
羟自由基清除 率 (%)=[ (A样品 -A样参 )-(A损伤 -A空参 )/(A未损 -
A损伤)] ×100%
2.2.2　不同抗氧化剂协同抗氧化能力研究 按照 7∶3的比例加
入不同浓度的鞣质样品液和作为对照的维生素 C、茶多酚溶液 ,
按 “ 2.2.1”项方法测定。
2.3　天山堇菜鞣质清除 DPPH自由基能力的测定 [ 6]
2.3.1　不同浓度的天山堇菜鞣质对 DPPH自由基清除能力的测
定 往具塞试管中加入不同浓度的鞣质提取液 2 ml, 然后加入
0.2 mmol/L的 DPPH溶液 2.0 ml。 30 min后以样品提取溶剂为
空白测定其在 517 nm处的吸光值 Ai;测定 2 ml不同浓度的鞣质
提取液与 2 ml无水乙醇的吸光值 Aj;测定 2 ml2 mmol/L的 DP-PH溶液与 2ml无水乙醇的吸光值 Ac。DPPH自由基清除率(%)=[ 1-(Ai-Aj)] / Ac×100%
式中:
Ai=加待测液时 DPPH液的吸光值;
Aj=不加 DPPH, 不加试样液的吸光值;Ac=不加待测液 ,只加 DPPH的吸光值;
2.3.2　不同抗氧化剂协同抗氧化能力研究 按照 7∶3的比例加
入不同浓度的鞣质样品液和作为对照的 VC、茶多酚 ,按 “ 2.3.1”
项方法测定。
3　结果
3.1　天山堇菜鞣质对羟自由基的清除作用
3.1.1　不同浓度天山堇菜鞣质对羟自由基的清除作用 见图 1。
由图 1可知 , 不同浓度的天山堇菜鞣质对体系中产生的羟自由基
均有一定的清除作用 , 随着浓度的增加其清除效果逐渐增强。当
鞣质浓度为 0.14mg/ml时 , 清除率为 77.3%。 其清除羟自由基
的能力优于 VC,略低于茶多酚。
3.1.2　天山堇菜鞣质与其他抗氧化剂的协同抗氧化效果 见
图 2。
图 1　天山堇菜鞣质对羟自由基的清除作用
图 2　天山堇菜鞣质与其他抗氧化剂的协同抗氧化效果
由图 2可以看出 , VC和茶多酚对鞣质的抗氧化作用均有协
同增效作用 , 且茶多酚 >VC。这说明鞣质与其他抗氧化剂混合
使用时具有更好的抗氧化作用。
3.2　天山堇菜鞣质对 DPPH自由基的清除作用
3.2.1　不同浓度天山堇菜鞣质对 DPPH自由基的清除作用
DPPH·是一种稳定的自由基 , 通过检测生物试剂对其的清
除作用可以得出其抗氧化能力的强弱。由图 3可以看出 , 随着浓
度的增大 , 鞣质 、茶多酚和 VC对 DPPH自由基的清除能力逐渐
增强。天山堇菜鞣质对 DPPH自由基的清除能力优于茶多酚 ,在
低浓度时优于 VC。
图 3　天山堇菜鞣质对 DPPH自由基的清除作用
3.2.2　天山堇菜鞣质与其他抗氧化剂的协同抗氧化效果 见
图 4。
图 4　天山堇菜鞣质与其他抗氧化剂的协同抗氧化效果
由图 4可知 , 当天山堇菜鞣质与茶多酚和 VC混合使用时 ,
其对 DPPH自由基的清除能力与单独使用相比抗氧化能力增强。
鞣质和茶多酚混合使用与鞣质和 VC混合使用时抗氧化能力相
当。
4　讨论
人体在利用氧的过程中 ,会产生活性氧及各种自由基。自由
基是人体进行生命活动时所产生的一种活性分子 ,与人体关系密
切的有超氧自由基 、羟基自由基 、脂质过氧化自由基等。人体内
的自由基过多就会攻击生物大分子 , 破坏细胞的结构和功能 , 因
而自由基是人衰老和产生许多疾病的重要因素。羟自由基是生
物活体中最活泼也是最具进攻性的活性氧 ,它可以通过多种方式
与生物体内的多种分子作用 ,造成糖类 、氨基酸 、核酸和脂类等物
质的氧化性损伤 , 是细胞坏死或突变的诱因之一 [ 7] 。由于一些
合成抗氧化剂存在一定的毒性 ,因此寻找高效低毒的抗氧化药物
已成为当前重要的研究课题之一。
实验结果表明 ,天山堇菜中的鞣质对羟自由基和 DPPH自由
基均有清除作用 ,且随着浓度的增加其清除率也相应增加。通过
对照实验可以看出 , 鞣质对 DPPH自由基的清除作用强于茶多
酚 , 在低浓度时优于 VC。鞣质与其他抗氧化剂茶多酚 、VC配合
使用时具有较强的抗氧化能力。天山堇菜作为一种维吾尔族民
间用药其药理作用机制还有待进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　刘勇民.维吾尔药志(上册)[ M] .乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社 ,
1993:35.
[ 2 ] 　田树革 ,丁剑冰 ,周晓英.维药天山堇菜中化学成分分析及抑菌实
验研究 [ J] .中国民族医药杂志 , 2000, 6(3):36.
[ 3 ] 　盛　平 ,堵年生 ,古丽斯坦·哈斯木,等.维吾尔药材天山堇菜的生
药学研究 [ J] .中国中药杂志 , 2008, 30(6):924.
[ 4 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:附录 57.
[ 5 ] 　蔡仲军 ,陈仕江 ,伊定华 ,等.不同产地冬虫夏草清除羟自由基作用
的研究 [ J] .中草药 , 2004, 35(1):35.
[ 6 ] 　胡喜兰 ,韩照祥 , 陶　莹 ,等.DPPH·法测定 17种植物的抗氧化活
性 [ J] .食品科技, 2006, 10:264.
[ 7 ] 　方光荣 ,刘立明 ,李　玲 ,等.羟自由基的流动注射荧光法测定 [ J] .
分析化学学报 , 2004, 20(1):63.
·372·
时珍国医国药 2011年第 22卷第 2期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.2