全 文 ：湖 北 农 业 科 学 2013 年
第 52卷第 24 期
2013年 12月
湖北农业科学
Hubei Agricultural Sciences
Vol． 52 No.24
Dec．，2013
收稿日期：2013－03－08
基金项目：广东省佛山市产学研专项资金资助项目（2011B1025）
作者简介：卢卫红（1970－），女，广东开平人，副教授，硕士，主要从事微生物生理生化研究，（电话）13690435977（电子信箱）weihlu＠sohu．com；
通讯作者，朱 峰，教授，博士，主要从事植物内生菌代谢产物研究，（电子信箱）drzhu．feng＠163．com。
自从 1929 年弗莱明发现青霉素以来， 微生物
活性代谢产物成为药物的丰富源泉，现代几乎所有
临床应用的抗生素都来源于微生物。 近年随着新病
原菌和新病毒的不断出现，癌症和心血管病的不断
增加，特别是随着药物的滥用，导致病原微生物产
生了抗药性，人们迫切需要寻找到新的疗效显著而
毒副作用小的天然药物。 植物内生菌 ［1］生活在植物
组织内部，与宿主协同进化，二者形成了互惠关系，
一方面植物为内生菌提供光合作用产物和矿物质，
另一方面内生菌的代谢物能刺激宿主植物的生长
发育，增强宿主植物对生物胁迫和非生物胁迫的抵
抗能力。 内生菌不仅能够参与植物次生代谢物的合
成或对植物次生代谢物进行转化，而且还能够独立
产生丰富的次生代谢产物。 Stierle 等 ［2］报道从太平
洋短叶红豆杉（Taxus brevifolia）树皮中分离到的内
生真菌 Taxomyces andreanae 能产生抗癌活性物质
紫杉醇。Strobel等［3］发现植物内生真菌 Gliocladium
roseum（NRRL 50072）可以产生生物柴油。植物内生
菌已引起研究者们的极大兴趣［4－7］，并寄希望于从中
发现具有特殊功能、疗效显著、毒副作用小的新颖
药物先导物。
五色梅（Lantana camara L．）［8］又名马缨丹，为
马鞭草科（Verbenaceae）马缨丹属（Lantana）植物，原
产美洲热带， 中国南北都有引种栽培， 以广东、福
建、台湾、浙江、云南、四川等地为多，华南地区的荒
郊野外多有大量分布。 其根、茎、叶、花可作中药用，
具有清热解毒、散结止痛、祛风止痒之功效；叶煎汤
洗治湿疹、疥癞毒疮、皮炎、皮肤瘙痒、臃肿，捣烂敷
患处能治跌打筋伤。 研究表明，五色梅提取物具有
抗菌、抗病毒、消炎、抗肿瘤等生物活性，其主要有
五色梅叶内生真菌 YJ－11的分离鉴定及其抑菌活性
卢卫红 a，冼琼珍a，朱 峰 b
（佛山科学技术学院，a 生命科学学院；b 化学与化工系，广东 佛山 528000）
摘要：从广东药用植物五色梅（Lantana camara L．）叶片中分离到一株内生真菌 YJ－11，通过显微形态特
征观察鉴定属于青霉属（Penicillium sp．）。 液态静置培养后，进行有效成分提取，获得其菌丝体甲醇提取
物和发酵培养液乙酸乙酯提取物。 体外抑菌试验结果表明， 两种提取物对供试细菌金黄色葡萄球菌
（Staphylococcus aureu）均具显著抑菌活性。
关键词：五色梅（Lantana camara L．）叶片；内生真菌；青霉属（Penicillium sp．）；抑菌活性
中图分类号：Q939．96；R93 文献标识码：A 文章编号：0439－8114（2013）24－6048-03
Identification and Antibacterial Activity of Endophytic Fungus YJ-11 Isolated from
the Leaf of Lantana camara L.
LU Wei－honga，XIAN Qiong－zhena，ZHU Fengb
（Foshan University of Science and Technology，a． College of Life Science； b． Department of Chemistry and Chemical Engineering，
Foshan 528000， Guangdong， China）
Abstract： Endophytic fungus YJ－11 was isolated from the leaf of Lantana camara L．， and morphologically identified as Peni-
cillium sp． The strain in GYP liquid media was cultured to obtain the mycelia and the fermentation liquid． The mycelia was
extracted with methanol to get crude extract （A）， and the fermentation liquid was extracted with ethyl acetate to obtain crude
extract （B）． The results showed that both extracts exhibited significant antibacterial activity against Staphylococcus aureu．
Key words： Lantana camara L． leaf； endophytic fungus； Penicillium sp．； antibacterial activity
DOI:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2013.24.048
第 24 期
效化学成分为三萜类和黄酮类化合物 ［9－11］，但鲜有
关于五色梅内生菌研究的报道。 本研究在对五色梅
植物化学成分研究的基础上 ［12－14］，对五色梅内生真
菌进行了分离，通过显微镜形态特征观察鉴定并筛
选到一株内生真菌 YJ－11， 研究了其粗提物的抑菌
活性，为进一步研究开发该菌奠定了基础。
1 材料与方法
1．1 材料
1．1．1 植物材料 五色梅枝条，2011 年 10 月采自
佛山科学技术学院北院校区，采后 10 min 内带回实
验室进行内生真菌的分离。
1．1．2 供试病原菌 金黄色葡萄球菌（Staphylococ-
cus aureu）， 由佛山科学技术学院微生物学教研室
提供。
1．1．3 培养基 抗生素 PDA 培养基用于内生真菌
的分离纯化，其组成为 PDA培养基（国产 BR级）40 g、
链霉素 200 mg 和水 1 000 mL，用 NaOH 调 pH 至 7。
GYP 培养基用于内生真菌的液体培养，其组成为葡
萄糖 10 g， 蛋白胨 2 g，酵母浸膏 1 g，水 1 000 mL，
用 NaOH调 pH至 7。LB培养基用于细菌液体培养，
其组成为胰蛋白胨 10 g 、酵母提取物 5 g、氯化钠 10
g，水 1 000 mL，调节 pH 至 7．4。 肉汤琼脂培养基用
于细菌固体培养，其组成为营养琼脂（普通肉汤琼
脂培养基）4 g，水 100 mL。
1．2 方法
1．2．1 内生真菌的分离纯化 取五色梅叶用清水
洗净， 70％乙醇溶液冲洗 30 s，无菌水冲洗 2 次，置
于 0．2％氯化汞溶液中浸泡 30 min， 无菌水冲洗 6
次，无菌滤纸吸干水。 在无菌条件下将五色梅叶剪
成小片，置于抗生素 PDA 培养基上，28 ℃培养箱中
倒置培养 3～7 d，待真菌从组织块边缘长出后，挑取
菌丝转接到 PDA培养基进行纯化培养。反复转接纯
化直到菌落形态一致，得到纯培养菌株 YJ－11。 PDA
试管斜面接种、液体石蜡封存、 4 ℃冰箱保存。
1．2．2 内生真菌的形态观察与鉴定 从纯化培养数
日的菌落上挑取菌丝并连同分生孢子制成玻片，置
于光学显微镜下观察，对照资料 ［15］确定真菌的分类
学地位。
1．2．3 内生真菌的液态培养 1 000 mL 三角瓶每
瓶装 400 mL GYP 培养基，1．25×105 Pa 高压灭菌 30
min，冷却至室温备用。 从试管斜面挑取菌丝到 PDA
培养基上活化培养 3～7 d， 将活化后的菌丝接种到
三角瓶中， 30 ℃摇瓶发酵培养 14 d。
1．2．4 内生真菌粗提物的制备 液体培养完成后，
取发酵产物用纱布过滤， 得菌丝体和发酵培养液。
菌丝体风干后用甲醇浸泡提取 3 次， 每次 24 h，合
并甲醇提取液，50 ℃以下减压回收甲醇， 得到菌丝
体甲醇提取物 A； 发酵培养液用乙酸乙酯等体积萃
取 3 次， 合并乙酸乙酯萃取液，50 ℃以下减压回收
乙酸乙酯，得到培养液乙酸乙酯提取物 B。
1．2．5 内生真菌提取物体外抑菌活性测定 采用
纸片琼脂扩散法 ［16］测定内生真菌 YJ－11 粗提物对
金黄色葡萄球菌的抑制作用。 将提取物 A和提取物
B 分别溶于二甲基亚砜中， 配成浓度为 50 mg ／ mL
的药液备用。 测定粗提物抑菌活性步骤如下：①制
作金黄色葡萄球菌菌悬液。 将金黄色葡萄球菌接种
于 LB 液体培养基， 室温下静置培养 24 h， 得菌悬
液。 ②测定粗提物抑菌活性。 在无菌条件下将金黄
色葡萄球菌菌悬液均匀涂布于肉汤琼脂培养基平
板上，将直径 6 mm 无菌药敏纸片贴于平板上，其中
2 片药敏纸片上分别加入 100 μL 含提取物 A 和 B
的二甲基亚砜药液。 试验设阴性对照（仅加二甲基
亚砜），阳性对照（加链霉素），3 个重复。 于 35 ℃孵
育 24 h，测定抑菌圈直径。
2 结果与分析
2．1 内生真菌 YJ－11的分离鉴定
通过分离培养得到一株纯的内生真菌 YJ－11
（图 1），其菌落呈淡蓝色，气生菌丝为松絮状，分生
孢子梗光滑，具横隔，顶端生有扫帚状分枝，初步鉴
定为丝孢纲（Hyphomycetes）丝孢目（Hyphomycetales）
青霉属（Penicillium sp．）。
2．2 内生真菌 YJ－11体外抑菌活性
纸片琼脂扩散法测定结果表明， 药敏纸片含 5
mg 提取物 A 和提取物 B 时， 其周围产生明显的抑
菌圈，抑菌圈直径分别为（38．5±3．3） mm 和（15．0±
5．0） mm。 根据纸片扩散法抑菌结果判断标准［17］，确
定内生真菌 YJ－11 菌丝体和发酵培养液提取物对
受试细菌金黄色葡萄球菌具有显著的抑菌活性。 该
菌值得进一步研究开发。
a．菌落特征 b．显微特征
图 1 五色梅内生真菌 YJ－11 的特征
卢卫红等：五色梅叶内生真菌 YJ－11 的分离鉴定及其抑菌活性 6049
湖 北 农 业 科 学 2013 年
（上接第 6047页）
（责任编辑 陈 焰）
类型的烟草也有多种品种。 调查结果表明，烟田杂
草的种类、密度和频度与烟草的类型、品种没有明
显关系。
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（责任编辑 陈 焰）
3 结论
从广东药用植物五色梅叶中分离得到一株内
生真菌 YJ－11，鉴定属青霉属，体外抑菌试验结果表
明，该内生真菌菌丝体甲醇提取物和发酵培养液乙
酸乙酯提取物均能有效地抑制金黄色葡萄球菌。
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