全 文 ： 研究论文
[ 基金项目] 湖北省自然科学基金(编号:2006ABA036)　[ 作者简介] 唐瑛 ,女 ,硕士 ,主任医师 ,电话:027-68878660 , E-mail:maotou01@163.
com
藤茶总黄酮对小鼠的体内外抗氧化作用研究
唐瑛1 ,罗祖友2. 4 ,严奉伟3. 4 ,吴谋成4 　(1 .广州军区武汉总医院医学实验中心 , 湖北 武汉 430070;2. 湖北民族学院生物
科学与技术学院 ,湖北 恩施 445000;3 . 长江大学生命科学学院 ,湖北 荆州 434025;4 . 华中农业大学食品科技学院 , 湖北 武汉
430070)
[ 摘要] 　目的:研究藤茶总黄酮(AGTF)的体内外抗氧化作用。方法:使用丙二醛(MDA)测定试剂盒测定 AGTF 对体内外
MDA 含量的影响;用分光光度法测定 AGTF 对 H2O 2诱导小鼠红细胞溶血和 Fe2+-Vit C 诱导的肝线粒体肿胀度的抑制作
用。结果:2 . 00 mg mL - 1AGTF 对脂肪氧合酶的粗酶活性抑制率超过 50%;AGTF 在0 . 5～ 10. 0 mg mL - 1范围内 , 具有较强
的体外抗活性氧能力 ,并能减少小鼠肝线粒体及肝匀浆 MDA 的生成 , 可抑制 H2O2诱导的小鼠红细胞溶血和 Fe2+-Vit C 诱
导的肝线粒体肿胀;腹腔注射 AGTF 对小鼠体内肝组织 MDA生成的抑制作用显著。结论:AGTF 具有较强的体内外抗氧化
活性。
[ 关键词] 　藤茶总黄酮;抗氧化;体内;体外
[中图分类号] R965　　[ 文献标识码] A　　[ 文章编号] 1001-5213(2006)12-1449-04
Study on the anti-oxidative effect of total flavonoids from Ampelopsis grossedentata (AGTF) in
vivo and in vitro
TANG Ying
1 , LUO Zu-you2. 4 , YAN Feng-wei3. 4 , WU Mou-cheng4(1. Wuhan General Hospital. Guang zhou M il-
itary Region , H ubei Wuhan 430070 , Chian;2. School of Biolog ical Scence and Techno lo gy , Hubei Institute for Nationalities ,
Hubei Enshi 445000 , China;3 . Colleg e of L ife Science , Yang tze Univ ersity , Hubei Jinzhou 434025 , Chian;4 . Colleg e of Food
Science and Techno lo gy , H uazhong Ag ricultural Univ ersity , Hubei Wuhan 430070 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To evaluate the anti-ox idative effects of total flavonoids f rom Ampetopsis grosedentata(AGTF) in
vivo and in vitro. METHODS　The K3[ Fe(CN)6] model and the lipo xidase system w ere used to evaluate the deoxidizing ca-
pacity of AGTF and its inhibiting effect on lipox idase activity. The effects of AGTF on the fo rmation of MDA (malondialde-
hyde) and ROS(reactive oxygen species) in v ivo and in vi tro were detected by the reagent kits;and the hemo ly sis o f mice RBC
induced by H 2O2 and the swelling o f mice liver mitochondria induced by Fe2+-Vit C w ere determined by spectropho tometric
me thods. RESULTS　The inhibiting rate of 2. 00 mg mL -1AGTF on the crude lipoxidase ac tivity wa s above 50%. 0 . 5 - 10 . 0
mg mL -1AGTF could scavenge ROS in vitro , decrea se the fo rmation o f MDA in mice liv er and mitochondria , and inhibit the
hemo ly sis o f mice RBC and the swe lling of mice liv er mitochondria. I n vivo , AGTF could significantly decrease MDA fo rma-
tion of mice live r homogena te. CONCLUSION　AGTF has high anti-oxida tive activ ity in vivo and in v itro.
KEY WORDS:to tal flav onoids from Ampelopsis grossedentata(AGTF);anti-ox idation;in vivo;in vitro
　　藤茶是一种富含黄酮成分的野生植物。黄酮类
化合物具有抗氧化 、抗衰老 、抗肿瘤 、降血脂等多种
生物活性 ,其中最重要的生物活性是黄酮类化合物
的抗氧化作用 ,即减少自由基的产生和清除自由
基[ 1] 。研究表明 ,黄酮类化合物的抗衰老 、抗突变 、
抗动脉粥样硬化等作用都与其抗氧化活性有关。本
研究从藤茶中提取总黄酮(to tal f lavonoids f rom
Ampelopsis grossedentata , AGTF),并研究藤茶总
黄酮的体内外抗氧化能力 ,为进一步研究藤茶总黄
酮的生物活性和综合开发利用藤茶资源提供依据。
1　材料
1. 1　藤茶　鄂西产藤茶(保健茶成品),由鄂西藤茶
公司藤茶研究所鉴定为 Ampelopsis grossedentata 。
经粉碎并过 2号筛得藤茶粗粉 ,密封备用。
1. 2　藤茶总黄酮　藤茶粗粉按 1∶3料液比加入石
油醚加热回流 2次 ,每次 1 h 。残渣按 1∶30 料液比
加入纯化水于95 ℃水浴浸提 2次 ,每次 1 h。趁热
过滤 ,滤液浓缩后冷却 ,低温放置 2 ～ 3 d ,使充分析
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出晶体。离心并收集沉淀 ,再复溶析晶一次 ,干燥得
总黄酮粗粉 ,按原料重计算得率 , AGTF 粗粉得率
为31 . 10%。AG TF 以 40%乙醇适量溶解后 , 再以
纯化水配成所需浓度 ,备用。
1. 3　试验动物　昆明种小鼠 ,SPF 级 , ♂,体重(20
±2)g ,购自湖北省医学科学院医学实验动物中心 。
1. 4　试剂 　丙二醛(MDA)测定试剂盒 、活性氧
(ROS)测定试剂盒购自南京建成生物工程研究所 ,
批号 20051021;维生素 E(1 028 IU g -1 , Sigma 公
司);其他均为国产分析纯试剂 。
1. 5　仪器　岛津 UV- 265FW 紫外可见分光光度
计(Shimadzu Co . Japan)。
2　方法
2. 1　化学模拟体系中 AGTF 抗活性氧能力的测定
　按照 ROS测定试剂盒说明书 ,测定反应体系 A550
并计算抗活性氧单位 。定义:每 1 mL 样品液在
37 ℃下反应 1 min ,使反应体系中 H2O 2浓度降低 1
mmo l L- 1为一个抗活性氧单位(U)。
2. 2　AG TF 对脂肪氧合酶(Lox)的影响　按文献
[ 2]测定 Lox 活性。该反应体系每分钟增加 1个单
位吸收度为一个酶活性单位(U), (大豆)Lox 活性
以 U min-1 g -1表示。
　酶活性抑制率(%)=
　　　　　　粗酶液的酶活性 — 样品体系的酶活性粗酶液的酶活性 ×100
2. 3　AG TF 对体外小鼠肝匀浆生成 MDA 的影响
　参照文献[ 3] 制备 10%肝组织匀浆液 ,分别测定
AG TF 对正常(无诱导)和硫酸铁与 H2O 2诱导小鼠
肝匀浆中 MDA 的含量。
2. 4　AGTF 对体外 H 2O 2诱导小鼠红细胞氧化溶
血的影响　按文献[ 4] ,小鼠眼眶取血 ,制备成0. 5%
小鼠红细胞悬浮液 ,分别设立正常对照组 、H2O 2诱
导的模型对照组以及 4 个 AG TF 剂量组 , 在 415
nm 处测吸收度 ,计算比较各组的溶血率(%)和抑
制率(%)。
2. 5　AGTF 对体外小鼠肝线粒体脂质过氧化的影
响　参照文献[ 5]制备蛋白质含量为0 . 5 mg mL- 1
的线粒体悬浮液 。分别测定正常组 、0. 5 mmol L- 1
硫酸铁+0. 5 mmol L- 1维生素 C 0. 4 mL 诱导组 、
0. 4 mL 样品组对小鼠肝线粒体肿胀度和肝线粒体
MDA 含量的影响 。
2. 6　AGTF 在小鼠体内的抗氧化作用　昆明种小
鼠 20只 ,随机分成两组 ,每组 10只 。AG TF 组腹腔
注射 AGTF 液(100 mg kg -1),对照组注射等体积
生理盐水。连续给药 12 d后 ,眼眶取血分离小鼠血
清 ,以生理盐水稀释 20倍后 ,参照李云峰等[ 6] 方法
及 ROS 测定试剂盒说明书 ,测定血清抗 ROS 的能
力;处死小鼠 ,取新鲜小鼠肝组织按“2. 3”方法制备
成 10%肝匀浆液 ,再按 MDA 测定试剂盒说明书测
定 A532并计算 MDA 含量 。
2. 7　统计学分析　用 x ±s表示测定结果 , 采用
SAS软件进行 t检验 。
3　结果
3. 1　AG TF 在化学模拟体系中的抗活性氧能力　
AGTF 在0. 5 ～ 10 . 0 mg mL- 1范围内 ,随 AG TF 浓
度升高而表现出较强的抗活性氧能力 ,并呈量效关
系 ,见表 1 。
表 1　AGTF 在化学模拟体系中的抗活性氧能力( x±s , n=
3)
Tab 1　The scavenging effects o f AGTF on ROS in modified
chemical systems( x±s , n=3)
样品 浓度 /m g mL- 1 A550 抗 ROS单位 /U mL- 1
对照 — 0. 532±0. 010 —
AGTF 0. 5 0. 328±0. 009b 40. 7
2. 0 0. 085±0. 006b 89. 2
10. 0 0. 038±0. 007b 98. 6
注:与对照组比较 , bP<0. 01
3. 2　AG TF 对 Lox 的影响　AGTF 在0. 5 ～ 10. 0
mg mL-1浓度范围内 ,对 Lox 活性的抑制作用显
著 , 2. 00 mg mL-1AG TF 的酶活抑制率超过 50%,
呈明显的剂量-效应关系。见图 1 。
图 1　AGTF 对脂肪氧合酶活性的影响
Fig 1　Ef fect of AGT F on lipoxidase act ivi ty
3. 3　AG TF 对 H2O 2诱导的小鼠红细胞(RBC)溶
血的影响　与正常组(非诱导)相比 ,模型对照组小
鼠红细胞溶血极显著加强;AG TF 在0. 05 ～ 10. 00
mg mL-1浓度范围内 ,对 H 2O2诱导的小鼠红细胞
溶血有极显著的抑制作用 ,并表现出良好的剂量-效
应关系 , 见表 2。
3. 4　AGTF 对体外小鼠肝组织匀浆 MDA 生成的
影响　与对照组相比较 ,AG TF 在实验浓度范围内
对自氧化 、Fe2+诱导和 H 2O2诱导 3 种体系中的小
鼠肝匀浆 MDA 的生成均有极显著的抑制效果 ,并
呈剂量-效应关系。 10. 00 mg mL-1 AGTF 对
H 2O 2诱导的 MDA 生成抑制率高达 93%。说明
AGTF 对小鼠肝组织自发性脂质过氧化和诱导脂
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表 2　对 H2O2诱导的体外小鼠红细胞溶血的影响( x ±s , n=
3)
Tab 2　Effects of AGTF on hemolysis of mice red blo od cell
(RBC)induced by H2O2( x±s , n=3)
组别 剂量
/mg mL- 1 A415
溶血率
/%
抑制率
/%
正常对照组 — 0. 303±0. 013b 54. 6 —
模型对照组 — 0. 555±0. 020 100 —
AGT F 0. 05 0. 435±0. 017b 78. 4 21. 6
0. 50 0. 192±0. 008b 34. 6 65. 4
2. 00 0. 174±0. 007b 31. 4 68. 6
10. 00 0. 136±0. 008b 24. 5 75. 5
注:与模型对照组比较 , bP<0. 01
质过氧化均有较强的抑制作用。相同剂量下 ,
AGTF 对氧化抑制作用的强弱表现为:H 2O 2诱导体
系>自氧化体系>Fe2+诱导体系 ,见表 3。
3. 5　AG TF 对体外 Fe2+-Vit C 诱导小鼠肝线粒体
脂质过氧化的影响
3. 5. 1　对小鼠肝线粒体肿胀度的抑制作用　线粒
体因脂质过氧化而使膜的通透性增加 ,引起膜内外
物质交换 ,造成线粒体肿胀 、损伤[ 7] 。线粒体肿胀导
致其浊度下降 ,表现为 A520值下降 。AG TF 对小鼠
肝线粒体的肿胀有极强的抑制作用 , 30min内以初
表 3　对小鼠肝组织匀浆 MDA 生成的影响( x±s , n=3)
Tab 3　Effects o f AGTF on MDA fo rmation in mice live r homogena te( x±s , n=3)
样品浓度
/mg mL- 1
无诱导温育组
MDA
/nmol mg -1 pr- 1
MDA
生成抑制率 /%
Fe2+诱导温育组
MDA
/nmol mg -1 pr -1
M DA
生成抑制率 /%
H 2O 2诱导温育组
MDA
/nmol mg - 1 pr - 1
MDA
生成抑制率 /%
对 照 (-) 5. 74±0. 34 - 11. 90±0. 43 - 8. 72±0. 40 -
AGT F 0. 50 2. 95±0. 15b 48. 56 9. 04±0. 13b 24. 0 1. 12±0. 21b 87. 18
2. 00 2. 82±0. 23b 50. 80 8. 67±0. 33b 27. 2 0. 72±0. 09b 91. 75
10. 00 2. 49±0. 10b 56. 60 7. 69±0. 29b 35. 4 0. 59±0. 04b 93. 27
注:与对照比较 , bP<0. 01
始 A520值为基数 ,诱导对照组 A520值下降率最大
(8. 9%),正常对照组(5. 1%), AGTF 各组 A520值
几乎没有变化。说明 AG TF 能显著地抑制诱导体
系的线粒体脂质过氧化 , 见图 2。
图 2　AGT F对小鼠肝线粒体肿胀度的影响
— ◇—无诱导对照;— ■—Fe2+-VitC诱导对照;—▲—AG TF(0. 05 g
L- 1)+Fe2+-VitC;— ※—AG TF(0. 50 g L-1)+Fe2+-VitC;—
*— AG TF(2. 00 g L -1)+Fe2+-VitC;— ●—AG TF(10. 00 g L -1)
+Fe2+-VitC
Fig 2　Ef fect of AG TF on sw elling of mice liver mi to chond ria
— ◇—no inducemen t;— ■— Fe2+-VitC inducement;— ▲—AGTF
(0. 05 g L- 1)+Fe2+-VitC;— ※—AGT F(0. 50 g L -1)+Fe2+-
VitC;—*—AGT F(2. 00 g L-1)+Fe2+-VitC;— ●—AG TF(10. 00
g L- 1)+Fe2+-VitC
3. 5. 2 　对小鼠肝线粒体 MDA 生成的影响 　
AG TF 对 Fe2+-VitC 诱导的小鼠肝线粒体 MDA 生
成有较强的抑制作用 ,并呈明显的剂量-效应关系 。
与诱导对照体系(CK 2)相比 ,在 AGTF 试验浓度范
围内抑制率达到48. 8%～ 60. 7%,见图 3。
3. 6 　AGTF 对小鼠体内血清活性氧及肝组织
MDA 的影响　与对照组比 , AGFT 能明显降低小
鼠肝组织中的MDA含量 ,且差异有显著性 ,表明
图 3　AGTF 对 Fe2+-VitC诱导小鼠肝线粒体 MDA 生成的影响
Fig 3　Ef fect of AGT F on MDA formation in mice liver mito chon-
dria indu ced by Fe2+-VitC
AGTF 有减少小鼠体内肝组织脂质过氧化产物生
成的作用 。注射 AGTF 后能升高小鼠血清抗 ROS
单位 ,但差异无显著性 ,表 4。
表 4　对小鼠体内血清 ROS 及肝组织 MDA 生成的影响( x
±s , n=10)
Tab 4　Effect of AGTF on ROS in mice se rum and MDA in
mice liver in vivo( x±s , n=10)
组别 抗 ROS 单位
/U mL- 1
M DA
/nm ol mg- 1 pr- 1
对照组 1278. 3±163. 9 1. 9±1. 2
AGT F /100 mg k g- 1 d -1 1341. 7±51. 9 0. 89±0. 19a
注:与对照组比较 , a P<0. 05
4　讨论
黄酮类化合物的抗氧化作用 ,主要表现为减少
自由基的产生和清除自由基两个方面[ 1] 。用铁氰化
钾还原法所测得的样品的还原力 ,可以反映该物质
的抗氧化活性 。一般情况下 ,样品的还原能力与抗
氧化能力呈正相关[ 8-9] 。本实验证实在化学反应体
系中 ,AG TF 具有还原能力 ,能清除活性氧 、并抑制
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脂肪氧合酶的活性 ,剂量-效应关系明显;小鼠血清
体外抗氧化实验显示 AGTF 可明显增加小鼠血清
抗活性氧能力 ,表明 AG TF 较高的还原能力与抗氧
化能力相一致。
本实验表明 , AGTF 既能清除活性氧 ,又能抑
制 Lox 的活性 ,表明金属离子和过氧化氢产物均能
催化 Lox[ 2] 。因此 AG TF 可能通过这两方面的作
用而实现其抗氧化功效。
本研究表明 , AGTF 能极显著抑制 H 2O2诱导
的小鼠红细胞溶血 ,有较强的抗 H 2O2诱导氧化的
活性 。
通过采用模拟生物体内环境体系以及采用体内
实验研究 A TGF 的抗氧化作用 ,本研究结果显示:
AG TF 能极显著抑制体外肝线粒体的肿胀 、抑制小
鼠肝线粒体和肝组织 MDA 的生成 ,而且 AGTF 可
显著减少小鼠肝匀浆 MDA 的生成 。表明 A TGF
可能通过阻断线粒体的“呼吸爆发”或其他机制来保
护组织免受氧化损伤。注射 AG TF 后的小鼠血清
抗活性氧单位平均值也高于对照组 ,但差异不显著 。
可能与机体维持正常的新陈代谢必须保持适度的自
由基水平有关[ 8] 。
对于 AG TF 的动物在体研究尚处于起步阶段 ,
需要进行深入研究以明确该化合物在体内的作用机
制是否与其体外一致 ,从而为 AGTF 的临床应用和
保健品开发提供更为直接的依据 。
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566.
[收稿日期] 2006-08-12
[ 基金项目] 南通市科技创新计划项目(编号:A5013)　[ 作者简介] 杨丽云 ,女 ,硕士 , 电话:0513-85463515 , E-m ail:y angliy unyang@163.
com　[ 通讯作者] 徐济良 ,男 ,硕士 ,教授 ,电话:0513-85051727 , E-m ail:j lxu@ntu. edu. cn
和胃冲剂对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用
杨丽云 ,孟国梁 ,徐济良　(南通大学基础医学院药理教研室 ,江苏 南通 226001)
[ 摘要] 　目的:观察中药复方和胃冲剂对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用。方法:将 40只健康♂性 Spaque-Daw ley 大鼠随机
分为 5 组:正常对照组 、模型对照组 、和胃冲剂低 、中 、高剂量组 ,采用无水乙醇诱导大鼠急性胃黏膜损伤 ,分别测定各组大鼠的
胃黏膜损伤指数 、血浆超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量 , 并在光镜下观察胃黏膜病理学改变。结果:和胃冲
剂各剂量组的损伤指数较模型对照组显著降低(P<0. 01), 且呈剂量依赖性;血浆中 SOD 活性显著升高 , MDA 含量下降 ,黏
膜损伤程度明显减轻。结论:和胃冲剂对无水乙醇诱导的急性胃黏膜损伤有明显的保护作用 , 其机制可能与抗氧化作用有
关。
[ 关键词] 　和胃冲剂;无水乙醇;胃黏膜损伤;保护作用
[中图分类号] R285. 6　　[ 文献标识码] A　　[文章编号] 1001-5213(2006)12-1452-04
Protective effects of Hewei powder on acute gastric mucosal lesion in rats
YANG Li-yun , MENG Guo-liang , XU Ji-liang (Depa rtment o f Pha rmacology , Schoo l of Basic Medical Sciences , Nantong Uni-
versity , Jiang su Nantong 226001 , China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　To study the pr otectiv e effects o f Hew ei powder on acute gastric mucosal lesion in r ats. METHODS
　40 male Spaque-Dawley r ats w ere divided into fiv e g roups randomly:no rmal contro l , expe rimental contro l , and three experi-
mental g roups(337 , 675 , 1 350 mg kg - 1 , ig). The le sion o f g astric muco sa w as established by giving abso lute alcohol after giv-
1452 中国医院药学杂志 2006年第 26卷第 12期 Chin H osp Pharm J ,2006 Dec , Vol 26 , No. 12