全 文 ：降香叶不同提取部位体外抗氧化活性的比较
李金玉1，陈地灵2* (1．广东轻工职业技术学院，广东广州 510300;2．华南师范大学药物研究院，广东广州 510631)
摘要 ［目的］考察降香叶不同提取部位的体外抗氧化活性，及其与黄酮类物质含量的相关性。［方法］采用不同极性的溶剂对降香叶
水提物进行萃取，得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯和水等 4个提取部位。以体外清除 1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基、过氧化氢、羟自
由基和超氧阴离子的能力评价降香叶提取物的抗氧化活性;并采用铝盐络合法测定各个提取部位的黄酮含量，比较分析其含量与氧化
能力的相关性;采用 HPLC法分析其指纹。［结果］降香叶各个提取部位均有不同程度的体外抗氧化能力，其效果顺序为:乙酸乙脂部位
＞氯仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位，与各部位黄酮含量呈正相关。［结论］降香叶不同提取部位均具有抗氧化能力，其与黄酮类物质
含量呈正相关，其乙酸乙脂部位可作为抗氧化活性部位。
关键词 降香叶;抗氧化;总黄酮含量;自由基;有效部位
中图分类号 S567 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2013)09 －03853 －04
In vitro Antioxidant Activity of the Extracts from Dalbergia Leaves
LI Jin-yu et al (Guangdong Industry Technical College，Guangzhou，Guangdong 510300)
Abstract ［Objective］To evaluate the antioxidant activity of total flavones in different extracts from Dalbergia Odarifera leaves． ［Method］
The four extracts were prepared by aqueous extract of Dalbergia Odarifera leaves by 3 different organic solvents petroleum ether，chloroform，
ethyl acetate and water． The antioxidant activities were assessed by DPPH radical scavenging activity，superoxide radical scavenging activity，
hydroxyl radical scavenging activity，peroxide scavenging activity，and nitric oxide scavenging activity，with the positive control of the antioxi-
dant activity of ascorbic acid． The contents of total flavones were measured by Aluminum salt complex method． ［Ｒesult］The pecking order of
antioxidant capacity was Ethyl acetate parts ＞ Chloroform parts ＞ water extraction ＞ Petroleum ether parts，and consistent with the content of
the flavonoids． ［Conclusion］Antioxidant components could mainly exist in the ethyl acetate parts，the antioxidant capacity was associated with
its flavonoids content．
Key words Dallbergia Odarifera;Antioxidant activity;Total contents of flavonoids;Free radical;Active fraction
作者简介 李金玉(1971 － ) ，女，江西吉安人，讲师，从事生物及化工研
究，E-mail:lijinyu101@ 163． com。* 通讯作者，博士后，从事
中药现代化研究，E-mail:diling0828@ sina． com。
收稿日期 2013-03-21
降香(LIGNUM DALBEＲGIAE ODOＲIFEＲAE)是豆科
(Leguminosae sp．)植物降香檀(Dallbergia Odarifera T． Chen)
树干和根的干燥心材，是我国的一种传统名贵中药材，具有
行气活血、止痛和止血等功能，临床多用于脘腹疼痛、肝郁胁
痛、跌扑损伤和外伤出血等症。其主要成分为黄酮类和萜类
化合物［1 －4］;亦是一种名贵香料，具有较高的经济价值。但
降香成材周期较长。一直以来，降香的入药部位只限于其根
部心材，为充分提高其价值，试验对降香叶进行抗氧化活性
评价研究，筛选其可能抗氧化有效部位，以期对降香资源的
综合开发利用提供研究基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。降香叶，采自广州中医药大学大学城校
区药王山，经广州中医药大学中药学院实验中心林励教授鉴
定为豆科植物降香黄檀(Dallbergia Odarifera T． Chen)的叶。
1． 1． 2 主要仪器。BP211D电子分析天平(d = 0． 000 01 g) ，
购自德国 Sartorius 公司;XS 225A 型分析天平(d = 0． 000 1
g) ，购自瑞士 Mettler Toledo公司;DFY-200型粉碎机，购自浙
江温岭市大德中药机械有限公司;HH-4 型数显恒温水浴锅，
购自上海浦东物理光学仪器厂;KQ-500型超声波清洗器(工
作频率:40 KHz;超声电功率:500 W) ，购自江苏省昆山市超
声仪器有限公司;TDL-2B 离心机，购自 Anke 公司;ELX808
多功能酶标仪，购自美国 Bio-tek 公司;Agilent8453E 型紫外
可见光分光光度计，购自美国 Agilent公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁对照品，批号 MUST-12040302，购自
成都曼思特生物科技有限公司;三氯乙酸，批号 20100201，购
自天津市福晨化学试剂厂;三羟甲基氨基甲烷，批号
PB11071-1;邻苯三酚，批号 C1207030;抗坏血酸，批号
20100226;硫代巴比妥酸，批号 49837;1，1-二苯基-2-三硝基
苯肼(1，1-Diphenyl-2- picrylhydrazyl radical 2，2-Diphenyl-1-
(2，4，6-trinitro phenyl)hydrazyl，DPPH·) ，批号 20110304，均
购自美国 Sigma公司;鹰嘴豆芽素 A和 6-羟基 －鹰嘴豆芽素
A，实验室自制;其余试剂均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 各部位储备液的制备。取粉碎过 3 号筛的干燥降香
叶 50． 000 g，加入 125 ml的水，煎煮提取 3次，每次提取 1 h，
合并 3次提取液，减压抽滤，滤液浓缩至 150 ml，分别采用石
油醚、氯仿和乙酸乙酯对滤液进行萃取，所得萃取液减压浓
缩至干用无水甲醇定容与 100 ml容量瓶中，作为各部位测定
储备液备用。
1． 2． 2 色谱条件。采用 HPLC-UV 法对其水提液进行指纹
分析。检测器为 Dionex Ultimate 3000，DAD;色谱柱为 Ac-
claim C18(250 mm × 4． 6 mm，5 μm，Dionex) ;流动相为浓度
0. 1%磷酸水溶液(A)－ 无水甲醇(B) ，梯度洗脱(0 ～ 15
min，B 95 ～ 85%;15 ～ 50 min，B 80% ～ 65%;50 ～ 65 min，B
55% ～0) ;190 ～400 nm全波长扫描，根据 UV光谱图及对照
品分析其可能组分。
1． 2． 3 降香叶不同提取部位黄酮含量的测定及 HPLC指纹
分析。(1)线性关系的考察。精密称取芦丁对照品 5． 00 mg，
置于 50 ml容量瓶中，用浓度 60%乙醇稀释至刻度，摇匀，即
安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(9):3853 － 3856 责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.09.133
得标准溶液。精密量取上述标准溶液 0、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0和
5． 0 ml，分别置于 10 ml 容量瓶中，加入蒸馏水使成 5 ml，精
密加入浓度 5%亚硝酸溶液 0． 3 ml，摇匀，放置 5 min，再加入
浓度 10%硝酸铝溶液 0． 3 ml，摇匀，放置 6 min，然后加入浓
度 4%氢氧化钠溶液 2 ml，最后用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，
放置 10 min，以第 1管为空白，在 510 nm处测定吸光度。以
吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。(2)按照标
准曲线测定方法，取各储备液 2 ml稀释至 10 ml，测定其吸光
度(n =3) ，取平均值计算各储备液中黄酮含量，并进行方法
学考察。
1． 2． 4 清除 1，1-二苯基苦基苯肼(DPPH·)自由基能力的
测定。采用 Cardador-Martinez的方法评价清除 DPPH·自由
基的能力［5］。取各提取部位储备液分别配置浓度为 0． 2、
0. 4、0． 8、1． 0 和 2． 0 mg /ml，每个待测样品溶液均取 0． 1 与
2. 4 ml浓度 0． 12 mmol /L的 DPPH·溶液混匀，室温下反应
30 min后，在 517 nm波长下测定其吸光度，用同样体积的无
水甲醇代替样品溶液作为空白对照，采用抗坏血酸作为阳性
对照。按如下公式计算其清除率:
DPPH·自由基能力清除能力(%)=(1 － A1)/A0 × 100
式中:A1 为待测样品溶液吸光值;A0 为空白对照溶液吸光
值。每个试验重复 3次，结果取平均值。
1． 2． 5 超氧阴离子(O －2 ·)清除能力测定
［6］。每个提取部
位储备液各取 6 支比色管分别移取 50 mmol /L(pH 8． 2)的
Tris-HCl缓冲溶液 4． 5 ml，在 2 ～ 6 号比色管中分别加入 0． 5
ml浓度为 0． 2、0． 4、0． 8、1． 0 和 2． 0 mg /ml 的样品溶液，置于
25 ℃水浴中预热 20 min，再向每个提取部位 2 ～ 6 号试管中
加入 25 ℃预热的 3 mmol /L邻苯三酚 0． 3 ml立即混匀，然后
在 30 s内用蒸馏水补至 25． 0 ml，最后在 25 ℃水浴中准确反
应 4 min，立即滴加 0． 5 ml浓度为 8 mol /L的 HCl终止反应，
在 325 nm处测定吸光度。以等体积的 Tris-HCl 缓冲溶液作
为空白。吸光度越低，清除超氧阴离子自由基效果越好，采
用抗坏血酸作为阳性对照。按如下公式计算其清除率:
超氧阴离子的清除率(%)=(A0 － A1)/A0 × 100
式中:A0 为空白对照组吸光值;A1 为样品溶液的吸光值。每
个试验重复 3次，结果取平均值。
1． 2． 6 清除羟基自由基(·OH)的能力测定。按照脱氧核
糖法来评价样品清除羟基自由基(·OH)的能力［7］。取各提
取部位储备液分别配置成浓度为 0． 2、0． 4、0． 8、1． 0 和 2． 0
mg /ml，每个待测样品溶液均取 75 μl、10 mmol /L 脱氧核糖
150 μl、10 mmol /L的 FeSO4-EDTA 150 μl、10 mmol /L的H2O2
150 μl和525 μl H2O充分混匀，在37 ℃水浴4 h，加入750 μl
浓度2． 8%的三氯乙酸和750 μl浓度1%的 TBA溶液停止反
应，沸水浴10 min，在水中冷却后，在520 nm波长下测定吸光
值，抗坏血酸作为阳性对照，以同样体积的无水甲醇溶液代
替样品溶液作为空白对照。按如下公式计算其清除率:
羟基自由基清除能力(%)=(A0 － A1)/A0 × 100
式中:A0 为空白对照组吸光值;A1 为样品溶液的吸光值。每
个试验重复 3次，结果取平均值。
1． 2． 7 清除 H2O2 能力测定。按照李贵荣等的方法来评价
清除 H2O2 的能力
［8 －9］。取 4． 5 ml 浓度 0． 1 mol /L(pH =
7. 4)磷酸盐缓冲溶液，加入 2 ml 浓度 0． 05%的 H2O2 后，加
入 1 ml一定浓度的试样，立即混匀，在 340 nm处测定吸光度
值 A1。试验中以不加试样的H2O2 吸光度为 A0，以不加H2O2
的试样溶液的吸光度为 A2，每个试验重复 3 次，结果取平均
值。按如下公式计算其清除率:
过氧化氢清除率(%)=［A0 －(A1 /A2) ］A0 × 100
1． 2． 8 亚硝酸盐 NO －2 清除能力测定
［10］。取各提取部位储
备液分别配置成浓度为0． 2、0． 4、0． 8、1． 0和2． 0 mg /ml，每个
待测样品溶液均取 0． 1 ml 与 2． 5 ml 的 NaNO3 标准使用液，
于37 ℃水浴锅中放置10 min，分别加2 ml的 Fe(CN)2 溶液，
摇匀，再加 2 ml的乙酸锌溶液，放置 30 min后过滤。取滤液
5 ml，加浓度 0． 4%对氨基苯磺酸溶液 2 ml，3 min 后加浓度
0． 2%的盐酸萘乙二胺溶液 1． 0 ml，混匀，放置 15 min，在 538
nm波长处测吸光度，记为样管吸光度。同时作对照试验，测
定的吸光度记为对照管吸光度，计算亚硝酸钠的清除率:
亚硝酸盐清除率(%)=(A1 － A2)/A1 × 100
式中:A1 为对照管吸光度;A2 为待测样品吸光度。每个试验
重复 3次，结果取平均值。
2 结果与分析
2． 1 降香叶不同提取部位黄酮含量的测定 (1)线性关系
的考察。试验选择 510 nm波长为降香叶不同提取部位黄酮
测定波长。计算得线性回归方程为 Y = 0． 109 2X － 0． 011 4
(Ｒ =0． 999 9) ，表明在 0 ～0． 05 mg /ml范围内，芦丁浓度与吸
光度的线性关系良好，各部位黄酮含量见表 1。(2)精密度
试验。计算得吸光度的 ＲSD 为 0． 11%，表明精密度良好。
(3)重复性试验。计算得吸光度的 ＲSD为 2． 54%，表明该方
法的重复性好。(4)稳定性试验。计算得吸光度均值为
0. 682 4，ＲSD为 2． 13%，说明供试品溶液在 90 min内是稳定
的。(5)加样回收率试验。计算得平均回收率为 105． 81%，
ＲSD为 3． 32%，表明该方法准确可靠，可用于降香叶不同提
取部位总黄酮的含量测定。
表 1 降香叶不同提取部位总黄酮含量测定结果 (珚X ± S，n =3)
编号 降香叶提取部位 黄酮含量∥mg /g
1 乙酸乙酯 25． 4 ±0． 42
2 氯仿 9． 5 ±0． 25
3 水 5． 5 ±0． 14
4 石油醚 3． 4 ±0． 13
2． 2 各提取部位清除 DPPH·自由基的能力 图 2 和表 2
表明，降香叶不同提取部位清除 DPPH·自由基能力强弱为:
乙酸乙脂部位 ＞氯仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位。
2． 3 各提取部位清除 O－2 ·的能力 图 3和表 2 表明，降香
叶不同提取部位清除 O －2 ·能力强弱为:乙酸乙脂部位 ＞氯
仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位。
2． 4 各提取部位清除·OH的能力 图 4和表 2表明，降香
叶不同提取部位清除·OH能力强弱为:乙酸乙脂部位 ＞氯
仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位。
4583 安徽农业科学 2013 年
注:图中 15为鹰嘴豆芽素 A;16为 6-羟基 －鹰嘴豆芽素 A。
图 1 降香叶水提液 HPLC指纹分析
图 2 降香叶各提取部位清除 DPPH·自由基能力
图 3 降香叶各提取部位清除 O －2 ·能力
图 4 降香叶各提取部位清除·OH能力
2． 5 各提取部位清除 H2O2 的能力 图 5和表 2表明，降香
叶不同提取部位清除 H2O2 能力强弱为:乙酸乙脂部位 ＞氯
仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位。
图 5 降香叶各提取部位清除 H2O2 能力
2． 6 各提取部位清除 NO－2 的能力 图 6和表 2 表明，降香
叶不同提取部位清除 NO －2 能力强弱为:乙酸乙脂部位 ＞氯
仿部位 ＞水提部位 ＞石油醚部位。
图 6 降香叶各提取部位清除 NO －2 能力
3 结论与讨论
自由基是机体在生化反应中产生的性质活泼的具有极
强的氧化功能、可导致机体衰老的物。自由基的形成有生
化、化学、物理等多种因素，但主要是来自人体内的生化反
应，各种酶的催化反应或疾病都可以产生大量自由基，当自
由基浓度超过生理限度时，多余的自由基成为有害物质，攻
558341卷 9期 李金玉等 降香叶不同提取部位体外抗氧化活性的比较
表 2 降香叶不同提取部位 5种抗氧化评价方法清除率 IC50(珚X ± S，n =3)
部位 DPPH· O －2 · ·OH H2O2 NO
－
2
乙酸乙酯部位 0． 61 ±0． 09 1． 04 ±0． 11 0． 37 ±0． 03 1． 95 ±0． 15 0． 16 ±0． 02
氯仿部位 1． 88 ±0． 06 － 1． 44 ±0． 21 － 0． 22 ±0． 04
水层部位 － － － － 0． 57 ±0． 13
石油醚部位 － － － － 1． 27 ±0． 31
VC(阳性参照) 0． 34 ±0． 03 0． 13 ±0． 01 0． 19 ±0． 02 0． 17 ±0． 01 0． 06 ±0． 01
注:“－”表示在测试样品浓度中清除率达不到 50%，无法计算 IC50。
击脂质、蛋白质等大分子物质，引起各种氧化损伤，进而导致
细胞结构和功能的变化，使机体抵抗力下降，从而导致各种
疾病发生，如癌症、心脑血管疾病［11］，因此清除体内多余自
由基十分必要。
研究结果表明，在检测剂量范围内，降香叶乙酸乙酯部
位抗氧化能力最强，对超氧阴离子、羟基自由基、过氧化氢、
亚硝酸盐均具有较强的清除能力，氯仿部位、水提部位其次，
石油醚部位最弱，这与本文中用芦丁法所测的各提取部位黄
酮含量大小相一致，可推断黄酮类成分含量的大小，对抗氧
化能力的强弱影响较大，乙酸乙酯部位为降香叶药材中抗氧
化最主要的活性部位，其具体化学组分和药效作用有待进一
步的研究开发。
参考文献
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232 －234．
(上接第 3840页)
表 2 各处理韭菜产量 kg
处理 第 2茬 第 3茬 第 4茬 总产量
① 233． 7 228． 0 243． 2 703． 9
② 252． 0 256． 1 268． 8 776． 9
③ 249． 9 263． 4 282． 0 798． 3
CK 227． 1 220． 0 219． 7 666． 8
均有不同程度的增加，而处理②可溶性蛋白和维生素 C含量
达到最高值。
表 3 各处理韭菜品质和叶绿素指标
处理
可溶性糖含量
%
可溶性蛋白含量
mg /g
维生素 C含量
mg /g
叶绿素含量
mg /g
① 1． 59 1． 05 3． 61 0． 98
② 2． 39 1． 30 9． 25 1． 13
③ 2． 67 0． 87 7． 30 1． 74
CK 1． 56 0． 90 4． 24 0． 84
3 小结与讨论
研究表明，使用海藻冲施肥对韭菜营养器官的生长发育
有明显的促进作用，对叶片的生长发育尤为明显。因此，在
生育期内使用海藻冲施肥对单株营养体根茎叶器官有促进
作用。通过促进营养器官的生长，根系发达，叶片的张开幅
度大。这有利于促进韭菜的光合作用，提高光合产物的形成
和积累［6］。使用海藻冲施肥还可以有效地提高韭菜产量，但
使用冲施肥的浓度不同，效果不同。针对试验品种“独根红”
而言，用 75 g /m2 海藻冲施肥的增产幅度最大，为 16． 5%，而
过多的使用并不能使产量明显增加。海藻冲施能显著提高
可溶性糖、叶绿素的含量。处理②可溶性蛋白和维生素 C的
含量达到最大值。这可能是由于过多使用海藻冲施肥促进
了韭菜其他方面的改善，抑制了这 2项品质指标的提高。因
此，最佳的使用浓度为 75 g /m2。海藻冲施肥对韭菜的其他
品质指标有无影响，仍有待于在日后的生产和试验中进一步
研究。
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6583 安徽农业科学 2013 年