全 文 ：中国医药导报 2014 年 5月第 11卷第 15期
CHINA MEDICAL HERALD Vol. 11 No. 15 May 2014
·药品检验·
[基金项目] 浙江省中西医结合学会科研项目（编号 2012LY001）。
[作者简介] 邬浩杰（1975.2-），男，浙江奉化人，浙江省奉化市
中医院副主任中药师，主要从事中药库研究工作。
[通讯作者] 邹盛勤（1970.8-），男，江西奉新人，硕士，宜春学
院教授，主要从事药物成分提取与分析研究工作。
杏香兔耳风为菊科兔耳风属植物杏香兔耳风
Ainsliaea fragrans Champ.的干燥全草，别名白走马胎、
金边兔耳草、一枝香等，天然或以人工栽培方式分布
于长江以南各省区，收载于《卫生部药品标准》，具有
清热解毒、舒筋活血、发表祛风等功效，主治妇女崩
漏、痈疽肿毒、毒蛇咬伤[1-2]。临床上用于治疗肺结核咯
血、跌打损伤、无名肿毒、慢性宫颈炎[3-4]。 杏香兔耳风
主要含有酚酸类、黄酮类、三萜类、倍半萜内酯、倍半
萜苷等化学成分[5]。酚酸类化合物是其主要成分，其中
绿原酸、3，4-二咖啡酰基奎宁酸、3，5-二咖啡酰基奎
宁酸和 4，5-二咖啡酰基奎宁酸等化合物含有量较
高 [6]；黄酮类成分主要有槲皮素、木犀草素、芹菜素、小
麦黄素等[7]。 药理实验证明，其对金黄色葡萄球菌、乙
型链球菌等有抑制作用，药用价值较高，属广谱抗菌
中草药[8-9]。 杏香兔耳风在我国分布广泛，其化学成分
及含量难免不同，药效上也难免存在差异。 对杏香兔
耳风中的化学成分物质群进行有效地测控，可全面地
控制杏香兔耳风的内在质量，而中药指纹图谱为此提
供了一种有效手段 [10-11]。 为提高药材质量的可控性，
本研究采用高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器法
（HPLC-PDAD）建立了杏香兔耳风的指纹图谱，为杏
香兔耳风的内在质量控制和基础药效研究提供依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪[包括 515 双泵，2996 光电二极
杏香兔耳风高效液相色谱 - 光电二极管矩阵
检测器法的指纹图谱研究
邬浩杰 1 邹盛勤 2
1.浙江省奉化市中医院，浙江奉化 315500；2.宜春学院化学与生物工程学院，江西宜春 336000
[摘要] 目的 研究用高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器法（HPLC-PDAD）建立杏香兔耳风指纹图谱的分析方
法，为杏香兔耳风的质量鉴定提供依据。 方法 色谱条件为：色谱柱为 Nucleosil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），
以乙腈-缓冲溶液（乙酸-NaH2PO4，0.1 mol/L，pH=2.5）为流动相，梯度洗脱，流速 1.0 mL/min，柱温 30℃，检测波长
356 nm。 结果 用上述方法确定了 12 批不同品种杏香兔耳风的 11 个共有峰，其相识度均大于 0.91，精密度、稳
定性、重复性试验、各共有峰相对保留时间和相对峰面积的 RSD均小于 2.5%，各色谱峰分离效果良好，符合指纹
图谱要求。 结论 该方法精密度、稳定性和重复性均较好，为杏香兔耳风的质量控制标准提供了参考。
[关键词] 杏香兔耳风；高效液相色谱-光电二极管矩阵检测器法；指纹图谱；质量控制
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [文章编号] 1673-7210（2014）05（c）-0101-04
Study on HPLC-PDAD Fingerprints of Ainsliaea fragrans Champ.
WU Haojie1 ZOU Shengqin2
1.Traditional Chinese Medicine Hospital of Fenghua City, Zhejiang Province, Fenghua 315500, China; 2.College of
Chemistry and Bioengineering, Yichun University, Jiangxi Province, Yichun 336000, China
[Abstract] Objective To establish the analytical method of Ainsliaea fragrans Champ. fingerprint chromatography by
HPLC-PDAD. Methods The chromatographic conditions were as follows: a Nucleosil C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) with
CH3CN-Buffer solution (CH3COOH-NaH2PO4, 0.1 mol/L, pH=2.5) as mobile phase in a gradient mode. The flow rate
was 1.0 mL/min, and the column temperature was 30℃ . The detecting wavelength was 356 nm. Results 11 common
peaks were found in the fingerprint of 12 batches of Ainsliaea fragrans Champ. and the similarity of 12 samples were
more than 0.91. The established HPLC fingerprint chromatograms had desirable accuracy, repeatability and stability.
Conclusion This method is accurate and steady with a good repeatability and provides a reference for quality control of
Ainsliaea fragrans Champ..
[Key words] Ainsliaea fragrans Champ.; HPLC-PDAD; Fingerprint; Quality control
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管矩阵检测器（PDAD）]，柱温箱，Empower 中文色谱
工作站，美国 Waters 公司；LD-500 中药粉碎机（长沙
市常宏制药机械设备厂）；DH25-12DTN 超声清洗器
（上海狄昊实业发展有限公司，功率 500W，频率 40 kHz）；
中药色谱指纹图谱相似度评价系统（2004A 版，国家
药典委员会）。
1.2 试药
绿原酸和木犀草素对照品（中国药品生物制品检
定院，批号分别为 110753-200212、111520-200506）；
乙腈（色谱纯，天津康科德科技有限公司）；水为超纯
水；其余试剂均为分析纯。 杏香兔耳风药材分别采自
浙江和江西，经宜春学院李开泉教授鉴定为杏香兔耳
风 Ainsliaea fragrans Champ.的全草。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品混合溶液的制备 精密称取绿原酸对照
品 5.10 mg和木犀草素对照品 3.02 mg，用流动相溶解
后定容于 20 mL容量瓶中，得含绿原酸 0.255 mg/mL和
木犀草素 0.151 mg/mL 的对照品混合溶液。
2.1.2 样品溶液的制备 杏香兔耳风干燥后粉碎，过 80
目筛。 精密称取约 1.5 g，置具塞三角烧瓶中，用移液
管精密加入 70 %乙醇 50 mL，称重，超声提取 60 min
（功率 500 W，频率 40 kHz），放冷后称重，用 70%乙
醇补足减失的重量，摇匀后 0.45 μm 滤膜过滤，得样
品溶液。
2.2 测定波长的选择
通过 PDAD 检测器对绿原酸和木犀草素对照品
混合溶液在 190~600 nm 波段内进行三维扫描，提取
紫外吸收光谱，谱图中绿原酸最大吸收波长分别为
218.5 nm和 328.6 nm，木犀草素最大吸收波长分别为
256.5 nm和 356.2 nm。选择 356 nm作为检测波长，色
谱图中酚酸类和黄酮类组分均有较强吸收，在保证组
分峰信噪比较高的同时，色谱峰信息量最大。 绿原酸
和木犀草素紫外光谱见图 1。
图 1 绿原酸和木犀草素紫外光谱
2.3 提取溶剂和提取次数的优化
精密称取杏香兔耳风粉末 1.5 g，置具塞三角烧瓶
中，用移液管分别精密加入无水乙醇、70%乙醇、50%
乙醇、30%乙醇、甲醇、70%甲醇、50%甲醇、30%甲醇
约 50 mL，按“2.1.2”项下样品溶液的制备方法制备样
品溶液，精密吸取 10 μL进样分析。 结果 70%的乙醇
能够有效地提取杏香兔耳风中的成分，提取效率最
高，色谱峰最为丰富，且第 2 次提取的共有峰色谱总
面积仅为第 1次提取液的 3.1%，故选择 70%的乙醇作
为提取溶剂，提取次数为 1次。
2.4 色谱条件
流动相为乙腈-缓冲溶液（乙酸-NaH2PO4，0.1 mol/L，
pH=2.5），梯度洗脱程序为 0 min（20∶80）→15 min（20∶
80）→20 min（40∶60）→30 min（40∶60）→40 min（50∶50）；
流速 1.0 mL/min；检测波长 356 nm；柱温 30℃。 对照
品的 HPLC色谱见图 2。
图 2 混合对照品的 HPLC 色谱
2.5 精密度试验
取同一杏香兔耳风样品溶液，按选定的色谱条件
进行 HPLC 分析，连续进样 5 次，利用中药色谱指纹
图谱相似度评价软件，计算同一样品的指纹图谱相似
度，结果显示 5 次连续进样色谱图的相似度 RSD 为
0.12%，共有色谱峰面积的 RSD在 0.15%~1.12%之间，
表明仪器的精密度良好。
2.6 重现性试验
取同一批次杏香兔耳风药材样品 5 份制备样品
溶液，分别精密吸取 10 μL 进样分析，各共有峰保留
时间和峰面积的 RSD分别为 0.63%~1.35%和 1.54%~
2.33%，表明该测定方法的重复性良好。
2.7 稳定性试验
取同一杏香兔耳风样品溶液，按选定的色谱条件，
在 0、2、6、10、15、20、24 h分别进样分析，提取 356 nm
色谱，计算得各共有峰保留时间和峰面积的 RSD 分
别为 1.12%~2.42%和 0.80%~1.26%，表明供试品溶液
在 24 h内稳定。
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2.8 杏香兔耳风指纹图谱的建立及相似度分析
2.8.1 指纹图谱的建立 按“2.1.2”项下方法制备 12 批
次杏香兔耳风药材的样品溶液，在选定的色谱条件下，
依次进样检测，提取 12 批次杏香兔耳风 HPLC 指纹
图谱。根据色谱工作站计算的色谱峰峰面积积分值和
相对保留时间等参数进行比较分析，通过比较绿原
酸、木犀草素对照品和杏香兔耳风样品色谱峰的保留
时间和紫外光谱，共选定 11 个共有峰作为杏香兔耳
风 HPLC指纹图谱的特征峰。 杏香兔耳风 HPLC指纹
图谱见图 3。
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
S11
S12
R
1.000
0.965
0.862
0.982
0.963
0.809
0.854
0.987
0.992
0.965
0.862
0.982
0.980
0.965
1.000
0.831
0.986
0.988
0.752
0.821
0.940
0.965
0.996
0.831
0.986
0.961
0.862
0.831
1.000
0.807
0.809
0.982
0.999
0.848
0.862
0.831
0.961
0.807
0.940
0.982
0.986
0.807
1.000
0.993
0.724
0.796
0.968
0.982
0.986
0.807
0.979
0.958
0.963
0.988
0.809
0.993
1.000
0.715
0.800
0.949
0.963
0.988
0.809
0.993
0.952
0.809
0.752
0.982
0.724
0.715
1.000
0.984
0.795
0.809
0.852
0.982
0.824
0.910
0.854
0.821
0.999
0.796
0.800
0.984
1.000
0.840
0.854
0.821
0.999
0.796
0.934
0.987
0.940
0.848
0.968
0.949
0.795
0.840
1.000
0.987
0.940
0.848
0.968
0.966
0.992
0.965
0.862
0.982
0.963
0.809
0.854
0.987
1.000
0.965
0.862
0.982
0.980
0.965
0.996
0.831
0.986
0.988
0.852
0.821
0.940
0.965
1.000
0.831
0.986
0.961
0.862
0.831
0.961
0.807
0.809
0.982
0.999
0.848
0.862
0.831
1.000
0.807
0.940
0.982
0.986
0.807
0.979
0.993
0.824
0.796
0.968
0.982
0.986
0.807
1.000
0.958
0.980
0.961
0.940
0.958
0.952
0.910
0.934
0.966
0.980
0.961
0.940
0.958
1.000
序号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 S11 S12 R
表 1 12 批杏香兔耳风 HPLC 指纹图谱相似度计算结果
2.8.2 共有图谱模式的建立 将 12 批次杏香兔耳风样
品的色谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系
统，经设参照谱，谱峰自动匹配，生成杏香兔耳风对照
谱，进行相似度计算。 12批次杏香兔耳风样品中 11个
共有峰保留时间的 RSD 均小于 1.35%，HPLC 色谱与
对照谱的相似度值均大于 0.910[11]。 12 批杏香兔耳风
HPLC指纹图谱相似度计算结果见表 1。
3 讨论
本实验优化了杏香兔耳风样品的提取条件，选择
70%乙醇超声提取 60 min 提取效率最高。 同时对色
谱条件进行考察，选择在 356 nm 条件下杏香兔耳风
中酚酸类和黄酮类成分均有较好的吸收，出峰数量
多，峰形对称性好，优选的梯度洗脱条件，组分峰分离
度好，有 15 个峰形清晰可辨，符合指纹图谱要求。 方
法具有良好的精密度、稳定性和重复性，操作简便易
行，能够用于杏香兔耳风指纹图谱的建立。
采用的中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A 版对不同批次的杏香兔耳风的 HPLC 指纹图
谱进行了相似度评价，其指纹图谱相互间较为吻合，
与对照谱的相似度值均大于 0.910，揭示了出杏香兔
耳风指纹图谱具有自身化学条码特征，但由于采集时
间和地点上存在差异，各批次的杏香兔耳风有效成分
的含量有一定的差别，但 11 个共有峰明显且分离度
较好，构成了杏香兔耳风的特征指纹图谱。 采用对照
589.39
294.69
0 6.67 13.34 20.00 26.67 33.34 40.01
R
S12
S11
S10
S9
S8
S7
S6
S5
S4
S3
S2
S1
R：对照指纹图谱；S1~S12：杏香兔耳风样品；2：绿原酸；11：木犀草素
图 3 杏香兔耳风 HPLC 指纹图谱
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（收稿日期：2014-01-17 本文编辑：任 念）
谱图辨别杏香兔耳风真伪，控制其内在质量，能提供
更全面的反映杏香兔耳风各化学成分特征 [12]。 然而，
要使杏香兔耳风指纹图谱准确地反映其个体有效成
分，还需进一步进行成分鉴别和谱效关系研究。
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（收稿日期：2014-01-24 本文编辑：卫 轲）
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