全 文 ：土槿皮乙酸通过Ｐ５３和ｃａｓｐａｓｅ蛋白抑制
人乳腺癌细胞 ＭＣＦ－７生长机制研究
田杰１，任配友２，李锐２，刘春禹３
（１．长春医学高等专科学校，吉林长春　１３００３１；２．吉林大学白求恩第一医院甲状腺外科，吉林长春　１３００００；
３．长春中医药大学附属医院针灸科，吉林长春　１３００００）
摘要：ＭＣＦ－７细胞是ｃａｓｐａｓｅ　３功能缺失的乳腺癌细胞，本研究结果发现土槿皮乙酸（ＰＡＢ）可激活ｃａｓｐａｓｅ　３的上游蛋白
ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９来诱导细胞凋亡，同时ＰＡＢ通过Ｐ５３蛋白诱导人乳腺癌细胞 ＭＣＦ－７凋亡。本试验结果为进一步阐明
ＰＡＢ抗乳腺癌奠定了基础。
关键词：土槿皮乙酸；Ｐ５３蛋白；ｃａｓｐａｓｅ　８；ｃａｓｐａｓｅ　９；ＭＣＦ－７细胞；凋亡
中图分类号：Ｑ３４４＋．１４　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）０５－０１５５－０３
收稿日期：２０１３－１１－０４
作者简介：田杰（１９６９—），女，吉林人，硕士，副教授，研究方向：
天然药物有效成分及作用机理。
通信作者：刘春禹（１９７８—），男，吉林人，硕士，研究方向：针灸学
和肿瘤分子药理学。Ｅ－ｍａｉｌ：５４４１２５０４８＠ｑｑ．ｃｏｍ
基金项目：吉林省中医药管理局（２０１２－０３０）。
　　土槿皮为松科植物金钱松的干燥根皮或近
根树皮，土槿皮乙酸（ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ，ＰＡＢ）是
从土槿皮中分离得到的新型二萜酸化合物。研
究结果表明ＰＡＢ具有抗真菌（Ｌｉ等，１９９５）、抗肿
瘤（Ｙｕ等，２００７；于静华等，２０１１）、抗血管生成
（Ｔａｎ等，２００４）、抗微管（Ｔｏｎｇ等，２００６）等药理作
用。本试验旨在研究 ＰＡＢ诱导人乳腺癌细胞
ＭＣＦ－７凋亡的模型中Ｐ５３蛋白和ｃａｓｐａｓｅ家族蛋
白的活化，以期为进一步探讨ＰＡＢ的抗肿瘤作用
机制提供依据。
１　材料与方法
１．１　材料
１．１．１　试剂　ＰＡＢ购于中国药品生物制品检定
所，应用时用二甲基亚砜（ＤＭＳＯ）溶解，并使ＤＭ－
ＳＯ的终浓度低于０．１％；ＤＭＳＯ 和 Ｐ５３抑制剂
（ｐｉｆｉｔｈｒｉｎ）均购自Ｓｉｇｍａ公司；ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ
９抑制剂均购自Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ公司；ＲＰＭＩ　１６４０培养
基购自Ｇｉｂｃｏ公司；胎牛血清购自北京元亨圣马生
物试剂公司；Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ　８、ｃａｓｐａｓｅ　９、ｔｕｂｕｌｉｎ抗体
及辣根过氧化物酶标记的二抗均购自Ｓａｎｔａ　Ｃｒｕｚ
公司。
１．１．２　细胞　ＭＣＦ－７细胞购自 Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｔｙｐｅ
Ｃｕｌｔｕｒｅ　Ｃｏｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）。
１．２　方法
１．２．１　细胞培养及 ＭＴＴ分析抑制率　ＭＣＦ－７细
胞单层接种在含１０％胎牛血清、２０ｇ／Ｌ谷氨酰胺的
ＲＰＭＩ　１６４０培养液中，在３７℃、５％二氧化碳培养
箱中培养。取处于对数生长期的 ＭＣＦ－７细胞接种
于９６孔培养板中，１×１０４／孔，１００μＬ／孔，培养１２ｈ
后，加入１．２５、２．５、１０μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ分别作用１２、
２４、３６、４８ｈ后测定其抑制率。每个浓度设３个平
行孔，于３７ ℃、５％二氧化碳培养箱中继续培养
３６ｈ，每孔加入５ｇ／Ｌ　ＭＴＴ　２０μＬ，继续培养３ｈ
后，加入１５０μＬ　ＤＭＳＯ溶解，于酶标仪４９２ｎｍ处
检测，计算药物的体外生长抑制率。
１．２．２　形态学观察　以每孔１×１０５ 个细胞接种于
６孔板中，培养１２ｈ后，６孔分别加入空白培养液、
４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ、１μｍｏｌ／Ｌ　Ｐ５３抑制剂、１μｍｏｌ／Ｌ
Ｐ５３抑制剂＋４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ、２０μｍｏｌ／Ｌ　ｃａｓｐａｓｅ　８
抑制剂、２０μｍｏｌ／Ｌ　ｃａｓｐａｓｅ　８抑制剂＋４μｍｏｌ／Ｌ
ＰＡＢ、２０μｍｏｌ／Ｌ　ｃａｓｐａｓｅ　９ 抑制剂、２０μｍｏｌ／Ｌ
ｃａｓｐａｓｅ　９抑制剂＋４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ，作用３６ｈ后，用
倒置光学显微镜观察并记录形态学变化。
１．２．３　Ｗｅｓｔｅｒｎ　ｂｌｏｔｔｉｎｇ分析蛋白表达　收集５×
１０６ 个以上细胞，３０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ，ＰＢＳ洗２
次，８０μＬ 细胞裂解液（５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＨＥＰＥＳ、１％
Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００、１００ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＦ、１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤ－
ＴＡ、１ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＧＴＡ、２ ｍｍｏｌ／Ｌ 正 钒 酸 钠、
１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＭＳＦ、１０ｇ／Ｌ　ｐｅｐｓｔａｔｉｎ　Ａ）于冰上裂解
１ｈ，１００００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，收集上清。加入２０μＬ
５×上样缓冲液（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－ＨＣｌ（ｐＨ　６．８），
１００ｇ／Ｌ　ＳＤＳ，５０％甘油，５ｇ／Ｌ溴酚兰，５％二巯基
乙醇），沸水中煮３ｍｉｎ，使蛋白变性。每个点样孔
·５５１·中国畜牧兽医 　２０１４年第４１卷第５期 生理生化
加２０μＬ样品液；１２％ ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶分离
蛋白；凝胶上的蛋白带转移到硝酸纤维素膜上；封
闭液封闭膜上的蛋白结合位点２ｈ；加入抗Ｐ５３、
ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９的抗体（一抗）及辣根过氧化
物酶标记的二抗；显色。
１．２．４　数据分析　所有试验结果均得自３次独立
试验，数据以平均值±标准差表示。
２　结果与分析
２．１　ＰＡＢ对 ＭＣＦ－７细胞增殖的影响　１．２５、２．５
和１０μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ分别作用１２、２４、３６、４８ｈ后，其
抑制率结果见图１。由图１可知，１２ｈ不同浓度
ＰＡＢ的作用效果并不是很明显，但从２４ｈ开始，
ＰＡＢ的抑制率明显增加，并呈时间剂量依赖性。
图１　ＰＡＢ抑制 ＭＣＦ－７细胞增殖
　
２．２　Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９抑制剂对ＰＡＢ诱
导的细胞凋亡的影响　４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用３６ｈ，
细胞浮起变圆，凋亡小体出现。但加入Ｐ５３抑制剂
及ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９抑制剂后，浮起变圆细胞
数目减少（图２）。结果表明ＰＡＢ激活Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ
８和ｃａｓｐａｓｅ　９蛋白以诱导细胞凋亡。
图２　Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９对ＰＡＢ诱导的细胞凋亡的影响
注：①Ａ，空白对照；Ｂ，ＰＡＢ；Ｃ，Ｐ５３抑制剂；Ｄ，ＰＡＢ＋Ｐ５３抑制剂；Ｅ，ｃａｓｐａｓｅ　８抑制剂；Ｆ，ＰＡＢ＋ｃａｓｐａｓｅ　８抑制剂；Ｇ，ｃａｓｐａｓｅ　９抑制剂；
Ｈ，ＰＡＢ＋ｃａｓｐａｓｅ　９抑制剂。②箭头表示凋亡小体。
　
２．３　ＰＡＢ对Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９蛋白表达
的调节作用　４μｍｏｌ／Ｌ　ＰＡＢ作用不同时间点后，
细胞内Ｐ５３蛋白的表达逐渐增加，在３６ｈ时细胞内
Ｐ５３蛋白表达最高，而细胞内ｃａｓｐａｓｅ　８的前体
（ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ　８）和ｃａｓｐａｓｅ　９的前体（ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ　９）
的表达逐渐减少（图３），结果表明其被裂解为活性
形式。
·６５１· 生理生化 中国畜牧兽医 　２０１４年第４１卷第５期
图３　ＰＡＢ对Ｐ５３、ｃａｓｐａｓｅ　８及ｃａｓｐａｓｅ　９蛋白的调节
　
３　讨论
ＰＡＢ诱导多种肿瘤细胞凋亡，其作用机制涉及
到死亡受体途径、线粒体途径及有丝分裂原活化的
蛋白激酶（ｍｉｔｏｇｅｎ－ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ）途径。
但 ＭＣＦ－７细胞是ｃａｓｐａｓｅ　３功能缺失的细胞（Ｙｕ
等，２００７），而ｃａｓｐａｓｅ　３是凋亡的执行蛋白，主要促
进ＤＮＡ的剪切及ＤＮＡ片段化，研究结果发现没有
ｃａｓｐａｓｅ　３的活化细胞不易凋亡（Ｆｕ等，２０１３）。在
本研究中ＰＡＢ时间剂量依赖的抑制 ＭＣＦ－７细胞生
长，表明其对ｃａｓｐａｓｅ　３缺失的乳腺癌细胞具有抗肿
瘤效 果。ｃａｓｐａｓｅ 的 前 体 ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ 被 剪 切 为
ｃａｓｐａｓｅ后执行功 能，ｃａｓｐａｓｅ　３ 的 上 游 蛋 白 是
ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９，ｃａｓｐａｓｅ　８参与死亡受体途
径，而ｃａｓｐａｓｅ　９参与线粒体途径（Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎ等，
１９９５；Ｗａｊａｎｔ，２００２；Ｎａｇａｔａ等，１９９５），不同的应激
诱导不同通路的激活。尽管前期研究已确定ＰＡＢ
诱导细胞凋亡，但ＰＡＢ作用后，其上游蛋白ｃａｓｐａｓｅ
８和ｃａｓｐａｓｅ　９是否活化仍未知。本研究结果发现
ＰＡＢ作用１２ｈ后，细胞内 ｐｒｏｃａｓｐａｓｅ　８和 ｐｒｏ－
ｃａｓｐａｓｅ　９表达降低，表明其前体在ＰＡＢ作用后被
剪切为活性的ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９，证明ｃａｓｐａｓｅ
８和ｃａｓｐａｓｅ　９参与细胞凋亡，即线粒体途径和死亡
受体途径均参与ＰＡＢ诱导的细胞凋亡。但ｃａｓｐａｓｅ
８和ｃａｓｐａｓｅ　９下游蛋白ｃａｓｐａｓｅ　３在ＭＣＦ－７细胞中
是缺失的，说明ｃａｓｐａｓｅ　８和ｃａｓｐａｓｅ　９可能绕过
ｃａｓｐａｓｅ　３直接执行凋亡功能，或通过其他蛋白诱导
细胞凋亡，这需进一步的试验验证。Ｐ５３是细胞内
的主要蛋白，其参与多种细胞功能，如凋亡和细胞周
期阻滞等（Ｃａｒｏｌｉｎｅ等，１９９８；Ｍａｙ等，１９９９）。Ｐ５３
抑癌基因在许多肿瘤细胞中已确实，本研究结果发
现 ＭＣＦ－７细胞中有Ｐ５３蛋白的表达，抑制Ｐ５３蛋
白后，细胞凋亡减少，而Ｐ５３蛋白在ＰＡＢ作用后表
达上调，表明Ｐ５３参与细胞凋亡。本研究结果为进
一步探讨ＰＡＢ抗肿瘤机制奠定基础，证明在没有
ｃａｓｐａｓｅ　３的人乳腺癌细胞中上游蛋白可被活化的
事实，这为开发抗乳腺癌药物奠定基础。
参 考 文 献
１　于静华，张亚宏，刘春禹，等．土槿皮乙酸Ｂ增加活性氧水平诱导
人乳腺癌 ＭＣＦ－７细胞凋亡和衰老的研究［Ｊ］．中国畜牧兽医，
２０１１，３８（７）：６３～６５．
２　Ｃａｒｏｌｉｎｅ　Ｃ　Ｒ，Ｐｈｉｌｉｐｐｅ　Ｒ，Ｅｌｉｓｈｅｖａ　Ｙ　Ｒ．Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ　ｏｆ　ｐ５３－ｉｎ－
ｄｕｃｅｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：Ｉｎ　ｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ｇｅｎｅｓ　ｗｈｉｃｈ　ａｒｅ　ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　ｄｕｒｉｎｇ
ｐ５３－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｃｅｌ　ｄｅａｔｈ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｌ　Ｌｅｔｔ，１９９８（１０２～１０３）：
４９１～４９６．
３　Ｃｈｉｎｎａｉｙａｎ　Ａ　Ｍ，Ｏ’Ｒｏｕｒｋｅ　Ｋ，Ｔｅｗａｒｉ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．ＦＡＤＤ，ａ　ｎｏ－
ｖｅｌ　ｄｅａｔｈ　ｄｏｍａｉｎ－ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｎｔｅｒａｃｔｓ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｄｅａｔｈ　ｄｏ－
ｍａｉｎ　ｏｆ　Ｆａｓ　ａｎｄ　ｉｎｉｔｉａｔｅｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ［Ｊ］．Ｃｅｌ，１９９５，８１（４）：５０５～
５１２．
４　Ｆｕ　Ｑ，Ｄｕａｎ　Ｘ，Ｙａｎ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｂｉｏｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｃｅ　ｉｍａｇｉｎｇ　ｏｆ
ｃａｓｐａｓｅ－３ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｌｉｖｅｒ［Ｊ］．Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ，２０１３，１８（８）：
９９８～１００７．
５　Ｌｉ　Ｅ，Ｃｌａｒｋ　Ａ　Ｍ，Ｈｕｆｆｏｒｄ　Ｃ　Ｄ．Ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ　ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄ－
ｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ，ａ　ｍａｊｏｒ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ｋａｅｍｐｆｅｒｉ［Ｊ］．Ｊ
Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，１９９５，５８（１）：５７～６７．
６　Ｍａｙ　Ｐ，Ｍａｙ　Ｅ．Ｔｗｅｎｔｙ　ｙｅａｒｓ　ｏｆ　ｐ５３ｒｅｓｅａｒｃｈ：Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ａｎｄ
ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ａｓｐｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎ［Ｊ］．Ｏｎｃｏｇｅｎｅ，１９９９，
１８（５３）：７６２１～７６３６．
７　Ｎａｇａｔａ　Ｓ，Ｇｏｌｓｔｅｉｎ　Ｐ．Ｔｈｅ　Ｆａｓ　ｄｅａｔｈ　ｆａｃｔｏｒ［Ｊ］．Ｓｃｉｅｎｃｅ，１９９５，
２６７（５２０３）：１４４９～１４５６．
８　Ｔａｎ　Ｗ　Ｆ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｗ，Ｌｉ　Ｍ　Ｈ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｉｎｈｉｂｉｔｓ
ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ａｎｔａｇｏｎｉｚｉｎｇ　ｔｈｅ　ｖａｓｃｕｌａｒ　ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ　ｇｒｏｗｔｈ　ｆａｃ－
ｔｏｒ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ａｎｔｉ－ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔ［Ｊ］．Ｅｕｒ　Ｊ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００４，
４９９（３）：２１９～２２８．
９　Ｔｏｎｇ　Ｙ　Ｇ，Ｚｈａｎｇ　Ｘ　Ｗ，Ｇｅｎｇ　Ｍ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｘ　ａｃｉｄ　Ｂ，ａ
ｎｅｗ　ｔｕｂｕｌｉｎ－ｂｉｎｄｉｎｇ　ａｇｅｎｔ，ｉｎｈｉｂｉｔｓ　ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ　ｂｙ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇ
ｗｉｔｈ　ａ　ｎｏｖｅｌ　ｂｉｎｄｉｎｇ　ｓｉｔｅ　ｏｎ　ｔｕｂｕｌｉｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，２００６，
６９（４）：１２２６～１２３３．
１０ Ｗａｊａｎｔ　Ｈ．Ｔｈｅ　Ｆａｓ　ｓｉｇｎａｌｉｎｇ　ｐａｔｈｗａｙ：Ｍｏｒｅ　ｔｈａｎ　ａ　ｐａｒａｄｉｇｍ［Ｊ］．
Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００２，２９６（５５７３）：１６３５～１６３６．
１１Ｙｕ　Ｊ　Ｈ，Ｃｕｉ　Ｑ，Ｊｉａｎｇ　Ｙ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ　ｉｎｄｕｃｅｓ　ａｐ－
ｏｐｔｏｓｉｓ，ｓｅｎｅｓｃｅｎｃｅ，ａｎｄ　ｍｉｔｏｔｉｃ　ａｒｒｅｓｔ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ
ＭＣＦ－７［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌ　Ｓｉｎ，２００７，２８（１２）：１９７５～１９８３．
·７５１·中国畜牧兽医 　２０１４年第４１卷第５期 生理生化
牛乳蛋白合成的分子调控机制
林忠荔１，２，江明锋１，２，任洪辉１，２
（１．西南民族大学青藏高原研究院，四川成都　６１００４１；
２．动物遗传育种学国家民委—教育部重点实验室，四川成都　６１００４１）
摘要：乳蛋白是乳汁的主要成分之一，具有极高的营养价值，含有人体所需的必需氨基酸。作者主要介绍了乳蛋白合成
的相关通路：氨基酸转运系统（ａｍｉｎｏ　ａｃｉｄ　ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｓｙｓｔｅｍ）、蛋白酪氨酸激酶－２信号转导子和转录激活子－５（Ｊａｎｕｓ　ｔｙｒｏｓｉｎｅ　ｋｉ－
ｎａｓｅ　２－ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　５，Ｊａｋ２－Ｓｔａｔ５）信号转导途径和雷帕霉素靶蛋白（ｍａｍｍａｌｉａｎ　ｔａｒｇｅｔ　ｏｆ　ｒａ－
ｐａｍｙｃｉｎ，ｍＴＯＲ）信号通路的调控。氨基酸转运系统为乳蛋白形成提供前体原料，信号转导子和转录激活因子（ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓ－
ｄｕｃｅｒ　ａｎｄ　ａｃｔｉｖａｔｏｒ　ｏｆ　ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ，Ｓｔａｔ）家族是调控乳蛋白表达的信号传导因子，特别是Ｓｔａｔ５对于乳蛋白的合成有重要作
用，而ｍＴＯＲ信号通路整合了催乳素、胰岛素等激素及ＥＩＦ４Ｅ、ＡＫＴ等细胞因子来调控蛋白相关基因的表达，此外还涉及乳
蛋白合成，对于提高乳汁营养价值具有重要意义。
关键词：氨基酸；信号转导子和转录激活因子（Ｓｔａｔ）家族；雷帕霉素靶蛋白（ｍＴＯＲ）；胰岛素；乳蛋白
中图分类号：Ｑ５１　　　　　文献标识码：Ａ　　　　　文章编号：１６７１－７２３６（２０１４）０５－０１５８－０５
　　乳汁是乳腺的分泌物，乳腺是哺乳动物的泌乳
器官。目前，对乳腺的研究主要集中在人、鼠、牛等
物种上。人类乳腺研究主要集中在乳腺癌领域
（Ｌａｈｌｏｕ等，２００７；Ｓｈａｋｙａ等，２００８；Ａｙｙａｎａｎ等，
２００６），鼠类则偏向于泌乳机制的解析（Ｈｒｔｉｇ等，
收稿日期：２０１３－１１－１２
作者简介：林忠荔（１９８９—），女，四川人，硕士生，研究方向：遗
传学。
通信作者：江明锋（１９７１—），男，四川人，教授，博士，主要从事高
原生物生理基因组学及优质基因的开发利用研究。
Ｅ－ｍａｉｌ：ｍｉｎｇｆｅｎｇｊｉａｎｇ＠ｖｉｐ．ｓｉｎａ．ｃｏｍ
基金项目：自然科学基金（３１１７２１９８）；教育部科学技术研究重点
项目（２１０２６４）；２０１１年度留学人员科技活动项目择
优资助项目；西南民族大学研究生“创新型科研项目”
（ＣＸ２０１４ＳＺ１１９）。
１９９３；Ｃｈｉｌｕｉｚａ等，２０１１），而对牛乳腺的研究则侧重
于乳汁中乳脂、乳蛋白和乳糖的营养价值及其调控
机制的阐释（Ｖｏｌｐｅ等，２０１０；Ｂｉｏｎａｚ等，２００８），作者
主要以牛为例阐明乳蛋白合成及相关基因表达调控
机制。牛通过乳腺上皮细胞分泌牛奶，牛奶富含丰
富的营养，是人们生活中摄取营养物质的重要食品。
在哺乳动物的乳汁中主要含有脂质、蛋白质、非蛋白
含氮化合物、糖类、无机物质、维生素、酶类、激素和
生长因子等（汪玉松等，１９９５），其中，最有营养价值
的是乳糖、乳脂和乳蛋白。乳糖能为人体的生理活
动提供大量的能量，促进肠道的吸收，乳脂中含有多
种脂肪酸，是乳中最重要的能量物质。乳蛋白的营
养价值则体现在满足机体生长和维持日常生命活动
的需要。
櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅櫅
牛乳蛋白几乎含有人体所需要的全部必需
Ｓｔｕｄｙ　ｏｎ　Ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　Ａｃｉｄ　Ｂ　Ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　Ｃｅｌ　Ｇｒｏｗｔｈ　ｔｈｒｏｕｇｈ　Ｐ５３，
Ｃａｓｐａｓｅ　８ａｎｄ　Ｃａｓｐａｓｅ　９ｉｎ　ＭＣＦ－７Ｃｅｌｓ
ＴＩＡＮ　Ｊｉｅ１，ＲＥＮ　Ｐｅｉ－ｙｏｕ２，ＬＩ　Ｒｕｉ　２，ＬＩＵ　Ｃｈｕｎ－ｙｕ３
（１．Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｅｇｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００３１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｈｙｒｏｉｄ　Ｓｕｒｇｅｒｙ，
ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，Ｃｈｉｎａ；３．Ａｃｕｐｕｎｔｕｒｅ　Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ，
ｔｈｅ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｔｏ　Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ　１３００００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ａｓｓａｙ　ｗａｓ　ａｉｍｅｄ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ（ＰＡＢ）ｉｎ　ＭＣＦ－７ｃｅｌ　ｌｉｎｅ．ＭＣＦ－７
ｃｅｌ　ｗａｓ　ｈｕｍａｎ　ｂｒｅａｓｔ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　ｌａｃｋｉｎｇ　ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅ　３ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｉｎ　ｔｈｉｓ　ｓｔｕｄｙ，ｉｔ　ｗａｓ　ｆｏｕｎｄ　ｔｈａｔ　ＰＡＢ　ａｃｔｉｖａｔｅｄ　ｃａｓｐａｓｅ　８ａｎｄ
ｃａｓｐａｓｅ　９ｔｏ　ｉｎｄｕｃｅ　ｃｅｌ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ　ＰＡＢ　ｕｐ－ｒｅｇｕｌａｔｅｄ　Ｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｔｈｅｒｅｆｏｒｅ　ＰＡＢ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ＭＣＦ－７ｃｅｌ
ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｔｈｒｏｕｇｈ　ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ　Ｐ５３ｐｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｃａｓｐａｓｅ　８ａｎｄ　ｃａｓｐａｓｅ　９．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ｐｓｅｕｄｏｌａｒｉｃ　ａｃｉｄ　Ｂ；Ｐ５３；ｃａｓｐａｓｅ　８；ｃａｓｐａｓｅ　９；ＭＣＦ－７ｃｅｌ；ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
·８５１· 生理生化 中国畜牧兽医 　２０１４年第４１卷第５期