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九头狮子草醇提物药效学的实验研究



全 文 :九头狮子草醇提物药效学的实验研究
覃容贵 1 ,罗忠圣 2
(1.贵阳医学院药学院药用植物学与生药学教研室 ,贵州贵阳 550004;2.贵阳新天制药有限公司药物研究
所 ,贵州贵阳 550018)
  摘要 目的:研究九头狮子草的解热 、抗菌 、镇咳 、祛痰 、抗炎作用 , 为临床应用提供科学依据。方法:复制大鼠
酵母人工发热模型 , 测量大鼠体温变化;采用试管稀释法 , 测定各敏感细菌的最低抑菌浓度(MIC);采用氨水引咳
试验 、二氧化硫引咳试验观察其镇咳作用;采用呼吸道酚红排泄试验观察其祛痰作用;采用二甲苯诱发的鼠耳肿胀
试验观察其抗炎作用。结果:九头狮子草有明显的解热作用;对金黄色葡萄球菌抑制作用最强 , 对溶血性链球菌 、
绿脓杆菌次之 , 对肺炎克雷伯氏菌较弱;可延长浓氨水 、二氧化硫诱发的小鼠咳嗽潜伏期 , 减少咳嗽次数。可使小
鼠气管酚红排泌量增加 ,可抑制二甲苯诱发的炎症反应。结论:九头狮子草有较好的解热 、抗菌 、镇咳 、祛痰 、抗炎
作用。
关键词 九头狮子草;解热作用;抗菌作用;止咳化痰;抗炎作用
中图分类号:R285.5  文献标识码:A  文章编号:1001-4454(2006)09-0961-03
作者简介:覃容贵(1970-),女,讲师 ,在读博士生 ,主要从事中药药理学研究。
  九头狮子草为爵床科植物九头狮子草 Peristro-
phejaponica(Thunb.)Bremek.的干燥全草 ,分布于
江苏 、浙江 、福建 、湖南 、江西 、贵州 、四川等地 ,在民
间广为栽培 。其性味辛 、凉 ,功用主治为祛风 、清热 、
化痰 、解毒 ,用于治疗风热咳嗽 、小儿惊风 、喉痛 、疔
毒 、乳痈。与其它药物配伍使用 ,治疗肺热咳嗽 、虚
热咳嗽 、小儿吐奶并泄青 、男子尿结 、咽喉肿痛 、痔
疮 、蛇咬伤 、黑疱疔 、妇女白带 、经漏 〔1〕。九头狮子
草长期以来在贵州省布依族民间广为应用 ,主要用
来治疗小儿高热 、小儿惊风(一种因儿童高热引起
的惊厥 、抽搐症状)等 ,因此民间又称其为尖惊药 、
惊药 ,尤以治疗临床原因不明 、其它药物无效的高热
效果特佳。但有关九头狮子草的药效学研究未见报
道 。鉴于本药有较好的民间运用基础 ,本实验选用
大鼠酵母人工发热模型 ,观察九头狮子草解热效应;
采用试管稀释法 ,观察其抗菌作用;利用经典的咳
嗽 、炎症模型 ,对其镇咳 、祛痰 、抗炎作用进行研究 ,
以期明确其药理作用 ,为临床中医药治疗发热性疾
病 、开发新药源提供实验依据。
1  材料
1.1  药材及提取物制备 九头狮子草 P.japonica
(Thunb.)Bremek.于 2004年 6月采自贵州省贵阳
市郊 ,经贵阳医学院药学院生药教研室龙庆德副教
授鉴定 ,药材标本保留于贵阳医学院药学院中药标
本室。九头狮子草用 70%乙醇回流提取 4 h,减压
浓缩 ,挥干乙醇 ,用蒸馏水配成 1 g/ml(含生药量)
的药液 ,按需稀释 。
1.2  主要试剂 高活性酵母 ,贵阳食品厂产品;营
养肉汤粉 ,购自上海医学化验所试剂厂 。
1.3 主要仪器 隔水式电热恒温培养箱(上海市
跃进医疗器械一厂);BH-2 OLYMPUS显微镜;经校
正的肛温表。
1.4 动物 SD大鼠 ,雄性 ,体重 230 ~ 250 g;昆明
种小鼠 ,雌雄各半 ,体重 18 ~ 22 g,均由贵阳医学院
实验动物中心提供 。
2 方法与结果
2.1 解热实验 参考文献方法 〔2〕 ,取雄性 SD大
鼠 ,体重 230 ~ 250 g。经肛温测量 ,选肛温在 38.1
~ 39.2℃的大鼠 50只 ,随机分为 5组:空白对照组 ,
模型组 ,九头狮子草低 、高剂量组(5.0、 10 g/kg)。
以 20%酵母混悬液(10 ml/kg)皮下注射 ,注射酵母
4h后按 10 ml/kg灌胃给药 ,连续 2次(间隔 1 h)。
注射酵母混合液后 ,第 3、4、5、6、7 h各测体温 1次。
实验室温度控制在 20±2℃,大鼠自由饮水与进食。
结果见表 1。结果表明 ,四组动物实验前体温均在
正常范围内 ,各组之间差异无显著性(P>0.05)。
大鼠用酵母致热 4 h后 ,模型组体温大幅度升高。
给药组体温有所上升 ,但幅度较小 ,与模型组相比 ,
有极显著性差异(P<0.01)。
2.2 抗菌实验
2.2.1 不同浓度含药培养基的制备:取 10支试
管 ,编号 ,每支试管加 2倍浓缩肉汤 2 ml,吸取 2 ml
九头狮子草醇提液(1 g/ml)加入第 1支试管 ,混匀
后依次对倍稀释至第 7支试管 ,制成含药液体培养
基 ,使药物浓度依次分别为 0.5 g/ml、0.25 g/ml、
0.125g/ml、0.0625g/ml、0.0312g/ml、0.0156g/
·961·中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2006.09.032
  表 1  九头狮子草对发热大鼠体温的影响( x±s)
组别 剂量(g/kg) 基础体温(℃)
发热体温(℃)
3h 4 h 5 h 6h 7h
空白对照组 等容积蒸馏水 38.2±0.37 38.3±0.28 38.3±0.32 38.2±0.37 38.2±0.46 38.2±0.39
模型组 等容积蒸馏水 38.1±0.15 38.3±0.34 38.6±0.35 39.3±0.22■■ 39.4±0.30■■ 39.2±0.35■■
低剂量组 5.0 38.3±0.44 38.4±0.23 38.4±0.54 38.6±0.44** 39.0±0.35** 38.9±0.38*
高剂量组 10 38.3±0.15 38.3±0.18 38.4±0.28 38.6±0.34** 38.8±0.24** 38.8±0.33*
  注:与空白对照组比较 , ■■P<0.01;与模型组比较 , *P<0.05 , **P<0.01
ml、0.0078g/ml。 10支试管加棉塞后 ,高压蒸汽灭
菌 20min。
2.2.2 菌液的制备 〔3〕:0.5麦氏比浊标准各菌液 ,
用营养肉汤 1 /10稀释(含菌量约为 107CFU/ml)。
2.2.3 接种:用微量移液器取 100 μl菌液依次由
低浓度至高浓度分别加入 7支含药培养基试管中
(最终接种菌量约为 5×105CFU/ml),其余三支试
管分别作有药无菌 、有菌无药 、西药阳性对照(以青
霉素或庆大霉素作阳性对照)。
2.2.4 培养与检查:置温箱 37℃孵育过夜 ,用接
种环分别取管底菌液涂片 ,细胞壁染色 ,镜检。细菌
不生长的最低浓度即为九头狮子草对该菌的最低抑
菌浓度(MIC)。每种敏感细菌为 1组 ,共做 4组 。
结果见表 2。
 表 2  九头狮子草的抗菌作用
菌株 MIC(g/L) 药物稀释度
金黄色葡萄球菌 31.2 1∶32
溶血性链球菌 62.5 1∶16
绿脓杆菌 62.5 1∶16
肺炎克雷伯氏菌 500 1∶2
  结果表明 ,九头狮子草对金黄色葡萄球菌作用
最强 ,对溶血性链球菌 、绿脓杆菌次之 ,对肺炎克雷
伯氏菌较弱 。
2.3  镇咳实验
2.3.1 氨水引咳试验 〔4〕:按小鼠氨水引咳法 。选
给药前小鼠咳嗽潜伏期在 15 s以上 、咳嗽次数在 15
次以上的小鼠作正式实验用。将筛选过的昆明种小
鼠 50只 ,雌雄各半 ,随机分组 ,禁食 6 h后 ,实验组
分别灌胃给予九头狮子草提取物 5、10、20 g/kg;阳
性对照组灌胃给予咳必清 50 mg/kg,对照组灌胃给
予等容量的蒸馏水 。每日 1次 ,连续 3天 。末次给
药或蒸馏水 1.5h后 ,接受浓氨水喷雾 10 s,喷雾结
束后 ,取出小鼠观察出现咳嗽反应的时间和次数 。
记录各鼠咳嗽潜伏期及 2 min内咳嗽次数。结果见
表 3。
 表 3     九头狮子草对浓氨水引发小鼠
咳嗽的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 咳嗽潜伏期(秒) 咳嗽次数(次)
阴性对照组 - 25.6±6.74 37.8±4.32
阳性对照组 0.05 39.6±6.25 12.3±5.66
九头狮子草小剂量组 5 32.8±5.42** 17.8±6.54**
九头狮子草中剂量组 10 37.3±4.21** 15.3±4.33**
九头狮子草高剂量组 20 40.2±3.63** 11.7±2.69**
  注:与阴性对照组比较 , **P<0.01,下表皆同。
  结果表明 ,九头狮子草可延长浓氨水诱发的小
鼠咳嗽潜伏期 ,减少咳嗽次数 。和阴性对照组相比 ,
统计学有显著性差异 ,证明九头狮子草对浓氨水诱
发的小鼠咳嗽有止咳作用 。和阳性对照组相比 ,统
计学无显著性差异 ,表明九头狮子草止咳作用与阳
性药相近 。
2.3.2  二氧化硫引咳试验 〔4〕:将筛选过的昆明种
小鼠 50只 ,雌雄各半 ,随机分组 ,禁食 6 h后 ,实验
组分别灌胃给予九头狮子草提取物 5、10、20、g/kg;
阳性对照组灌胃给予可待因 20 mg/kg,对照组灌胃
给予等容量的蒸馏水。每日 1次 ,连续 3天。末次
给药 1 h后 ,将小鼠放入二氧化硫气体制备及引咳
装置中 ,观察并记录小鼠的咳嗽潜伏期及 2 min内
咳嗽次数 。结果见表 4。
 表 4      九头狮子草对二氧化硫引发小鼠
咳嗽的的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 咳嗽潜伏期(秒) 咳嗽次数(次)
阴性对照组 - 19.2±8.7 44.7±9.7
可待因组 0.02 43.2±12.3 21.2±10.1
九头狮子草小剂量组 5 32.8±7.9** 39.1±16.5
九头狮子草中剂量组 10 36.9±14.0** 31.2±13.3**
九头狮子草高剂量组 20 41.4±11.7** 25.6±15.4**
  结果表明 ,九头狮子草可延长二氧化硫诱发的
小鼠咳嗽潜伏期 ,减少咳嗽次数 。和阴性对照组相
比 ,统计学有显著性差异 ,证明九头狮子草对二氧化
硫诱发的小鼠咳嗽有止咳作用 。和阳性对照组相
比 ,统计学无显著性差异 ,表明九头狮子草止咳作用
与阳性药相近 。
·962· 中药材第 29卷第 9期 2006年 9月
2.4  呼吸道酚红排泄试验 〔4〕 将昆明种小鼠 50
只 ,雌雄各半 ,随机分组 ,实验组分别灌胃给予九头
狮子草提取物 5、10、20 g/kg;阳性对照组灌胃给予
氯化铵 1 g/kg,对照组灌胃给予等容量的蒸馏水 。
每日 1次 ,连续 3天。末次给药或蒸馏水 1.5 h后 ,
每鼠腹腔注射 5%酚红 10 ml/kg, 30 min后脱颈椎
处死小鼠 ,剥离气管周围组织 ,剪下自甲状软骨至气
管分叉处的一段气管 ,置 3ml生理盐水中漂洗 1 h,
取出气管段 ,加入 1 mol/LNaOH0.1 ml,在分光光
度计上测定 546 nm处的 OD值。与酚红标准曲线
比较 ,折算酚红量 。结果见表 5。
 表 5     九头狮子草对小鼠气管酚红排
泌量的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 酚红排泌量(μg/ml)
阴性对照组 - 1.67±0.57
阳性对照组 1 5.34±2.24
九头狮子草小剂量组 5 2.01±0.77
九头狮子草中剂量组 10 3.21±0.98**
九头狮子草高剂量组 20 4.35±1.32**
  结果表明 ,九头狮子草中 、高剂量可使小鼠气管
酚红排泌量增加 ,和阴性对照组相比 ,统计学有显著
性差异 ,证明九头狮子草有促进气管分泌对小鼠有
化痰作用。和阳性对照组相比 ,统计学无显著性差
异 ,表明九头狮子草化痰作用与阳性药相近。
2.5  鼠耳肿胀试验〔5〕 将昆明种小鼠 50只 ,雌雄
各半 ,随机分组 ,实验组分别灌胃给予九头狮子草提
取物 5、10、20 g/kg;阳性对照组灌胃给予阿斯匹林
蒸馏水溶液 0.5 g/kg,对照组灌胃给予等容量的蒸
馏水。每日 1次 , 连续 5天。末次给药或蒸馏水
1.5h后 ,在每只小鼠的右耳内外两侧均匀涂布 2%
二甲苯 0.1ml,左耳作空白对照。 4h后脱颈椎处死
小鼠。以直径 9mm的打孔器分别在左右耳同一部
位打下圆耳片 ,并称重。以每只小鼠(右耳片重 -左
耳片重)/左耳片重即为肿胀率 。结果见表 6。
结果表明 ,九头狮子草可抑制二甲苯诱发的炎
症反应 ,使肿胀率减小 。和阴性对照组相比 ,统计学
有显著性差异 ,证明九头狮子草有抗炎作用。九头
狮子草高剂量组和阳性对照组相比 ,统计学无显著
性差异 ,表明九头狮子草抗炎作用与阳性药相近 。
 表 6 九头狮子草对小鼠耳廓肿胀的影响( x±s, n=10)
组别 剂量(g/kg) 肿胀率
阴性对照组 - 1.76±0.45
阳性对照组 0.5 1.01±0.52
九头狮子草小剂量组 5 1.32±0.24**
九头狮子草中剂量组 10 1.21±0.47**
九头狮子草高剂量组 20 1.07±0.36**
3 讨论
实验结果表明 ,九头狮子草可显著降低发热大
鼠的体温;对金黄色葡萄球菌 、溶血性链球菌 、铜绿
假单胞菌 、肺炎克雷伯菌等有显著抑制杀灭作用;可
延长浓氨水 、二氧化硫诱发的小鼠咳嗽潜伏期 ,减少
咳嗽次数 ,可使小鼠气管酚红排泌量增加 ,可抑制二
甲苯诱发的炎症反应。实验结果提示九头狮子草有
较好的解热 、抗菌 、镇咳 、祛痰 、抗炎作用。此外 ,该
药还有增强机体免疫功能的作用 〔6〕 ,此为西药解热
药所不具备的特点 ,因而具有推广使用的价值 ,是一
极具开发价值的民族药 。本实验为九头狮子草的临
床用药提供了理论依据 。
参 考 文 献
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行所 , 1986:48-49.
[ 2] 邓文龙 , 等.银翘散的药理作用研究.中医杂志 , 1986,
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(2006-02-15收稿)
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·963·中药材第 29卷第 9期 2006年 9月