全 文 ：*【基金项目】湖北省教育厅科学技术研究项目（Ｂ2015112）
【收稿日期】2015－09－14【修回日期】2016－01－22
△【通讯作者】Ｔｅｌ：15571851801；Ｅ－ｍａｉｌ：625958220＠ ｑｑ． ｃｏｍ
头顶一颗珠提取液对实验性糖尿病大鼠心肌损伤的干预作用*
王凤杰1，3，王科坤2△，陈显兵3，刘锦红4，高 嵩4，刘 昕4
（1． 湖北民族学院科技学院，恩施 445000；2． 恩施州疾控中心，湖北 恩施 445000；3． 湖北民族学院医学院，恩施 445000；
4． 附属民大医院，湖北 恩施 445000）
【摘要】 目的：探讨头顶一颗珠提取液（ＴＴＭ）对糖尿病大鼠心肌损伤的干预作用及机制，为进一步研究头顶一颗
珠的药理作用提供理论基础。方法：雄性 ＳＰＦ级 ＳＤ大鼠 48 只，随机分为 4 组（ｎ ＝ 12）正常对照组、模型组、干预
组、及阳性对照组，采用高脂饮食加一次性尾静脉注射 ＳＴＺ 35 ｍｇ ／ ｋｇ复制糖尿病模型。干预组在实验开始时给予
ＴＴＭ 浓度 1 ｍｇ ／ ｍｌ头顶一颗珠提取液 3 ｍｌ灌胃，每天 1 次；造模成功后阳性对照组用二甲双胍 5ｍｇ ／ ｋｇ． ｄ 灌胃治
疗，各组继续喂养 6 周，处死大鼠，取血测 Ｂ型脑钠肽（ＢＮＰ）、心肌肌钙蛋白 Ｉ（ｃＴｎＩ）水平，心脏称重计算心脏重量
指数（心重 ／体重），ＴＵＮＥＬ法计算心肌细胞凋亡指数，取心室肌组织行常规形态学及 Ｍａｓｓｏｎ染色观察，检测心肌组
织 ＳＯＤ，ＧＰｘ，ＭＤＡ水平。结果：ＴＴＭ 干预可明显降低糖尿病大鼠心脏重量，降低血清中 ＢＮＰ、ｃＴｎＩ 水平，提高心
肌组织中 ＳＯＤ，ＧＰｘ活性，降低 ＭＤＡ含量，抑制心肌细胞凋亡，而且在增强 ＧＰｘ活性、抑制胶原纤维产生方面，ＴＴＭ
作用比西药二甲双胍效果更好。结论：头顶一颗珠提取物可能通过减轻糖尿病大鼠体内氧化应激反应，进而抑制
心肌细胞凋亡，减少胶原纤维产生，来达到保护心肌细胞损伤的作用。
【关键词】头顶一颗珠；糖尿病大鼠；心肌损伤；氧化应激
【中图分类号】Ｒ587． 1 【文献标识码】Ａ 【文章编号】1000－6834（2016）02－177－04
【ＤＯＩ】10． 13459 ／ ｊ． ｃｎｋｉ． ｃｊａｐ． 2016． 02． 022
Ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｔｒｉｌｌｉｕｍ ｔｓｃｈｏｎｏｓｋｉｉ ｍａｘｉｍ ｅｘｔｒａｃｔ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ
ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ
ＷＡＮＧ Ｆｅｎｇ－ｊｉｅ1，3，ＷＡＮＧ Ｋｅ－ｋｕｎ2△，ＣＨＥＮ Ｘｉａｎ－ｂｉｎｇ3，ＬＩＵ Ｊｉｎ－ｈｏｎｇ4，ＧＡＯ Ｓｏｎｇ4，ＬＩＵ Ｘｉｎ4
（1． Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｍｉｎｚｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ 445000；2． Ｅｎｓｈｉ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｄｉｓｅａｓｅ Ｃｏｎｔｒｏｌ ａｎｄ Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ｅｎｓｈｉ 445000；
3． Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｈｏｏｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｍｉｎｚｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ 445000；4． Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｉｎ
Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｈｕｂｅｉ Ｍｉｎｚｕ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｅｎｓｈｉ 445000，Ｃｈｉｎａ）
【ＡＢＳＴＲＡＣＴ】Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ ｅｆｆｅｃｔ ａｎｄ ｔｈｅ ｕｎｄｅｒｌｙｉｎｇ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｔｒｉｌｌｉｕｍ ｔｓｃｈｏｎｏｓｋｉｉ ｍａｘｉｍ （ＴＴＭ，Ｔｒａｄｉ－
ｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）ｏｎ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ ｏｆ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ ｉｎｄｕｃｅｄ ｂｙ ｈｉｇｈ－ｆａｔ ｄｉｅｔ ａｎｄ ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ （ＳＴＺ），ｗｈｉｃｈ ｗｉｌｌ ｌａｙ ａ ｔｈｅ－
ｏｒｅｔｉｃａｌ ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｆｏｒ ｆｕｒｔｈｅｒ ｅｘｐｌｏｒｉｎｇ ｉｔｓ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｅｆｆｅｃｔ． Ｍｅｔｈｏｄｓ：ＳＤ ｍａｌｅ ｒａｔｓ ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｈｉｇｈ ｆａｔ ｄｉｅｔ ａｎｄ ＳＴＺ （35 ｍｇ ／ ｋｇ）
ｖｉａ ｔａｉｌ ｖｅｉｎ ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ ｗｅｒｅ ｍｏｄｅｌｅｄ ｉｎｔｏ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ，ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ （ＢＮＰ）ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ （ｃＴｎＩ）ｉｎ
ｓｅｒｕｍ ，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ （ＳＯＤ），ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ （ＧＰＸ），ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ （ＭＤＡ）ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ ｔｉｓｓｕｅｓ，ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ
ｍｙｏｃｙｔｅ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｅｘ ｗｅｒｅ ｔｅｓｔｅｄ ｉｎ ａｌｌ ｇｒｏｕｐｓ ａｆｔｅｒ ｔｈｅ ｌａｓｔ ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ． Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｔｈａｔ ｉｎ ｔｈｅ ｍｏｄｅｌ ｇｒｏｕｐ，ＳＯＤ
ａｎｄ ＧＰＸ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ａｎｄ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＢＮＰ、ｃＴｎＩ、ｃａｒｄｉａｃ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎｄｅｘ （ＣＷＩ）、ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｅｘ （ＡＩ）ｗｅｒｅ ｄｅ－
ｃｒｅａｓｅｄ ｉｎ ＴＴＭ ａｎｄ ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ （Ｍｅｔ）ｇｒｏｕｐ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＴＴＭ ｗｅｒｅ ｂｅｔｔｅｒ ｔｈａｎ ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ ｉｎ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ＧＰＸ ａｃ－
ｔｉｖｉｔｙ ａｎｄ ｄｅｃｒｅａｓｉｎｇ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｌｅｖｅｌ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＴＴＭ ｃａｎ ｉｎｈｉｂｉｔ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｂｙ ｒｅｄｕｃｉｎｇ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ｄｉａ－
ｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｓｌｏｗ ｄｏｗｎ ｃｏｌｌａｇｅｎ ｆｉｂｅｒ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ ｐｒｏｔｅｃｔ ｔｈｅ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｃｅｌｌ ｉｎｊｕｒｙ．
【ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ】 ＴＴＭ（Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ）； ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ｉｎｊｕｒｙ； ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ； ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ
头顶一颗珠（ｔｒｉｌｌｉｕｍ ｔｓｃｈｏｎｏｓｋｉｉ ｍａｘｉｍ，ＴＴＭ）系
百合科延龄草属植物延龄草的干燥根茎（俗称地
珠），是湖北恩施土家族地区的珍稀药材，被奉为
“神药”，主要含有甾体皂甙、黄酮苷及倍半萜苷等
有效成分［1］，具有抗癌、抗炎、提高免疫力、改善心
功能和降压、降脂、清除自由基、抗衰老等功效［2，3］。
关于头顶一颗珠提取物对糖尿病的作用研究很少，
本课题组前期研究 发现头顶一颗珠提取液灌胃处理
后，糖尿病大鼠一般情况、血糖、血脂等指标得到明显
改善［4，5］，本研究进一步探讨其对糖尿病大鼠心肌损伤
的干预机制，为 ＴＴＭ的临床应用提供理论依据。
1 材料与方法
1． 1 动物、药品与试剂
实验动物：ＳＤ 大鼠，雄性，ＳＰＦ 级，体重 150 ～
180 ｇ，购于湖北省实验动物研究中心，许可证号：
ＳＣＸＫ（鄂）2015－0018。
771中国应用生理学杂志，2016，32（2）
药品与试剂：头顶一颗珠根状茎及根购于湖北
省乐之塬科技有限公司；链脲佐菌素（ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ，
ＳＴＺ）购于美国 Ｓｉｇｍａ公司；超氧化物歧化酶（ｓｕｐｅｒ－
ｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ，ＳＯＤ）、丙二醛（ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ，
ＭＤＡ）、谷胱甘肽过氧化物酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉ－
ｄａｓｅ，ＧＰＸ）试剂盒购于南京建成生物工程研究所；
ＢＮＰ、ｃＴｎＩ检测试剂盒购于上海邦奕生物科技有限
公司；ＴＵＮＥＬ凋亡检测试剂盒购于瑞士罗氏公司。
1． 2 头顶一颗珠提取液制备
取头顶一颗珠根状茎及根烘干粉碎，过 60 目
筛，用石油醚浸泡 3 ｈ 后，加热回流提取 2 ｈ，过滤，
滤渣为脱脂粗粉；用 75％乙醇浸泡数小时后回流提
取，反复多次，将提取液滤过并减压浓缩、干燥，得总
提取物；加水至总提取物全部溶解，用适量乙醚反复
萃取多次，除去浓缩液中的脂溶性成分；脱脂后水饱
和正丁醇萃取，减压浓缩干燥，得延龄草总皂苷，经
测定药品总皂苷含量（18． 54 ｍｇ ／ ｇ 生药材）；超纯水
配成 1 ｍｇ ／ ｍｌ溶液备用。
1． 3 糖尿病模型及分组
雄性 ＳＰＦ级 ＳＤ大鼠 48 只，随机分为正常对照
组（Ｎ，）、模型组（ＤＭ）、头顶一颗珠提取液干预组
（ＴＴＭ）、及二甲双胍（Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ）治疗（Ｍｅｔ）作为阳
性对照组，每组 12 只，除正常对照组外，其他各组均
给予高脂饲料喂养。干预组在实验开始时给予
ＴＴＭ 浓度 1 ｍｇ ／ ｍｌ 提取液 3 ｍｌ 灌胃，每天 1 次；正
常组和模型组给予同体积饮用水灌胃。喂养 4 周后
给予一次性尾静脉注射 ＳＴＺ 35 ｍｇ ／ ｋｇ，5 ｄ后测空腹
血糖，连续 2 次血糖 ＞ 13． 9 ｍｍｏｌ ／ Ｌ，且有多饮、多
食、多尿的大鼠为造模成功，用于后期实验，此时各
组大鼠例数分别为 Ｎ（ｎ ＝ 12），ＤＭ（ｎ ＝ 10），ＴＴＭ（ｎ
＝ 12），Ｍｅｔ（ｎ ＝ 11）。二甲双胍治疗组在造模成功
后用 5 ｍｇ ／（ｋｇ·ｄ）灌胃，每天 1 次，治疗 6 周；其余
组继续灌胃喂养 6 周后，处死大鼠行各项指标检测。
1． 4 血液生化指标检测
实验结束后立即处死取血，检测血清中 ＢＮＰ、
ｃＴｎＩ水平，完整取出心脏，剪除包膜、大血管等，称
重；计算心重指数。心脏体重指数（ＣＷＩ）＝ 心脏重
量（ｍｇ）／大鼠体重（ｇ）。
1． 5 心肌组织 ＳＯＤ、ＧＰＸ、ＭＤＡ检测
取适量左心室肌组织，在 1 ～ 4℃条件下制成
100 ｇ ／ Ｌ心肌组织生理盐水匀浆液，按试剂盒方法
测定 ＳＯＤ、ＧＰＸ、ＭＤＡ。其中 ＳＯＤ 采用黄嘌呤氧化
酶法，ＭＤＡ 采用 ＴＢＡ 法，ＧＰｘ 采用比色法测定。另
取部分心室肌组织用 10％多聚甲醛固定备用。
1． 6 Ｍａｓｓｏｎ染色检测心肌组织胶原容积分数
另取部分心室肌组织用 10％多聚甲醛固定，石
蜡包埋后制成 4 μｍ 切片，脱蜡后苏木素染色 5
ｍｉｎ，盐酸乙醇分化，洗涤后用丽春红酸性品红溶液
染色 5 ｍｉｎ，迅速水洗后再 1％磷钼酸中染色 3 ｍｉｎ，
又在甲苯胺蓝中染 5 ｍｉｎ 后水洗烘干，树胶封片后
观察。采用显微镜对所得切片观察并用 Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ
Ｐｌｕｓ 6． 0 图像分析软件进行图片分析，计算胶原纤
维染色面积占观察视野面积的分数，即为胶原容积
分数（ｃｏｌｌａｇｅｎ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ，ＣＶＦ）［6］。
1． 7 心肌细胞凋亡指数检测
采用 ＴＵＮＥＬ法：4％甲醛固定心肌组织，石蜡包
埋，制成 4 μｍ厚切片，每只大鼠制作 10 张切片，常
规 ＨＥ染色。按 ＴＵＮＥＬ试剂盒说明进行操作，应用
Ｉｍａｇｅ－Ｐｒｏ Ｐｌｕｓ 6． 0 图像分析软件计算凋亡指数。每
个标本随机选取 10 个高倍视野（× 400），分别计数
凋亡细胞核和正常细胞核，以凋亡细胞核与正常细
胞核比值的平均值作为凋亡指数（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｅｘ，
ＡＩ）［7］。
1． 8 统计学分析
计量资料以均数 ±标准差（珋ｘ ± ｓ）形式表示，运
用 ＳＰＳＳ 17． 0 统计软件进行分析。组间比较采用单
因素方差（ｏｎｅ－ｗａｙ ＡＮＯＶＡ）分析，组内两两比较采
用 ｑ检验或 ＬＳＤ－ｔ检验。
2 结果
2． 1 各组大鼠一般情况观察
正常对照大鼠活泼健壮，皮毛有光泽，对外界反
应灵敏，体重稳步增长；模型组注射 ＳＴＺ 后第四天
出现多汗、皮毛无光泽；随后多饮多尿、体重下降、尿
液腥臊味重；干预组及阳性对照组自第二周后一般情
况有所改善，皮毛光泽度渐好，多饮多食多尿情况好
转，体重缓慢增加，两组大鼠一般情况无明显差别。
2． 2 心重指数及血清中 ＢＮＰ、ｃＴｎＩ含量情况
与正常对照组相比，糖尿病模型组大鼠血清中
ＢＮＰ 、ｃＴｎＩ 水平明显升高，ＴＴＭ 干预后可降低血清
ｃＴｎＩ含量（Ｐ ＜ 0． 05）；ＴＴＭ 组及 Ｍｅｔ 组大鼠血清
ＢＮＰ水平较 ＤＭ 组明显降低，但仍然高于正常组。
ＴＴＭ可以减轻糖尿病所致大鼠心脏重量的增加（Ｐ
＜ 0． 05），Ｍｅｔ作用更明显（Ｐ ＜ 0． 01，表 1），但 ＴＴＭ
组和 Ｍｅｔ组无明显差别（Ｐ ＞ 0． 05）。
2． 3 ＴＴＭ对大鼠心肌组织 ＳＯＤ、ＧＰＸ、ＭＤＡ的影
响
从表 2 中可看出，糖尿病模型组大鼠心肌 ＳＯＤ、
ＧＰＸ活性显著低于正常组，ＭＤＡ 高于正常组，提示
871 Ｃｈｉｎ Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，2016，32（2）
大鼠心肌存在明显氧化应激反应；ＴＴＭ 干预后心肌
组织 ＳＯＤ和 ＧＰＸ活性明显增高，ＭＤＡ 水平降低（Ｐ
＜ 0． 05）；而 Ｍｅｔ组治疗后 ＳＯＤ 活性显著增高（Ｐ ＜
0． 05），ＭＤＡ水平显著降低（Ｐ ＜ 0． 05），ＧＰＸ 活性无
明显升高 （Ｐ ＞ 0． 05），但 ＴＴＭ组和 Ｍｅｔ组无差别。
Ｔａｂ． 1 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＴＴＭ ｏｎ ｔｈｅ ｌｅｖｅｌｓ ｏｆ ＢＮＰ、ｃＴｎＩ ｉｎ ｓｅｒｕｍ （珋ｘ
± ｓ）
Ｇｒｏｕｐ ｎ ＢＮＰ（ｎｇ ／ Ｌ） ｃＴｎＩ（μɡ ／ Ｌ） ＣＷＩ（ｍｇ ／ ｇ）
Ｎ 12 101． 03 ± 9． 21 0． 31 ± 0． 06 2． 75 ± 0． 59
ＤＭ 10 385． 12 ± 10． 52* 0． 74 ± 0． 02* 3． 24 ± 0． 35*
ＴＴＭ 12 201． 67 ± 11． 30* ＃ 0． 45 ± 0． 01＃ 2． 97 ± 0． 61＃
Ｍｅｔ 11 189． 54 ± 9． 24* ＃ 0． 52 ± 0． 05* ＃ 2． 82 ± 0． 26＃＃
ＢＮＰ：Ｂｒａｉｎ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ；ｃＴｎＩ：Ｃａｒｄｉａｃ ｔｒｏｐｏｎｉｎ Ｉ；
ＣＷＩ：Ｃａｒｄｉａｃ ｗｅｉｇｈｔ ｉｎｄｅｘ；Ｎ：Ｎｏｒｍａｌ ｇｒｏｕｐ；ＤＭ：Ｄｉａｂｅｔｅｓ
ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｇｒｏｕｐ；ＴＴＭ：Ｔｒｉｌｌｉｕｍ ｔｓｃｈｏｎｏｓｋｉｉ ｍａｘｉｍ ｇｒｏｕｐ；Ｍｅｔ：
Ｍｅｔｆｏｒｍｉｎ ｇｒｏｕｐ
*Ｐ ＜ 0． 05 ｖｓ Ｎ；＃ Ｐ ＜ 0． 05，＃＃Ｐ ＜ 0． 01 ｖｓ ＤＭ
Ｔａｂ． 2 Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＴＴＭ ｏｎ ＳＯＤ、ＧＰＸ、ＭＤＡ ｌｅｖｅｌｓ ｉｎ ｃａｒｄｉａｃ
ｔｉｓｓｕｅｓ ｏｆ ＤＭ （珋ｘ ± ｓ）
Ｇｒｏｕｐ ｎ ＳＯＤ
（Ｕ ／ ｍｇ·ｐｒｏ）
ＭＤＡ
（ｎｍｏｌ ／ ｍｇ·ｐｒｏ）
ＧＰＸ
（Ｕ ／ ｍｇ·ｐｒｏ）
Ｎ 12 82． 02 ± 11． 20 3． 02 ± 1． 02 58． 21 ± 10． 23
ＤＭ 10 52． 12 ± 9． 68* 3． 98 ± 0． 95* 41． 02 ± 9． 85*
ＴＴＭ 12 78． 12 ± 9． 36＃ 3． 36 ± 1． 13＃ 55． 24 ± 8． 76＃
Ｍｅｔ 11 76． 06 ± 8． 45＃ 3． 42 ± 1． 02＃ 45． 14 ± 8． 72
ＳＯＤ：Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ｄｉｓｍｕｔａｓｅ；ＭＤＡ：Ｍａｌｏｎｄｉａｌｄｅｈｙｄｅ；
ＧＰＸ：Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ
*Ｐ ＜ 0． 05 ｖｓ Ｎ；＃ Ｐ ＜ 0． 05 ｖｓ ＤＭ
2． 4 各组大鼠心肌组织形态学观察
常规形态学观察可看出：正常组大鼠心肌细胞
排列规则，走向好，横纹清晰，细胞间隙均匀，可见少
量纤维组织；模型组心肌细胞排列紊乱，散在肌纤维
变性、胞浆粗颗粒状，间质水肿、淋巴细胞浸润、纤维
组织增生明显，部分肌纤维被大量条状、束状胶原纤
维代替；ＴＴＭ干预及 Ｍｅｔ 组心肌纤维排列较模型组
规则，细胞变性较轻，胶原纤维明显减少（图 1 见彩
图页Ⅰ）。
2． 5 心肌组织Ｍａｓｓｏｎ染色及细胞凋亡指数检测
Ｍａｓｓｏｎ 染色中胶原纤维呈蓝色，正常心肌细胞
呈红色。用图像处理系统测量胶原纤维阳性区所占
观察视野的面积比，结果见表 3。与 ＨＥ染色结果一
致，正常对照组心肌细胞排列整齐、致密，细胞间少
有胶原纤维；模型组心肌细胞排列松散，心肌间质内
及小血管旁可见较多胶原纤维分布，部分呈片状堆
积；由统计结果可见 ＴＴＭ干预后胶原纤维量明显减
少，差异有统计学意义（Ｐ ＜ 0． 05）；二甲双胍治疗组
心肌间质内胶原纤维含量没有明显减少（Ｐ ＞
0． 05）。
与正常组相比，糖尿病模型组大鼠心肌凋亡指
数明显增加，差异有显著统计学意义（Ｐ ＜ 0． 01）；与
模型组相比，ＴＴＭ组和 Ｍｅｔ 组心肌细胞凋亡率降低
（Ｐ ＜ 0． 05）；但是 ＴＴＭ 干预和 Ｍｅｔ 治疗均不能降低
细胞凋亡至正常水平（表 3）。
Ｔａｂ． 3 ＣＶＦ ａｎｄ ＡＩ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｒｏｕｐｓ （％，珋ｘ ± ｓ）
Ｇｒｏｕｐ ｎ ＣＶＦ ＡＩ
Ｎ 12 0． 04 ± 0． 00 1． 30 ± 0． 04
ＤＭ 10 0． 14 ± 0． 01* 28． 37 ± 0． 04
ＴＴＭ 12 0． 08 ± 0． 00＃ 12． 25 ± 0． 05* ＃
Ｍｅｔ 11 0． 11 ± 0． 01 16． 41 ± 0． 02* ＃
ＣＶＦ：Ｃｏｌｌａｇｅｎ ｖｏｌｕｍｅ ｆｒａｃｔｉｏｎ；ＡＩ：Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎｄｅｘ
*Ｐ ＜ 0． 05，Ｐ ＜ 0． 01 ｖｓ Ｎ；＃ Ｐ ＜ 0． 05 ｖｓ ＤＭ
3 讨论
随着生活水平的提高及生活方式的改变，糖尿
病的发病率呈现逐年升高的趋势，糖尿病心肌病是
糖尿病的重要慢性并发症，主要病理改变为心肌细
胞外基质（ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ ｍａｔｒｉｘ，ＥＣＭ）堆积，心肌肥
厚及心肌间质纤维化等，其中间质纤维化是糖尿病
心肌病的重要特征，姜黄素衍生物可通过改善糖尿
病大鼠糖脂代谢并减轻心肌纤维化来达到保护心肌
的作用［8］。目前关于糖尿病心肌病的发生机制尚
不清楚，2004 年美国糖尿病学会（ＡＤＡ）年会上
Ｂｒｏｗｎｌｅｅ教授提出了糖尿病并发症氧化应激共同通
路机制的学说：高糖引起线粒体中超氧阴离子生成
过多，发生氧化应激，近年来多项研究结果表明抗氧
化治疗可抑制糖尿病心肌损伤［9，10］。本研究证实糖
尿病大鼠血清中 ｃＴｎＩ、ＢＮＰ 明显增高，证明心肌细
胞损伤明显；ＴＴＭ干预后 ｃＴｎＩ、ＢＮＰ 水平均降低，表
明 ＴＴＭ对保护糖尿病大鼠心肌损伤、改善心功能有
一定作用，因此我们试图从氧化应激方面研究头顶
一颗珠对糖尿病心肌损伤的干预作用机制。
在体内高糖环境下，葡萄糖对线粒体的持续氧
化可导致体内活性氧（ＲＯＳ）的大量产生，氧化－还
原平衡破坏，进而激活基质金属蛋白酶类，后者在心
肌纤维化、心脏重塑等病理变化中扮演重要的角
色［11］。实验证明，在 1 型和 2 型糖尿病心脏中均存
在线粒体 ＲＯＳ 的高表达［12］；也有学者提出减少心
肌 ＲＯＳ的产生或加强抗氧化能力有望减轻 ＤＣＭ 的
心脏功能失常［13］。张伟［14］等研究也发现，脂联素
干预后大鼠的心肌间质中胶原沉积得到明显改善，
胶原容量分数显著下降，提示脂联素治疗能够达到
延缓糖尿病心肌病心肌纤维化的目标。我们发现糖
尿病大鼠心肌细胞肥大、胶原纤维增生，另可见小血
管内膜增厚等，ＴＴＭ干预后可减少间质胶原纤维产
971中国应用生理学杂志，2016，32（2）
生，可能是因为头顶一颗珠提取物有效成分内含多
种皂苷，降低糖尿病大鼠心肌脂质过氧化物（ＭＤＡ）
的产生，提高其抗氧化酶系统（ＳＯＤ、ＧＰｘ）的活力，
通过抑制氧化应激而延缓心肌纤维化来发挥心肌损
伤保护作用，但是二甲双胍无此作用；另外也可能是
其提取物中含有较高微量元素硒，硒也已证实具有
抗氧化作用。因此 ＴＴＭ 提取物对于缓解糖尿病患
者体内氧化应激及重要器官损伤（如心脏）所致的
并发症有积极作用。
有报道［15，16］证实糖尿病氧化应激与心肌细胞
凋亡密切相关，氧化应激可促进心肌细胞凋亡；糖尿
病心肌病变发生与心肌细胞凋亡有关［5］，韦金儒［17］
等研究证实颉沙坦可抑制心肌组织中 3－硝基酪氨
酸诱导的心肌细胞凋亡，但对心脏扩大无明显改善，
且氧化应激是凋亡、细胞坏死和纤维化的重要途径。
人参皂苷 Ｒｇ1 可抑制高糖所致的心肌细胞肥大［18］，
可通过减少心肌细胞凋亡和抗氧化作用保护糖尿病
大鼠心肌损伤［19］，我们也发现头顶一颗珠提取物可
以明显减少心肌细胞凋亡，可能是其内皂苷成分通
过抑制机体氧化应激而发挥抗细胞凋亡作用，但其
作用途径还有待研究。
总之，氧化应激性损伤与糖尿病心肌病变的发
生密切相关；鉴于临床常用药物的副作用大等特点，
而中药头顶一颗珠已证实具有抗炎、抗氧化和降脂
等作用，因此开发中药产品及用中药干预调理等有
可能成为临床用药的参考。本研究证实头顶一颗珠
可明显增强心肌内抗氧化酶活性及减轻脂质过氧
化，抑制心肌细胞凋亡，减少胶原纤维沉积，从而预
防或延缓心肌病变的发生，因此推测其具有抗氧化
和抗细胞凋亡作用，而且通过中药干预机体氧化应
激可能成为糖尿病心血管病变治疗的新方法。
【参考文献】
［1］ 喻玲玲，邹 坤． 延龄草属植物的化学成分及药理活
性研究进展［Ｊ］． 中成药，2008，30（9）：1350－1354．
［2］ 李志勇，周凤琴，图 雅，等． 土家族药头顶一颗珠
现代研究进展［Ｊ］． 中国中医药信息杂志，2011，18
（1）：104－106．
［3］ 李志勇，张 女曼，图 雅，等． 头顶一颗珠及提取物
的二维红外光谱研究［Ｊ］． 河南科技大学学报：自然科
学版，2011，32（4）：95－99．
［4］ 姚雪莉，王 瑾，张炜芳，等． 高糖高脂饮食联合注
射 ＳＴＺ制备 2 型糖尿病大鼠缺血性心脏病模型［Ｊ］．
中国应用生理学杂志，2014，30（2）：137－140．
［5］ 王凤杰，陈显兵，张 顺，等． 延龄草总皂苷对糖尿
病大鼠心肌细胞凋亡的影响［Ｊ］． 湖北民族学院学报
（医学版），2015，32（4）：1－4．
［6］ 王 岩，郭永川，梁前垒，等． 参麦注射液对糖尿病
心肌病大鼠心肌纤维化的干预作用及相关机制探讨
［Ｊ］． 中国病理生理杂志，2014，30（3）：449－453．
［7］ 宋 丹，程训民，江时森，等． 1 型糖尿病对大鼠心肌
线粒体通透性转换孔开放的影响［Ｊ］． 解放军医学杂
志，2010，35（7）：795－797．
［8］ 林中民，焦立卓，郑 怡，等． 姜黄素衍生物 Ｂ06 对 2
型糖尿病大鼠心肌的保护作用及其机制探讨［Ｊ］． 中
国应用生理学杂志，2014，30（1）：38－42．
［9］ Ｌｉ ＣＪ，Ｚｈａｎｇ ＱＭ，Ｌｉ ＭＺ，ｅｔ ａｌ． Ａｔｔｅｎｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｙｏｃａｒ－
ｄｉａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｂｙ ａｌｐｈａ－ｌｉｐｏｉｃ ａｃｉｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ
ｍｉｔｏｃｈｏｎｄｒｉａｌ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ｔｏ ｒｅｄｕｃｅ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｃａｒｄｉｏｍｙ－
ｏｐａｔｈｙ［Ｊ］． Ｃｈｉｎ Ｍｅｄ Ｊ（Ｅｎｇｌ），2009，122（21）：2580－
2586．
［10］ Ｂｉｌｇｉｎｏｇｌｕ Ａ，Ｓｅｙｍｅｎ Ａ，Ｔｕｎｃａｙ Ｅ，ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ
ｂｕｔ ｎｏｔ ｄｏｘｙｃｙｃｌｉｎｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ ｒｅｓｔｏｒｅ ｄｅｐｒｅｓｓｅｄ ｂｅｔａ－ａｄ－
ｒｅｎｅｒｇｉｃ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｅａｒｔ ｉｎ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｃａｒｄ－
ｉｏｖａｓｃ Ｔｏｘｉｃｏｌ，2009，9（1）：21－29．
［11］ 崔 瑾，李德强，邱明才，等． 环孢素 Ａ 对链脲菌素
诱导糖尿病大鼠心脏 ＭＭＰ－2 和 ＭＭＰ－9 表达的影响
［Ｊ］． 中华内分泌代谢杂志，2010，26（3）：238－240．
［12］ Ｂｈａｔｔａｃｈａｒｙａ Ｓ，Ｍａｎｎａ Ｐ，Ｇａｃｈｈｕｉ Ｒ，ｅｔ ａｌ． Ｄ－ｓａｃｃｈａｒｉｃ
ａｃｉｄ 1，4－ｌａｃｔｏｎｅ ｐｒｏｔｅｃｔｓ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔ ｋｉｄｎｅｙ ｂｙ ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｎｇ
ｈｙｐｅｒｇｌｙｃｅｍｉａ－ｍｅｄｉａｔｅｄ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｒｅｎａｌ ｉｎｆｌａｍｍａ－
ｔｏｒｙ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｖｉａ ＮＦ－ｋａｐｐａ Ｂ ａｎｄ ＰＫＣ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［Ｊ］． Ｔｏｘ－
ｉｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ，2013，267（1）：16－29．
［13］ 余 薇，刘 超，吴基良． 糖尿病心肌病线粒体损伤
的研究进展［Ｊ］． 中国药理学通报，2013，29（12）：
1651－1654．
［14］ 张 伟，张 静，余琼兰，等． 脂联素在糖尿病心肌
病心肌纤维化中的抗氧化作用［Ｊ］． 中国医药导刊，
2011，13（3）：470－472．
［15］ Ｌｏｎｇ Ｘ，Ｇｏｌｄｅｎｔｈａｌ ＭＪ，Ｍａｒｉｎ－Ｇａｒｃｉａ Ｊ． Ｏｘｉｄａｔｉｖｅ
ｓｔｒｅｓｓ ｅｎｈａｎｃｅｓ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｐ53 ｉｎ ｎｅｏｎａｔａｌ ｒａｔ ｃａｒ－
ｄｉｏｍｙｏｃｙｔｅｓ［Ｊ］． Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｃｈｅｍ，2007，303（1－2）：
167－174．
［16］ 陈艳芬，王春怡，李卫民，等． 黄芪葛根汤对糖尿病
心肌病大鼠氧化应激和 ＮＦ－κＢ 的影响［Ｊ］． 中成药，
2012，34（8）：1428－1432．
［17］ 韦金儒，张雅莉． 3－硝基酪氨酸与糖尿病心肌病大鼠
心肌细胞凋亡的关系研究［Ｊ］． 中国病理生理杂志，
2011，27（2）：243－248．
［18］ 李铁成，王洪新． 人参皂苷 Ｒｇ1对高糖诱导心肌肥大的
保护作用［Ｊ］． 中药药理与临床，2014，30（1）：25－28．
［19］ Ｙｕ ＨＴ，Ｚｈｅｎ Ｊ，Ｐａｎｇ Ｂ，ｅｔ ａｌ． Ｇｉｎｓｅｎｏｓｉｄｅ Ｒｇ1 ａｍｅｌｉｏ－
ｒａｔｅｓ ｏｘｉｄａｔｉｖｅ ｓｔｒｅｓｓ ａｎｄ ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ ａｐｏｐｔｏｓｉｓ ｉｎ ｓｔｒｅｐｔｏ－
ｚｏｔｏｃｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｉａｂｅｔｉｃ ｒａｔｓ［Ｊ］． Ｊ Ｚｈｅｊｉａｎｇ Ｕｎｉｖ Ｓｃｉ Ｂ，
2015，16（5）：344－354．
081 Ｃｈｉｎ Ｊ Ａｐｐｌ Ｐｈｙｓｉｏｌ，2016，32（2）