全 文 ：［收稿日期］ 20140630(002)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(81360653) ;广西自然科学基金项目(2011GXNSFA018258) ;广西中管局中医药科技专项基金项目
(GZKZ0948)
［第一作者］ 梁柱第，主管药师，从事药品不良反应监测和安全性评价研究，Tel:0771-5884912，E-mail:liangzhudi@ 163． com
［通讯作者］ * 韦桂宁，硕士，副主任药师，从事中药药理学与毒理学研究，Tel:0771-5869102，E-mail:weiguining2004@ 163． com
藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化大鼠的炎症因子
及主动脉弓 sPLA2 -ⅡA表达的影响
梁柱第1，曾宪彪2，韦桂宁2* ，何飞2，吕纪华2，苏华2，韦宝伟2
(1． 广西壮族自治区药品不良反应监测中心，南宁 530022;
2． 广西中医药研究院，南宁 530022)
［摘要］ 目的:探讨藤茶双氢杨梅素对动脉粥样硬化(AS)大鼠血清炎症因子水平和ⅡA 分泌型血小板型磷脂酶 A2
(secretory phospholipase A2 of group ⅡA，sPLA2-ⅡA)mＲNA表达的影响，以了解藤茶双氢杨梅素对 AS 的作用机制。方法:取
健康雄性 Wistar大鼠 60 只，随机分为 5 组，即正常组、模型组、辛伐他汀组(5 mg·kg －1·d －1)、及藤茶双氢杨梅素低、高剂量组
(10，40 mg·kg －1·d －1) ，每组 12 只，除正常组大鼠喂以基础饲料外，其他组给大鼠饲养高脂饲料，并 ip 维生素 D3，复制 AS 模
型，给药组 ig给予相应药物，正常组与模型组给予等体积的生理盐水，连续 24 周后，观察藤茶双氢杨梅素对模型大鼠血清 C-
反应蛋白(CＲP)，血清肿瘤坏死因子 α(TNF-α)和白细胞介素-1(IL-1)的水平，ＲT-PCＲ观察主动脉弓 sPLA2-ⅡA mＲNA 表达
的变化。结果:与正常组比较，模型组大鼠血管管壁增厚，内皮粗糙，中膜平滑肌纤维明显增生，大鼠血清 CＲP，TNF-α 和 IL-1
水平明显增高(P ＜ 0. 05，P ＜ 0. 01)，主动脉弓 sPLA2-ⅡA mＲNA的表达明显增强(P ＜ 0. 01) ;与模型组比较，藤茶双氢杨梅素
低剂量组大鼠血管病变范围及内膜增厚程度略有减轻，高剂量组大鼠血管仅见局部内皮粗糙，内膜光滑，中膜平滑肌纤维轻
度增生，藤茶双氢杨梅素高剂量组可明显降低 AS大鼠血清 CＲP和 IL-1 水平(P ＜ 0. 05)，能显著降低 AS大鼠主动脉弓 sPLA2-
ⅡA mＲNA的表达(P ＜ 0. 05)。结论:藤茶双氢杨梅素对 AS具有一定的防治作用，其作用机制是通过改善 AS大鼠炎症因子
水平，抑制 sPLA2-ⅡA mＲNA的表达。
［关键词］ 藤茶双氢杨梅素;动脉粥样硬化;炎症因子;ⅡA分泌型血小板型磷酸酶 A2
［中图分类号］ Ｒ285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2015)04-0120-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2015040120
Effect of Dihydromyricetin on Inflammatory Factors and sPLA2-ⅡA mＲNA Expression of Aortic Arch in
Atherosclerosis Ｒats LIANG Zhu-di1， ZENG Xian-biao2，WEI Gui-ning2* ，HE Fei2， LYU Ji-hua2，
SU Hua2，WEI Bao-wei2 (1. Guangxi Zhuang Autonomous Ｒegion Adverse Drug Ｒeaction Monitoring Center，Nanning
530022，China;2. Guangxi Institute of Chinese Medicine ＆ Pharmaceutical Science，Nanning 530022，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the effects of dihydromyricetin of Ampelopsis grossedentata on
inflammatory factors and secretory phospholipase A2 of group ⅡA (sPLA2-ⅡA)mＲNA expression of aortic arch in
atherosclerosis rats． Method:Sixty rats were randomly divided into the control group，the model group，the
simvastatin group (5 mg·kg －1·d －1)and the high-，low-dose dihydromyricetin groups (40，10 mg·kg －1·d －1)．
The atherosclerosis model was induced by feeding a high fat diet and injecting vitamin D3 except rats in the control
group． After 24 weeks，the serum C-reactive protein (CＲP) ，tumor necrosis factor (TNF-α) ，interleukin-1
(IL-1)and sPLA2-ⅡA mＲNA expression of the aortic arch were observed． Ｒesult:Compared with the normal
group，the thickened blood vessel wall，rough endothelial and marked hyperplasia of the smooth muscle fiber were
found in the model group． Besides，levels of serum CＲP，TNF-α，IL-1 and sPLA2-ⅡA mＲNA expression were
remarkably increased in the model group (P ＜ 0. 01)． Compared with the model group，the area of vascular lesions
and the thickened blood vessel wall were slightly improved in the low-dose dihydromyricetin group． Moreover，the
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local rough endothelial，smooth endomembrane and mild hyperplasia of the smooth muscle fiber were found in the
high-dose dihydromyricetin group． The serum levels of CＲP and IL-1 decreased significantly in the high-dose
dihydromyricetin group，sPLA2-ⅡA mＲNA expression was inhibited in the high-and low-dose dihydromyricetin group
(P ＜0. 05)． Conclusion:Dihydromyricetin has good therapeutic effect on atherosclerosis rats． Its mechanism may
be related to reducing inflammatory factors level and inhibiting sPLA2-ⅡA mＲNA expression of aortic arch．
［Key words］ dihydromyricetin;atherosclerosis;inflammatory factors;sPLA2-ⅡA
广西藤茶双氢杨梅素是从广西瑶族藤茶
Ampelopsis grossedntata 的茎叶中提取的活性成
分［1］。研究表明，藤茶双氢杨梅素对心血管疾病具
有良好的治疗作用，能降低小鼠血脂，增强机体抗氧
化能力，能预防性对抗超氧阴离子自由基引起的氧
化性损伤［2-4］。前期研究结果表明，藤茶总黄酮可
改善动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)大鼠血脂水
平和血液流变学，对 AS 具有一定的防治作用［5］。
双氢杨梅素为藤茶总黄酮的主要成分之一，这提示，
双氢杨梅素可能具有抗 AS 的药理活性，具有开发
成为抗 AS新药的良好前景。为研究藤茶总黄酮抗
AS 的物质基础，及进一步观察藤茶双氢杨梅素对
AS作用机制，本研究采用高脂饲料及维生素 D3 法，
复制 AS大鼠模型，观察藤茶双氢杨梅素对 AS 大鼠
炎症因子，ⅡA分泌型血小板型磷脂酶 A2(secretory
phospholipase A2 of group ⅡA，sPLA2-ⅡA)mＲNA表
达的影响，为临床治疗 AS提供一定的实验依据。
1 材料
1. 1 动物 Wistar 大鼠，雄性，SPF 级，体重 130 ～
150 g，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合
格证号 SCXK(桂)2009-2002。
1. 2 药物及试剂 藤茶双氢杨梅素(本单位自制，
纯度 98%，给药剂量根据已报道的文献及预实验的
结果而定) ，辛伐他汀片(湖北恒安药业有限公司，
批号 120301) ，维生素 D3 注射液(上海第九制药厂，
批号 070603) ，C反应蛋白(CＲP)测定试剂盒(南京
建成生物工程研究所，批号 20120323)，肿瘤坏死因
子-α(TNF-α)测定试剂盒(南京建成生物工程研究
所，批号 201205) ，白细胞介素-1(IL-1)测定试剂盒
(长春汇力生物技术有限公司，批号 2012045)，总
ＲNA提取试剂盒(美国 Promega公司，批号 28218) ，
ＲT-PCＲ 试剂盒、DNA 标志物(宝生物工程有限公
司，批号分别为 00145165，00129355) ，其他试剂均
为分子生物学专用试剂。
1. 3 仪器 Thermal Cycler HBPXE 02220 型 PCＲ
仪(美国 Thermo Fisher 公司) ，Universal32Ｒ 型台式
离心机(德国 Hettich Zentrifugen公司)，MK-20 型干
式恒温器(杭州奥盛仪器有限公司) ，EC105 型电泳
仪(美国 IEC公司) ，722 型可见分光光度计(上海精
密科学仪器有限公司)。
1. 4 引物设计与合成 大鼠 sPLA2-ⅡA 和 β-肌动
蛋白(β-actin)的引物自行设计，由上海捷瑞生物工
程有限公司合成。
2 方法
2. 1 模型建立及给药［6］ 取大鼠 60 只，适应性喂
养 1 周，随机分为 5 组:正常组、模型组、辛伐他汀
组、及藤茶双氢杨梅素低、高剂量组，每组 12 只，除
正常组喂以基础饲料外，其他各组按文献［6］方法
建立模型，一次性 ip 维生素 D3 60 万单位 /kg，喂以
高脂饲料(组成为猪油 10%，胆固醇 5%，蛋黄粉
5%，胆酸纳 0. 5%，丙基硫氧嘧啶 0. 2%，基础饲料
79. 3%)。造模开始，正常组和模型组每天 ig 等体
积蒸馏水，辛伐他汀组按 5 mg·kg －1，藤茶双氢杨梅
素低、高组(10，40 mg·kg －1) ，每天 ig 给药 1 次，自
由进食与进水，连续 24 周。
2. 2 样品制备及检测 末次给药前禁食 12 h，给药
1 h 后以水合氯醛麻醉动物，开腹，腹主动脉采血，
分离血清，按试剂盒所示方法测定 CＲP，TNF-α 及
IL-1 的含量。分离主动脉弓，留待病理染色观察及
ＲT-PCＲ检测 sPLA2-ⅡA mＲNA表达。
2. 3 ＲT-PCＲ 检测 sPLA2-ⅡA mＲNA 用 Trizol 提
取主动脉弓总 ＲNA，然后用紫外分光光度计测定其
纯度并定量，逆转录合成 cDNA。以 β-actin 为内参，
进行半定量逆转录聚合酶链反应。序列为 sPLA2-
ⅡA，上游 5-CATGAAGGTCCTCCTGTTGCT-3下游
5-GTGTTAGAGGATGTCTGGATG-3，其扩增产物长
度为 386 bp。内参 β-actin，上游 5-TGAAGTGT-
GACGTGGACATC-3，下游 5-TAGAAGCATTTGCG-
GTGGAC-3，其扩增产物长度 288 bp。sPLA2-ⅡA
的反应条件为 94 ℃预变性 4 min 后，94 ℃变性 1
min，57 ℃退火 1 min，71 ℃延伸 1 min，共进行 30 次
循环，最后再 72 ℃延伸 5 min，4 ℃冷却终止反应。
聚合酶链反应产物用溴化乙啶的 2. 0%琼脂糖凝胶
电泳分析。用凝胶扫描分析系统分别对 sPLA2-ⅡA
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进行吸光度扫描。
2. 4 统计学分析 采用 SPSS 11. 0 系统软件处理，
计量资料用 珋x ± s 表示，数据采用方差分析，以 P ＜
0. 05 为差异有统计学意义。
3 结果
3. 1 对大鼠体重的影响 造模后第 12，24 周，和正
常组比较，模型组大鼠体重明显降低(P ＜ 0. 01)。
和模型组比较，各给药组大鼠的体重无明显影响。
见表 1。
表 1 藤茶双氢杨梅素对 AS大鼠体重的影响(珋x ± s，n = 12)
Tabble 1 Effects of dihydromyricetin on body weight of
atherosclerosis rats(珋x ± s，n = 12)
组别
剂量
/mg·kg －1
体重 / g
0 周 12 周 24 周
正常 － 275 ± 47 446 ± 62 528 ± 114
模型 － 281 ± 352) 231 ± 742) 198 ± 692)
辛伐他汀 5 278 ± 32 242 ± 105 212 ± 88
藤茶双氢 40 281 ± 42 239 ± 93 207 ± 65
杨梅素 10 277 ± 38 236 ± 101 201 ± 92
注:与正常组比较1)P ＜ 0. 05，2)P ＜ 0. 01;与模型组比较3)P ＜
0. 05，4)P ＜ 0. 01(表 2 同)。
3. 2 对 AS大鼠主动脉弓病理改变的影响 正常
组内皮及内膜光滑;模型组大鼠主动脉管壁呈弥漫
性隆起，内膜明显增厚，斑块内可见大量泡沫细胞及
多层排列，内皮细胞缺失或不连续，中膜平滑肌增
生;藤茶双氢杨梅素低剂量组大鼠血管管壁增厚，内
皮粗糙，中膜平滑肌纤维明显增生，病变范围及内膜
增厚程度略有减轻;藤茶双氢杨梅素高剂量组大鼠
血管仅见局部内皮粗糙，内膜光滑中膜平滑肌纤维
轻度增生。见图 1。
3. 3 对 AS大鼠血清 CＲP，TNF-α和 IL-1 水平的影
响 与正常组比较，模型组大鼠 CＲP，TNF-α，IL-1
水平显著高于正常组(P ＜ 0. 01，P ＜ 0. 05)，提示 AS
模型造模成功;与模型组比较，藤茶双氢杨梅素高剂
量组可显著降低血清 CＲP和 IL-1 水平(P ＜ 0. 05)。
见表 2。
3. 4 对AS大鼠主动脉弓 sPLA2-ⅡA mＲNA表达的
影响 饲养高脂饲料加腹腔注射维生素 D3法复制
的 AS 大鼠 sPLA2-ⅡA mＲNA 表达明显上调，与正
常组比较具有明显差异(P ＜ 0. 01)。藤茶双氢杨梅
素可显著下调 sPLA2-ⅡA mＲNA 的表达，与模型组
比较具有明显差异(P ＜ 0. 01)。见图 2。
4 讨论
AS的病理学原因复杂，现代医学认为 AS 是一
种多种因素导致的炎症反应性疾病，在 AS 发生和
A． 正常组;B． 模型组;C． 辛伐他汀 5 mg·kg －1组;D． 藤茶双氢杨梅
素 40 mg·kg －1组;E． 藤茶双氢杨梅素 10 mg·kg －1组
图 1 藤茶双氢杨梅素对 AS大鼠主动脉弓病理改变的影响(HE，×
400)
Fig． 1 Effects of dihydromyricetin on pathology of the aortic arch of
atherosclerosis rats(HE，× 400)
表 2 藤茶双氢杨梅素对 AS 大鼠血清 CＲP，TNF-α和 IL-1 水平的
影响(珋x ± s，n = 12)
Table 2 Effects of dihydromyricetin on serum CＲP，TNF-α and
IL-1 of atherosclerosis rats(珋x ± s，n = 12)
组别
剂量
/mg·kg －1
CＲP
/mg·L －1
TNF-α
/ng·L －1
IL-1
/ng·L －1
正常 － 0. 63 ±0. 14 8. 63 ±4. 54 69. 02 ±16. 69
模型 － 8. 51 ±2. 312) 17. 63 ±9. 581) 102. 08 ±27. 201)
辛伐他汀 5 7. 52 ±5. 78 9. 09 ±6. 23 66. 01 ±23. 103)
藤茶双氢 40 6. 01 ±2. 773) 11. 13 ±8. 61 71. 99 ±16. 123)
杨梅素 10 9. 09 ±1. 91 14. 15 ±8. 11 80. 27 ±23. 10
M． Mark;1. 正常组;2. 模型组;3. 辛伐他汀 5 mg·kg －1组;4. 藤茶双
氢杨梅素 40 mg·kg －1组;5. 藤茶双氢杨梅素 10 mg·kg －1组
图 2 藤茶双氢杨梅素对 AS大鼠主动脉弓 sPLA2-ⅡA mＲNA表达
的影响
Fig． 2 Effect of dihydromyricetin on expressions of sPLA2-Ⅱ A
mＲNA of aortic arch of atherosclerosis rats
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发展过程中，炎症贯穿全程，CＲP，IL-1，TNF-α 等炎
症因子发挥了至关重要的作用。藤茶双氢杨梅素可
显著降低 AS大鼠血清 CＲP 和 IL-1 水平，通过影响
激活补体系统、单核细胞的吞噬作用、炎症因子的释
放、诱导炎症因子的表达、血管平滑肌细胞凋亡的过
程［11-13］，抑制 AS的发展。
藤茶双氢杨梅素可显著抑制 AS 大鼠主动脉弓
sPLA2-ⅡA mＲNA 的表达，从而影响 sPLA2-ⅡA 的
形成，修饰的 LDL颗粒，影响炎症介质如白三烯、前
列腺素、血小板激活因子等水平，参与粥样斑块的炎
症和免疫过程，达到防治 AS效果。这和 sPLA2-ⅡA
的生理功能密切相关，sPLA2-ⅡA 为钙依赖的磷脂
酶家族，在 AS的形成和发展的病理过程中，起着重
要的作用。能够水解细胞膜和脂蛋白磷脂的第 2 位
酰基，产生溶血磷脂、游离脂肪酸及许多炎症因子如
白介素、血小板激活因子等的前体［14］。
研究表明 sPLA2-ⅡA 和 CＲP，两者之间存在紧
密的联系，在 AS 的治疗中共同影响 AS 的发展进
程［15-16］。实验结果表明，藤茶双氢杨梅素可显著抑
制 AS 大鼠主动脉弓 sPLA2-ⅡA mＲNA 的表达，且
可显著降低 AS大鼠血清 CＲP 和 IL-1 水平，提示藤
茶双氢杨梅素抗 AS的药理活性可能涉及到 sPLA2-
ⅡA和 CＲP 调节通路。藤茶双氢杨梅素具有影响
AS脂质代谢关键酶的表达、影响脂质代谢、影响血
清炎症因子水平的特性，提示其抗 AS 活性具有多
靶点、作用的多环节的特点，更为详实的分子生物学
机制，还有待进一步研究。
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［责任编辑 周冰冰］
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