全 文 ：收稿日期:2012-04-01 接受日期:2012-07-10
基金项目:河南省卫生厅科技创新人才工程(4049) ;河南省科技
厅重点项目(122102310053)
* 通讯作者 Tel:86-378-3880680;E-mail:kangweny@ hotmail． com
天然产物研究与开发 Nat Prod Ｒes Dev 2013，25:1089-1091，1129
文章编号:1001-6880(2013)8-1089-04
HPLC法测定卷柏及其炮制品中穗花杉双黄酮的含量
吴彩霞1，2，杨宇婷1，康文艺1*
1河南大学中药研究所，开封 475004;2河南省疾病控制中心，郑州 450003
摘 要:采用 HPLC方法测定卷柏及炮制品中穗花杉双黄酮的含量。方法:Shim-pack VP-ODS柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相:甲醇-0． 1%磷酸水(65∶ 35) ;流速:0． 8 mL /min;检测波长:337 nm;柱温:25 ℃。实验结果表
明，卷柏生品中穗花杉双黄酮的含量为 0． 84%，焦卷柏为 1． 07%，卷柏炭为 0． 53%。不同的炮制方法对穗花杉
双黄酮的含量产生不同的影响。
关键词:HPLC;卷柏;炮制;穗花杉双黄酮
中图分类号:Q946． 91;Ｒ284． 1 文献标识码:A
Determination of Amentoflavone Contents in Selaginella
tamariscina and Different Processed Products by HPLC
WU Cai-xia 1，2，YANG Yu-ting 1，KANG Wen-yi 1*
1 Institute of Chinese Materia Medica，Henan University，Kaifeng 475004，China;
2Henan Center for Control Disease and Prevention，Zhengzhou 450003，China
Abstract:The objective of this study is to determine the concentrations of amentoflavone in Selaginella tamariscina and
different processed products by high performance liquid chromatography (HPLC)． The HPLC separation was performed
on Shim-pack VP-ODScolumn (4． 6 mm × 250 mm，5 μm)and detected with DAD at the wavelength 337 nm． The iso-
cratic elution was carried out with methanol -0． 1% phosphoric acid in water (65∶ 35)as the mobile phase at a flow rate
of 0． 8 mL /min at 25 ℃ ． The results indicated that the concentrations of amentoflavone detected in S． tamariscina，fried
S． Tamariscina and S． tamariscina coke were 0． 84%，1． 07% and 0． 53% respectively． Different processing methods
caused the different concentrations of amentoflavone in these samples．
Key words:HPLC;Selaginella tamariscina;processing;amentoflavone
卷柏为蕨类植物门卷柏科 Selaginellaceae 卷柏
属植物，约有 700 种，广泛分布于全世界。我国约有
50 种，分布全国各地，主产于湖南、福建、四川、陕
西、江西、浙江等地。春秋两季采挖，以春季采挖者
为最佳［1］。2010 年版《中华人民共和国药典》收载
了卷柏 Selaginella tamariscina (Beauv．)Spring 或垫
状卷柏 S． puluinata (Hook． et Gret．)Spring 全草入
药［2］。卷柏始载于《神农本草经》列为上品性味辛、
平。具有活血通经之功效。用于经闭痛经、瘤瘦痞
块、跌打损伤等症。卷柏炭能化瘀止血，用于吐血、
崩漏、便血、脱肛等症。近年来对卷柏的化学成分，
药效等进行了大量的研究。卷柏的主要化学成分:
黄酮类如:芹菜素、穗花杉双黄酮、扁柏双黄酮等;酚
类;生物碱;有机酸等。卷柏的药理作用主要有:增
强免疫和抗肿瘤;缩短凝血时间升高血小板;抗菌抗
炎;镇痛镇静等［3-6］。
近年来，卷柏炮制方面的文献报道主要针对炮
制前后卷柏的化学成分和药理作用的变化，未见对
炮制前后卷柏中穗花杉双黄酮的含量变化的研究。
本课题组对卷柏进行了持续的研究［7-9］，在此基础
上，首次采用 HPLC法对卷柏生品、焦卷柏和卷柏炭
中穗花杉双黄酮的含量进行检测和分析，探讨炮制
对卷柏中穗花杉双黄酮含量的影响，为科学、合理的
使用该类药材提供依据。
1 仪器与材料
岛津液相色谱仪 LC-2010CHT，自动进样器，
Class-VP 工作站，四元低压梯度泵，SPD-10AVP 紫
外-可见检测器;KQ3200 型超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司) ;电子天平(梅特勒-托利多仪器有
限公司) ;101 型电热鼓风干燥箱(北京中兴伟业仪
器有限公司)。
穗花杉双黄酮对照品(自制，纯度 ＞ 98%) ;甲
醇为色谱纯，水、磷酸为分析纯;卷柏于 2007 年 7 月
采集于贵州都匀，经河南大学中药研究所生药教研
室李昌勤副教授鉴定为卷柏科植物卷柏 Selaginella
tamariscina (Beauv．)Spring的干燥全草。
2 实验方法
2． 1 药材的炮制［9-12］
卷柏生品:取卷柏拣去杂质，除去残根，清水洗
净，切段，阴干;焦卷柏:取净卷柏段 500 g，置锅内用
温火加热炒至焦黄色，取出，放凉;卷柏炭:取净卷柏
段 500 g，置锅内用中火加热炒至焦黑色，取出，放
凉。
2． 2 色谱条件
色谱柱 Shim-pack VP-ODS 柱(4． 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相:甲醇-0． 1%磷酸水(65∶ 35) ;流
速:0． 8 mL /min;检测波长:337 nm ;柱温:25 ℃。
2． 3 对照品溶液的制备
精密称取穗花杉双黄酮标准品 1． 0 mg，加少量
甲醇溶解，置于 25 mL容量瓶，用甲醇定容，摇匀，得
对照品溶液。色谱图见图 1。
图 1 穗花杉双黄酮对照品的 HPLC色谱图
Fig. 1 HPLC chromatogram of amentoflavone standard
2． 4 供试品溶液的制备
将各供试药材粉碎，过 80 目筛。精密称取各供
试样品 30 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加入 8 mL 甲
醇，冷浸过夜，用超声破提取仪提取 40 min，放冷后
用甲醇定容至 10 mL，用 0． 45 μm微孔滤膜过滤，即
得供试品溶液。
3 实验结果
3． 1 线性关系考察
取对照品溶液，照 2． 2 项下的色谱条件，依次进
样 2、4、6、8 和 10 μL，记录相应的色谱面积，以峰面
积为纵坐标(Y) ，系列对照品溶液浓度为横坐标
(X)进行线性回归。回归方程为 Y = 6 × 104 X-
30529，r = 0． 9999，穗花杉双黄酮进样量在 0． 08 ～
0. 40 μg之间呈良好的线性关系。
3． 2 精密度考察
日内精密度:取对照品溶液，在上述色谱条件
下，连续进样 5 次，每次 10 μL，求得穗花杉双黄酮
峰面积积分值的 ＲSD为 0． 52%，表明仪器的日内精
密度良好。
日间精密度:取对照品溶液，在上述色谱条件
下，重复三天，每天连续进样 6 次，求得穗花杉双黄
酮峰面积积分值的 ＲSD为 1． 38%，表明仪器的日间
精密度良好。
3． 3 重复性考察
精密称取 5 份卷柏生品，按 2． 4 项下方法制备
成供试溶液，在上述色谱条件下，分别进样，每次 10
μL，测得穗花杉双黄酮含量的 ＲSD 为 0． 19%，表明
重现性良好。
3． 4 稳定性考察
取卷柏生品，按 2． 4 项下方法制备成供试溶液，
在上述色谱条件下，分别于 0、2、4、8、16 h 吸取供试
品溶液 10 μL，进样分析并记录峰面积，穗花杉双黄
酮的含量的 ＲSD 为 0． 78%，表明样品溶液在 16 h
内稳定。
3． 5 加样回收率考察
精密称取已知含量的卷柏生品 9 份，每份 15． 0
mg，置于 10 mL 容量瓶。将样品随即分为三份，各
加入 0． 13 mg /mL的标准品溶液 0． 5、1． 0、1． 2 mL，
按 2． 4 项下方法制成供试品溶液。在上述色谱条件
下进样，吸取供试品溶液 10 μL进行分析，计算回收
率，结果见表 1 测得穗花杉双黄酮的加样回收率在
95． 00% ～ 98． 46%之间，ＲSD为 1． 23%(n = 9)。
表 1 加样回收率实验结果
Table 1 Ｒecoveries of amentoflavone at three concentration levels
样品量
Content (mg)
加入标准品
Standard spiked
(mg)
实测量
Amount detected
(mg)
回收率
Ｒecovery
(%)
平均回收率
Average
Ｒecovery Ｒate(%)
ＲSD(%)
0． 120 0． 065 0． 183 96． 92 96． 61 1． 23
0901 天然产物研究与开发 Vol. 25
0． 120 0． 065 0． 183 96． 91
0． 120 0． 065 0． 184 98． 46
0． 120 0． 130 0． 252 96． 92
0． 120 0． 130 0． 250 95． 38
0． 120 0． 130 0． 251 96． 15
0． 120 0． 160 0． 272 95． 00
0． 120 0． 160 0． 273 95． 62
0． 120 0． 160 0． 277 98． 13
3． 6 样品含量测定
取卷柏生品，焦卷柏和卷柏炭药材，按 2． 4 项下
方法制备成供试溶液，在上述色谱条件下进样，吸取
供试品溶液 10 μL 进行分析，平行做 3 次。结果见
图 2 和表 2。
图 2 卷柏生品及不同炮制品的 HPLC色谱图，A 卷柏生
品;B 焦卷柏;C 卷柏炭
Fig. 2 HPLC chromatograms of sample extracts of S． tamar-
iscina (A) ，fried S． Tamariscina (B)and S． tamaris-
cina coke (C)
表 2 样品测定实验结果(n = 3)
Table 2 Quantification results of the three samples (n = 3)
样品
sample
穗花杉双黄酮
amentoflavone (%)
卷柏生品 0． 84
焦卷柏 1． 07
卷柏炭 0． 53
4 讨论
本文首次采用 HPLC法对卷柏不同炮制品中穗
花杉双黄酮的含量进行测定。结果表明不同炮制方
法后，卷柏中穗花杉双黄酮的含量变化较大。焦卷
柏的含量远远高于卷柏生品，而卷柏炭的含量较卷
柏生品又有明显降低。清炒过程中温度升高，使药
材质地变的疏松，有利于黄酮的提取，致使穗花杉双
黄酮含量增加;而炒炭温度过高使其含量降低的原
因可能是温度过高黄酮被破坏。应用时要根据不同
的需要，采用不同的炮制方法。
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1901Vol. 25 吴彩霞等:HPLC法测定卷柏及其炮制品中穗花杉双黄酮的含量
的影响不是简单的线性关系。
蓖麻碱提取率的响应曲面的回归方程模型方差
分析和验证实验表明此方法可行。所得超声波法提
蓖麻碱的最佳工艺为:以甲醇为提取溶剂，超声时间
103． 03 min、超声功率 621． 05 W、料液比 1 ∶ 25 g /
mL，蓖麻碱的理想预测值为 2． 65‰，验证值为
2. 63‰，与预测值的相对误差为 0． 02‰。
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( 上接第 1091 页)
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