全 文 ：75
第 1 5 卷 第 2 期
2013 年 2 月
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报
JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCM
Vol. 15 No. 2
Feb .，2013
复方藤乌软膏是我院骨伤外科专家与药学科
研人员结合传统中医理论，运用现代制药技术，经过
反复实践共同研制而成的中药制剂。全方由鸡血
藤、生川乌、生草乌、海桐皮、自然铜等中药组成，具
有消肿止痛、续筋接骨等功效，临床中主要用于运动
劳损、急性扭伤、挫伤、闪伤及轻度骨折引起的疼痛。
本研究采用薄层色谱法对复方中主要有效成分乌头
碱进行定性鉴别，并用Wistar大鼠进行皮肤刺激性
试验、急性毒性试验，考察了该软膏皮肤使用的安全
性。
1 仪器与材料
LDZ5-2型低速自动平衡离心机（北京医用离
心机厂），BSA223S型电子分析天 平（赛多利斯科
学仪器有限公司），电热恒温水浴锅（龙口市先科
仪器公司），薄层层析硅胶G型（青岛海洋工厂），
乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号 ：
110720-200410），生川乌、生草乌等药材（济南宏济
堂药材公司），乙醚、二氯甲烷、环己烷、二乙胺等试
剂均为分析纯。
SPF级 健 康Wistar大 鼠，雌 雄 各 半，由 山 东
大学动物实验中心提供，合格证号 ：SCXK（鲁）
2009000101。 实 验 室 温 度 20~25 ℃，湿 度（50±
20）%，照明为12 h明暗交替。
2 方法与结果
2.1 处方及制备
2.1.1 处方组成
鸡血藤、生川乌、生草乌、海桐皮、透骨草、黄
柏、肉桂、地榆炭、自然铜、樟脑等。
2.1.2 制备工艺
取方中鸡血藤、生川乌、生草乌、海桐皮、透
骨草等粉碎成粗粉，加入10倍量食醋共同煮沸30
min，倒入不锈钢桶内，继续加10倍量食醋，浸泡
3~5 d，过滤，制成药液（A）；地榆炭、自然铜等混合，
烘干，粉碎制成极细粉，过120目筛，得药粉（B）。取
1000 mL A液，加入400 g B粉、200 g淀粉，充分混合
均匀以无包块为度，得混合物（C）。另取剩余A液
加热浓缩至2∶1，再加入C，继续加热搅拌至呈稠膏
状，待温度降至50 ℃，加入樟脑50 g （以乙醇溶解）
搅匀，分装即得。
2.2 乌头碱的薄层色谱鉴别
2.2.1 供试液的制备 [1]
取本品10 g，置具塞碘量瓶中，加入氨水5 mL
润湿1 h，加乙醚50 mL，时时振摇，放置6 h，摇匀，
滤过，滤渣用20 mL乙醚分次洗涤，合并滤液及洗涤
复方藤乌软膏制备及皮肤安全性考察
赫清雪1，2，王爱武1，王楠楠1，2
（1.山东大学附属省立医院药剂科，山东 济南 250021 ；2.山东中医药大学，山东 济南 250355）
摘 要：目的 ：制备复方藤乌软膏，建立复方中主要成分乌头碱的定性鉴别方法，并考察该软膏皮肤用药的安
全性。方法 ：遵循传统理论和方法制备复方藤乌软膏，采用薄层色谱法，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）
为展开剂对方剂中的有效成分乌头碱进行鉴别，采用Wistar大鼠进行皮肤刺激性试验、急性毒性试验。结果 ：复方
藤乌软膏中乌头碱薄层鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰。该制剂对大鼠完整、破损皮肤均无急性毒性，对破损皮肤
有轻微刺激性，可自行缓解。结论 ：复方藤乌软膏定性方法简单、专属性强，是一种较安全的外用制剂。
关键词：复方藤乌软膏 ；制备 ；薄层色谱 ；皮肤刺激性试验 ；急性毒性试验
中图分类号：R283 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 02- 0075- 02
收稿日期：2012-08-23
作者简介：赫清雪（1988-），女，黑龙江伊春人，硕士研究生，研究方向 ：中药合理应用的临床与实验研究。
通讯作者：王爱武（1966-），女，山东巨野人，副主任药师，硕士研究生导师，研究方向 ：中药合理应用的临床与实践研究。
E-mail ：wawyy@sohu.com。
Experimental Study on Preparation and Cutaneous Safety of Complex Tengwu Ointment
HE Qingxue1，2，WANG Aiwu1，WANG Nannan1，2
（1.Provincial Hospital Affiliated to Shandong University，Jinan 250021，Shandong，China ；
2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，Shandong，China）
Abstract ：Objective ：To prepare and establish a qualitative method for Compound Tengwu Ointment，
and to explore the safety of transcutaneous drug delivery. Methods ：Followed the traditional theories and
methods，Compound Tengwu Ointment was made. Aconitine was identified by TLC，and developing solvent
was Cyclohexane- ethyl acetate-diethylamine（10∶7∶1）. Skin irritation test and acute toxicity test were
conducted in Wistar rats. Result ：The TLC spots of Compound Tengwu Ointment were clear with good
resolution and free from interference of negative samples. Compound Tengwu Ointment had no irritation
to the integral skin and low-grade irritation to the damage skin of rats，but it was easy to be disappeared.
Conclusion ：The method is simple，precise and specific. Compound Tengwu ointment belongs to the safe
preparation.
Key words ：Compound Tengwu Ointment ；preparation ；TLC ；dermal irritation ；acute toxicity test
DOI：10.13194/j.jlunivtcm.2013.02.77.heqx.067
76
辽 宁 中 医 药 大 学 学 报 1 5 卷
液，低温挥干，残渣加二氯甲烷使成1 mL，作为供试
品溶液。另取乌头碱对照品，加二氯甲烷制成每毫
升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
2.2.2 阴性供试液的制备
按处方比例取除生川乌、生草乌以外的药材，
再按“2.1.2”项下工艺制备样品，同“2.2.1”项下处
理方法处理阴性供试液。
2.2.3 层析条件
参照 2010年版中国药典（一部）附录ⅥB薄层
色谱法[2]项下试验，吸取供试品溶液20 μL及对照
品溶液5 μL点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-
乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）为展开剂，展开，取出，
晾干，喷稀碘化铋钾试液观察。供试品色谱中，在与
对照组色谱相同位置上，显相同颜色的斑点，阴性对
照无干扰。
2.3 皮肤刺激性试验
Wistar大鼠16只，雌雄各半，平均分为2组，实
验采用同体左右侧自身对比法，分为完整皮肤组及
破损皮肤组。试验前24 h大鼠对背部进行剃毛处理，
去毛范围为左、右各3 cm×3 cm。完整皮肤组给药
前检查去毛皮肤是否有损伤，有损伤的皮肤不宜进
行完整皮肤实验。破损皮肤组在用药部位用消过毒
的手术刀划“井”字并以渗血为度。对受试动物左
侧去毛区均匀涂抹藤乌软膏2 g/kg，右侧对照区涂基
质，两侧均用玻璃纸及2层纱布覆盖，以无刺激胶布
及绷带缠绕固定。贴敷6 h后除去受试药物并用生
理盐水清洁给药部位。去除药物后0.5、1、24、48及
72 h时观察并记录涂药部位有无红斑和水肿及恢复
情况，计算每一观察时间点各组受试物及基质皮肤
反应积分平均分值，按照表1进行刺激强度评价。
表1 皮肤刺激反应评分标准
刺激反应 分值
红斑
无红斑 0
轻度红斑（勉强可见） 1
中度红斑（明显可见） 2
重度红斑 3
紫红色红斑到轻度焦痂形成 4
水肿
无水肿 0
轻度水肿（勉强可见） 1
中度水肿（明显可见） 2
重度水肿（皮肤隆起1 mm，轮廓清晰） 3
严重水肿（皮肤隆起1 mm以上并有扩大） 4
最高总分值 8
当记录分值为0~0.49时刺激强度为无刺激，
0.5~2.99为轻度刺激，3~5.99为中度刺激，6分及以
上为强刺激。
实验结果见表2，大鼠完整皮肤两侧均未见红
斑及水肿发生，皮肤刺激反应评分为0，皮肤刺激强
度评价为无刺激性 ；大鼠损伤皮肤，去除药物后有
轻微红斑及水肿现象，1 h后红肿基本消失，72 h破
损皮肤基本结痂恢复完全。
2.4 皮肤急性毒性实验
Wistar大鼠24只，雌雄各半，平均分为3组，即
高剂量组、低剂量组与基质对照组。试验前24 h进
行背部剃毛处理，去毛范围为高剂量组4 cm×4 cm，
低剂量组3 cm×3 cm。高剂量组涂藤乌软膏5 g/kg，
低剂量组为2 g/kg，对照组给予软膏基质2 g/kg，用玻
璃纸及2层纱布覆盖，以无刺激胶布及绷带缠绕固
定，贴敷6 h后去除受试药物，用生理盐水除去残留
药物后连续观察7 d并记录受试动物的体重变化、饮
食、外观、行为、分泌物、死亡情况及中毒反应等，按
规定方法[3]进行毒性反应评价。7 d后对大鼠进行
大体解剖观察有无病理变化。
表2 大鼠皮肤刺激性实验结果（n=8）
组别 药物 积分总和 平均反应值 皮肤刺激强度0.5 h 1 h 24 h 48 h 72 h 0.5 h 1 h 24 h 48 h 72 h
完整皮
肤组
藤乌软膏 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 无刺激性
软膏基质 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 无刺激性
破损皮
肤组
藤乌软膏 5 1.1 0 0 0 1.25 0.27 0 0 0 轻度刺激性
软膏基质 4 1 0 0 0 1 0.25 0 0 0 轻度刺激性
结果显示，大鼠高剂量及低剂量组动物7 d内体
重饮食、外观、行为、分泌物等均未见异常反应，各组
动物体重变化见表3，所有动物无死亡，实验结束解
剖后各脏器无明显病理变化，各脏器指数见表4。
表3 复方藤乌软膏对大鼠体重的影响（kg，n=8，x—±s）
组别 给药前 给药7d后
高剂量组 0.312±0.030 0.339±0.040
低剂量组 0.302±0.045 0.326±0.049
基质对照组 0.309±0.051 0.334±0.045
注 ：与对照组比较，P>0.05。
表4 复方藤乌软膏皮肤急性毒性试验
脏器系数（g/100 g，n=8，x—±s）
组别 心 肝 脾 肺 肾
高剂量组 0.41±0.02 3.83±0.21 0.31±0.04 0.67±0.06 0.91±0.07
低剂量组 0.42±0.01 3.76±0.11 0.28±0.03 0.73±0.06 0.96±0.07
基质对照组 0.43±0.07 4.34±1.30 0.30±0.07 0.69±0.05 0.81±0.02
注 ：与对照组比较，P>0.05。
3 讨 论
复方藤乌软膏是在反复工艺优化和临床验证
的基础上，遵循传统理论和方法制备而成的。制备
糊化过程中，要不断的搅拌，并控制好加热时间，方
可制得均匀细腻的软膏。方中含毒性中药生川乌、
生草乌，其主要成分乌头碱既是毒性成分又是有效
成分。本文首次对制剂中的乌头碱进行了薄层定性
鉴别，参考文献考查了乌头碱的多种提取方法，因为
乌头碱热不稳定，最终确定提取方法为乙醚振摇提
取6 h为最佳方法。
复方藤乌软膏，组方严谨、配伍合理，是我院骨
伤外科及推拿科常用的传统中药制剂，使用方法为
用75%的酒精棉球由内向外清洗患部，将药膏涂于
上面，再用无菌纱布包扎，隔日换药1次。临床上对
各类软组织损伤、骨折、关节脱位的疼痛、活动受限
等的治疗显示了良好的效果。本研究初步考察了该
制剂皮肤用药的安全性，因制剂处方组成符合中医
药理论，有长期的临床应用经验，故采用一种动物进
行实验，按临床给药途径进行观察，结果证明复方藤
乌软膏对大鼠完整皮肤无毒性反应与刺激性，对破
损皮肤有轻微的刺激性，在24 h内可自行缓解，显示
是一种安全性较好的外用制剂，值得推广应用。◆
参考文献
[ 1 ] 随志刚，陈明玉，刘志强，等.草乌中乌头类生物碱提取方法比
较研究[ J ] .时珍国医国药，2009，20（3）：513-514.
[ 2 ] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[ S ] .2010年
版.北京 ：中国医药科技出版社，2010 ：附录199-201.
[ 3 ] 徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学[ M ] .3版.北京 ：人民
卫生出版社，2002 ：235.