全 文 ：收稿日期:2008-07-17;　修订日期:2008-12-10
基金项目:广西科学基金资助项目(No.桂科基 0639052)
作者简介:郑作文(1957-),男(汉族),山东沂源人 ,现为广西中医学院药
学院教授 ,硕士学位 ,主要从事抗肿瘤中草药研究工作.
藤茶总黄酮对人胃癌 SGC-7901
细胞增殖抑制作用的实验研究
郑作文1 ,郭成贤 2 ,毛　健 2 ,谭　为2
(1.广西中医学院 ,广西 南宁　530001;　2.广西中医学院 2006级研究生 ,广西 南宁　530001)
摘要:目的 探讨藤茶总黄酮的体外抗肿瘤作用。方法 采用 MTT法 、生长曲线法 、细胞集落形成法观察藤茶总黄酮对人
胃癌 SGC-7901细胞抑制作用。结果 藤茶总黄酮能明显抑制体外培养的 SGC-7901细胞的生长 , MTT法 IC50为 20.71
μg· ml-1;细胞生长曲线法提示其对 SGC-7901细胞的生长也有明显的抑制作用;集落形成法 , 当药物浓度在 9.90μg·
ml-1以上时抑制率为 100%,当药物浓度为 6.60μg· ml-1时抑制率为 69.80%, 当药物浓度为 4.40μg· ml-1时抑制率为
30.23%。结论 藤茶总黄酮对体外 SGC-7901细胞的生长有明显的抑制作用。
关键词:藤茶总黄酮;　抗肿瘤作用;　SGC-7901;　细胞株
中图分类号:R730.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)05-1158-02
InhibitoryEffectsofVineTeaExtractonProliferationofSGC-7901 HumanStomach
CancerCels
ZHENGZuo-wen1 , GUOCheng-xian2 , MAOJian2 ,TANWei2
(1.GuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, Nanning530001, China;2.GraduateStudentof2006
GuangxiTraditionalChineseMedicalUniversity, Nanning530001, China)
Abstract:ObjectiveToinvestigatetheanti-tumorefectofVineteaextractinvitro.MethodsThegrowthinhibitionwasana-
lyzedbyMTT, celcolonyandcelgrowthcurvemeasurementinthestomachcancercellSGC-7901.ResultsVineteaextract
couldobviouslyinhibitthegrowthofculturedSGC-7901 cels, theIC50 inMTTassaywas20.71 μg· ml-1;Vineteaextractcouldobviouslyafectthetumorcelgrowth.Theinhibitoryratioincelcolonyassaywas100 % whenmedicinedensitywasover
9.90 μg· ml-1 , therepressiveratioincellcolonyassaywas69.80 %whenmedicinedensitywas6.60μg· ml-1;therepressive
ratioincellcolonyassaywas30.23% whenmedicinedensitywas4.40 μg· ml-1.ConclusionVineteaextractcaninhibitthe
growthofSGC-7901 invitro.
Keywords:Vineteaextract;　Anti-tumoreffect;　SGC-7901;　Celline
　　藤茶 Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang系葡
萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄的嫩茎叶 [ 1] 。藤茶中含有大量黄
酮类有效成分 , 用分光光度法对藤茶所含黄酮成分进行含量测
定 , 以蛇葡萄素为指标 , 藤茶中总黄酮的含量高达 45.52%[ 2] 。
多项药理学研究表明 , 藤茶具有调节血糖和血脂 、抗炎 、抗氧化 、
抗病毒 、抗肿瘤等作用 [ 3 ～ 7] ,其中抗肿瘤作用是近年来研究的热
点。本研究对从藤茶提取分离得到的粉状淡黄色结晶进行抗人
胃癌 SGC-7901细胞研究 , 以进一步揭示藤茶总黄酮的抗肿瘤
作用。
1　材料与仪器
1.1 　药物 藤茶总黄酮由广西中医学院中药化学教研室通过
柱层折提取分离 , 为一粉状淡黄色结晶 , 为黄酮类化合物 , 经含
测 , 纯度为 91.1%。
1.2　细胞 人胃癌细胞 SGC-7901, 由广西中医学院分子生物
学实验中心惠赠。
1.3　试剂 RPMI-1640干粉(美国 Gibco公司产品);新生牛血
清(杭州四季青公司产品 ,批号 031101);四甲基二氮唑蓝(北京
拜尔迪生物公司分装 , Amresco0793);二甲基亚砜(博大泰克公
司产品);0.25%胰蛋白酶(美国 HycloneLab公司产品);注射用
生理盐水(徐州莱恩药业公司产品 ,批号 051122)。
1.4　仪器 SUNRISE自动酶标仪(奥地利 TECAN公司产品);
311二氧化碳培养箱(美国 ThermoForma公司产品);DLF560型
超净工作台(荷兰 clearAirTechniekbv公司产品);细胞培养瓶
(加拿大 BIOFIL公司产品);96孔板(上海 Sunub科技发展公司
产品);倒置显微镜(广西梧州光学仪器厂产品);微量移液器(法
国 Pipetman公司产品);十万分之一电子天平(德国赛多利斯产
品)。
1.5　培养液及试剂的配制 RPMI-1640不完全培养液 , 不加血
清的 RPMI-1640培养液;RPMI-1640完全培养液 , 10%新生牛
血清 +RPMI-1640不完全培养液。
2　方法与结果
2.1　 SGC-7901细胞培养 在长满 SGC-7901细胞的培养瓶
内加 0.25%胰酶 , 37℃消化 3～ 4 min,加培养液吹打 , 1∶3传代 ,
3 ～ 5 d长满。消化后计数 , 配制成 10 ×104 /ml细胞悬液 , 置
37℃, 5%CO2培养箱中培养备用。
2.2　 MTT法测定 [ 8, 9] 将 SGC-7901细胞(1 ×105 /ml)接种到
96孔细胞培养板上 , 每孔 190 μl, 并设空白对照组(只加 RP-
MI1640完全培养液 , 不加细胞)。藤茶总黄酮 8个剂量组分别加
入不同浓度的藤茶总黄酮 10 μl/孔(终浓度分别为 75.00, 50.00,
33.37, 22.26, 14.84, 9.90, 6.60, 4.40 μg· ml-1), 每个浓度均设
4个复孔 , 同时设细胞对照孔(只加细胞和 RPMI1640完全培养
液 , 不加药物)。在 37℃, 5%CO2培养箱中培养 48 h, 加入 MTT
(5 mg· ml-1)10μl继续培养 4 h, 弃上清 , 用 RPMI-1640不完
全培养液洗板 2次 ,加入 DMSO150 μl, 振荡 10 min, 以酶标仪在
550 nm处测各孔吸光度值(OD), 计算抑制率 , 用对数回归方程
求出半数杀伤浓度(IC50)。肿瘤细胞生长抑制率按下式计算。
肿瘤细胞生长抑制率(%)=(1-实验组平均 OD值 /对照组
平均 OD值)×100%
2.3　生长曲线法测定 [ 8 , 9] 取对数生长期的细胞 , 用 10%新生牛
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5
血清的 RPMI1640培养液配成 1×104 /ml的细胞悬液 , 接种于 96
孔培养板中 , 每孔 190μl,空白对照组每孔加入 10 μl的 RPMI-
1640完全培养液。藤茶总黄酮 5个剂量组分别加入终浓度分别
为 22.26, 14.84, 9.90, 6.60, 4.40 μg· ml-1的藤茶总黄酮 , 10μl/
孔 , 每个浓度均设 4个复孔 ,对照组加入等体积的细胞培养液 ,置
37℃, 5%CO2培养箱中培养 , 分别于用药后第 0, 1, 2, 3, 4天用台
盼蓝拒染法进行活细胞计数。以每毫升活细胞数为纵坐标 ,时间
为横坐标绘制细胞生长曲线图。
2.4 　集落形成法 [ 8, 9] 取对数生长期的单层培养细胞 , 用0.25%
胰酶溶液消化并吹打成单个细胞悬液 , 把细胞悬浮在含 10%新
生牛血清的 RPMI1640培养液中备用。将悬浮细胞作适当稀释 ,
接种于 24孔板中 ,每孔加入 1 ml浓度为 50个 /ml的细胞 , 并作
十字摇动 , 混匀。空白对照组每孔加入 10μl的 RPMI-1640完全
培养液。藤茶总黄酮 4个剂量组分别加入不同浓度的藤茶总黄
酮 1ml/孔(终浓度为 14.84, 9.90, 6.60, 4.40 μg· ml-1),每个浓
度均设 3个复孔 , 对照组加入等体积的溶剂。混匀后将 24孔板
移入 CO
2
箱 ,在 37℃, 5%CO
2
及饱和湿度环境下 , 静止培养 7 d。
弃去培养液 , 用姬姆萨应用液染染色 , 在镜下计数大于 50个细胞
的克隆数。
抑制率(%)=(1-实验组克隆数 /对照组克隆数)×100%
3　结果
3.1　MTT法 用 MTT法观察不同浓度的藤茶总黄酮对体外培养
的 SGC-7901细胞的影响 , 结果如表 1所示。当药物终浓度为
75.00, 50.00, 33.37, 22.26, 14.84, 9.90 μg· ml-1时 ,抑瘤率与细
胞对照组相比差异有非常显著性(P<0.01);当藤茶总黄酮终浓
度为 6.60 μg· ml-1时 ,抑瘤率与细胞对照组相比差异有显著性
(P<0.05), 提示其有较强的体外抑制 SGC-7901细胞作用。 通
过抑瘤率对药物浓度作对数回归方程 , 得到药物对 SGC-7901
细胞的半数杀伤浓度(IC50)为 20.71 μg· ml-1 , r=99%。结果
见表 1。
表 1　MTT法藤茶总黄酮对SGC-7901细胞的抑制作用( x±s)
组别 药物浓度C/μg· ml-1 OD值 抑瘤率(%)
IC50
/μg· ml-1
空白对照 - 1.160 ±0.110 - -
藤茶总黄酮 75.00 0.257 ±0.052＊＊ 77.89
50.00 0.373 ±0.055＊＊ 67.84
33.37 0.449 ±0.167＊＊ 61.29
22.26 0.565 ±0.087＊＊ 51.31 20.71
14.84 0.657 ±0.032＊＊ 43.41
9.90 0.703 ±0.167＊＊ 39.37
6.60 0.863 ±0.135＊ 25.62
4.40 1.046 ±0.123 9.84
　　与空白对照组比较 , ＊＊P<0.01, ＊P<0.05;n=4
3.2　生长曲线法 采用生长曲线法观察不同浓度的藤茶总黄酮
对体培养的 SGC-7901细胞的影响 , 结果如表 2所示 , 藤茶总黄
酮对体外培养的 SGC-7901细胞的增值表现出较强的抑制作
用 , 且成剂量 -效应关系。
表 2　生长曲线法藤茶总黄酮对 SGC-7901细胞的抑制作用( x±s)
组别 药物浓度C/μg· ml-1
细胞个数 /个· ml-1
0 h 24h 48h 72h 96h
空白对照 - 1.13 ±0.32 1.75±1.13 5.69±0.90 3.44±0.85 3.94±0.55
藤茶总黄酮 22.26 0.88±0.63 0.06±0.13＊＊ 0 0 0
14.84 1.31±0.13 1.13±0.63 0.75±0.20＊＊ 1.88±0.92＊ 1.94±0.38＊＊
9.90 0.94±0.24 0.81±0.80 1.31±0.90＊＊ 4.50±1.58 3.50±0.35
6.60 1.00±0.35 1.94±0.66 2.88±0.63＊＊ 4.00±1.80 5.75±1.17
4.40 1.06±0.47 1.75±0.61 3.56±0.74＊＊ 3.81±1.29 4.88±0.92
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P<0.01, ＊ P<0.05;n=4
3.3　集落形成法 用集落形成法观察不同浓度的藤茶总黄酮对
体外培养的 SGC-7901细胞的影响 , 结果如表 3所示 , 当藤茶总
黄酮终浓度为 14.84, 9.90 μg· ml-1时 , 抑制率为 100%;当藤茶
总黄酮终浓度为 6.60μg· ml-1时 ,抑制率为 69.8%, 与细胞对照
组相比差异有显著性(P<0.05);当藤茶总黄酮终浓度 4.40 μg
· ml-1时 , 抑瘤率为 30.23%, 提示其有较强的体外抑制 SGC-
7901细胞作用。
表 3　集落形成法藤茶总黄酮对 SGC-7901细胞的抑制作用( x±s)
组别 药物浓度 C/μg· ml-1 集落个数 抑制率(%)
空白对照 - 4.30 ± 0.58 -
藤茶总黄酮 14.84 0.00 ± 0.00＊＊ 100.0
9.90 0.00 ± 0.00＊＊ 100.0
6.60 3.00 ± 1.00＊ 69.80
4.40 1.30 ± 1.53 30.23
　　与空白对照组比较 , ＊＊ P<0.01, ＊ P<0.05;n=4
4　讨论
恶性肿瘤是世界医学的一大难题 , 严重威胁着人类的健康。
由于传统的抗肿瘤治疗 ,手术 、放疗 、化疗 , 毒副作用大 、患者生存
质量低 , 人们开始从中草药中寻找新的抗肿瘤药。我国是一个中
草药资源丰富的大国 ,从我国传统医药中筛选新的抗肿瘤药物 ,
日益受到国内外学者的重视。 黄酮类化合物是一类存在于多种
植物中的多酚化合物 ,具有多种药理作用 , 其中抗肿瘤作用是近
年来研究的一个热点。本文采用 3种体外抗肿瘤实验方法———
MTT法 、生长曲线法 、集落形成法 , 均证实藤茶总黄酮对人胃癌
SGC-7901细胞有明显的抑制作用 ,且呈现出一定的剂量依赖趋
势。本实验研究提示藤茶总黄酮的抗肿瘤作用部位不在线粒体 ,
因为 MTT法只适用于作用部位不在线粒体的药物;从生长曲线
法可以看出藤茶总黄酮在作用 48h时对 SGC-7901抑制作用最
强;同时由集落形成法可以知道藤茶总黄酮对肿瘤干细胞有较强
的抑制作用。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.5 时珍国医国药 2009年第 20卷第 5期