全 文 ：[研究简报 ]
树脂吸附层析法分离喜树果中的喜果甙
王瑞芳 , 李家政 , 史作清 , 施荣富 , 王　重 , 欧来良
(南开大学吸附分离功能高分子材料国家重点实验室 , 高分子化学研究所 , 天津 300071)
关键词　 吸附树脂 ; 喜果甙 ; 层析分离
中图分类号　 O647. 3　　　　文献标识码　 A　　　　文章编号　 0251-0790( 2003) 08-1534-03
收稿日期: 2002-08-01.
基金项目: 国家自然科学基金 (批准号: 29974015)资助 .
联系人简介: 史作清 ( 1937年出生 ) ,男 , 教授 , 博士生导师 , 主要从事功能高分子材料的研究 .
自 1966年 Wall等 [1 ]首次从喜树植物中分离出喜树碱后 , 至今已有 20多种化学成分从中分离出
来 , 包括喜树碱 ( Campto thecine, CPT)、 10-羟基喜树碱、 11-羟基喜树碱、 10-甲氧基喜树碱、 喜树次
碱、 白桦脂酸及喜果甙 (Vincoside-lactam , V CS-LT)等 [ 2] . 研究表明 , 喜树碱类化合物和喜果甙均具
有抗癌活性 [3～ 5 ] . 从喜树果中分离喜果甙对充分利用我国丰富的喜树资源具有重要意义 . 目前文献报
道的分离提取喜果甙方法主要是溶剂萃取和氧化铝柱层析法 [ 6] , 过程复杂 , 收率很低 . 本文采用树脂
吸附法对喜果甙进行分离纯化 , 再经重结晶 , 得到喜果甙纯品 , 使提取工艺大大简化 , 收率显著提高 .
1　实验部分
1. 1　树脂　 X-5树脂 (南开大学化工厂提供 ) , 比表面积 550 m2 /g; 超高交联吸附树脂 (自制 ) , 比表面
积 400 m2 /g( BET法测定 ) . 树脂在使用前均先用大量工业乙醇淋洗 , 再用水洗 .
1. 2　喜果甙的高效液相色谱 ( HPLC)检测　色谱条件: 色谱柱 KromasilTM C18, 5μm, 150 mm×
4. 6 mm , 室温 ; 流动相为体积分数 30%乙腈水溶液 , 流速 0. 8 mL /min; 进样量 20μL, Wa ters 484紫
外检测器 , 检测波长 256 nm.
1. 3　喜果甙的提取分离及纯化　将喜树果 (Camptotheca acuminate )粉碎后 , 以体积分数为 50%的乙
醇水溶液经 80℃加热提取 . 提取液经旋转蒸发浓缩 , 冷却后过滤 , 得透明粗提液 .
在内径为 1. 5 cm的交换柱内装 X-5树脂 35 mL, 将喜树果粗提液 (约 300 mL)上柱后 , 先用 300
m L体积分数 30%乙醇水溶液预洗 , 以去除大量杂质 ; 再用 300 mL体积分数 50%～ 60%的乙醇水溶
液淋洗 , 收集流出液 , 并将流出液旋蒸浓缩 , 冷却后过滤 , 得到提纯液 .
在内径 0. 9 cm的交换柱内装超高交联吸附树脂 7 mL(湿球 ) , 将提纯液 ( 105 mL)以约 2 BV /h的
流速上柱 ( BV: 床体积 ) , 用 2 BV的水洗柱 , 再用 150 mL体积分数 50%乙醇水溶液淋洗 , 分步收集 ,
并同时进行 HPLC分析 . 结果表明 , 喜果甙首先被洗脱 , 待喜果甙几乎淋洗完全后 , 改用体积分数
70%的乙醇溶液淋洗 , 喜树碱也被淋洗下来 . 淋洗流速均为 1 BV /h. 将以喜果甙为主和以喜树碱为主
的流分分别合并 .
喜果甙的合并液经旋转蒸发浓缩至析出少量固体 , 放置冷却 , 析出大量针状晶体 , 过滤 . 针晶用
体积分数为 50%乙醇水溶液超声溶解 , 过滤 , 滤液经旋蒸浓缩 , 再次重结晶 . 经多次重结晶后的晶体
由淡黄色变为无色 . 最后将无色针晶晾干 , 于 50℃真空抽干至恒重 .
1. 4　喜果甙的结构鉴定　经多次重结晶所得的无色针状晶体 , 分别进行熔点 [Yanaco Yanagimo to熔
点测定仪 ( M FG. Co. ) ]、元素分析 ( Yanaco Chn Coder M T-3型元素分析仪 )、红外光谱 ( Bio-Rad FTS
135傅里叶红外光谱仪 , 溴化钾压片 )、 核磁共振 ( 1H NM R, 13 C NMR) [Bruker AM 400 M Hz核磁共
振仪 , 氘代二甲基亚砜 ( DM SO)作溶剂 ]和高分辨质谱 [ APEXⅡ FT-ICRM S( Bruker Daltonics Inc. )
质谱仪 ]等方法进行结构鉴定 .
Vo l. 24 高 等 学 校 化 学 学 报 　 No. 8　
2 0 0 3年 8月 　　 　　　　　 CHEM ICAL JOU RN AL OF CHINE SE UN IV ERS ITIES　　　　　　　　　 1534～ 1536　
2　结果与讨论
2. 1　喜果甙的提取分离及纯化结果　喜树果粗提液经 HPLC分析 (见图 1) , 除杂质峰外 , 主要有 2个
Fig. 1　 Chromatogram of crude camptotheca
acum inata
活性成分峰 , 保留时间为 7 min左右的峰经喜树碱
标样 [ (+ )-Camptothecin 98% ( Acro s organics) ]对
照 , 确定为喜树碱 ( CPT) , 而保留时间为 13 min左
右的峰确定为喜果甙 ( V CS-LT) .
由图 1的峰面积可算出喜树果粗提液中喜树碱
的质量分数为 0. 379% , 喜果甙的质量分数为
1. 524% , 喜果甙含量远比喜树碱高 . 经 X-5树脂
初步纯化后 , 喜树碱的质量分数提高到 4. 88% , 喜
果甙的含量提高到 21. 52% .
图 2为提纯液的 HPLC图 , 表明经 X-5树脂纯
化后杂质峰明显减小 . 喜树果提纯液经超高交联吸附树脂柱层析分离后 , 喜树碱的含量进一步提高至
15% , 喜果甙的含量提高至 60% . 喜果甙流出液的 HPLC谱图 (图 3)表明柱层析分离后 , 喜树碱已基
本分离出去 .
Fig. 2　 Chromatogram of solution refined by
X-5 resin
　 Fig. 3　 Chromatogram of VCS-LT′s solut ion obtained
by chromatography separation with
hypercrosslinked resin
2. 2　喜果甙的结构分析鉴定　准确称量所得无色针晶 , 用体积分数为 50%的乙醇水超声溶解 , HPLC
紫外检测为一单峰 , 表明所得晶体纯度已很高 , 可视为单一组分 .
该化合物的高分辨正离子二次离子质谱分析 , m /e: 498( M+ C26H30O8N2 ) , 337, 267, 171和 144.
其质谱裂解过程如图 4所示 .
Fig. 4　 The possible mass spect rum crack process of VCS-LT
m /e 498是分子离子峰 , 裂解失去 1个六碳糖得甙元离子 (m /e 337) , 而 m /e 267, 171, 144为甙
元碎片 . 测得熔点为 213～ 216℃ , 文献值为 210℃ [6 ] . 元素分析结果 ,实测值 (% ): C 59. 00, H 6. 25,
N 4. 98; C26 H30N2O8· 2. 5H2O计算值 (% ): C 57. 43, H 6. 49, N 5. 16. 红外光谱分析结果表明 ,
3 391 cm- 1为 N— H伸缩振动峰 , 3 200～ 3 400 cm- 1为多羟基峰 , 1 652 cm- 1为内酰胺基峰 , 1 575
cm
- 1为芳环峰 .
核磁共振谱 ( 1H NM R和 13 C NMR)谱峰归属列于表 1.
1535No. 8 王瑞芳等: 树脂吸附层析法分离喜树果中的喜果甙 　　　
Table 1　 1H NMR and 13CNMR data of voncoside-lactam(DMSO)*
H δ( 1H) C(sp 2) δ( 13C) C(sp 3) δ( 13C)
Ben zene 6. 957— 7. 423( m) 2 134. 138 3 52. 423
7 107. 232 5 40. 132
17, 18 5. 275— 5. 521( m) 8 126. 246 6 20. 762
9 117. 786 14 25. 709
22 7. 323( s ) 10 118. 600 15 31. 005
11 121. 042 20 42. 400
1 11. 1( s ) 12 111. 092 21 97. 904
13 136. 205 1′ 97. 913
Glc-1′ 4. 516— 4. 535( d) 16a 162. 435 2′ 73. 184
16 107. 781 3′ 77. 263
Glc-2′-6′ 4. 895— 5. 035( m) 17 146. 521 4′ 70. 083
18 119. 935 5′ 76. 485
22 132. 959 6′ 61. 057
　　* The s t ructure of vincosid e-lactam is show n in Fig. 4.
化合物的理化性质和光谱数据与文献 [6, 7 ]报道一致 .
喜树碱抗癌活性高 , 但水溶性差 , 毒副作用大 , 使临床应用受到一定的限制 ; 喜果甙上含有一个
葡萄糖 , 水溶性比喜树碱好 , 且也有抗癌活性 , 因此其抗癌机理、 抗癌活性大小、抗癌动力学及其药物
毒性等有待于进一步研究 .
参　考　文　献
[ 1 ]　Wall M . E. , Wani M. C. , Cook C. E. et al . . I. Am. Chem. Soc. [ J ] , 1966, 88( 16): 3 888— 3 889
[ 2 ]　 LIN Long-Ze(林隆泽 ) , SON G Chun-Qing(宋纯清 ) , XU Ren-Sh eng (徐任生 ) . Acta Chmica Sinica(化学学报 ) [ J] , 1982, 40( 1):
85— 88
[ 3 ]　 LIN Long-Ze(林隆泽 ) , ZHAO Zhi-Yuan(赵志远 ) , XU Ren-Sheng(徐任生 ) . Acta Chimica Sinica(化学学报 ) [ J] , 1977, 35( 3,
4): 227— 230
[ 4 ]　 LIN Long-Ze(林隆泽 ) , SHEN Ji-Hui (沈积慧 ) , HE Xiang (贺　湘 ) . Acta Chimica Sinica(化学学报 ) [ J ] , 1988, 46( 12): 1 207—
1 211
[ 5 ]　 LIN Long-Ze(林隆泽 ) , SONG Chun-Qing (宋纯清 ) , XU Ren-Sh eng (徐任生 ) . Acta Chimica Sinica(化学学报 ) [ J] , 1979, 37
( 3): 207— 214
[ 6 ]　X U Ren-Sh eng (徐任生 ) , ZHAO Zhi-Yuan(赵志远 ) , LIN Long-Ze(林隆泽 ) . Acta Chimica Sinica(化学学报 ) [ J ] , 1977, 35( 3,
4): 193— 199
[ 7 ]　 Bat tersby A. R. , Burnet t A. R. , Pars ons P. G. . J. Ch em. Soc. C [ J] , 1969, ( 8): 1 193— 1 200
Separation of Vincoside-lactam fromCamptotheca
acuminata Fruit with Resins
WANG Rui-Fang , LI Jia-Zheng, SHI Zuo-Qing
* , SHI Rong-Fu, WANG Zhong , OU Lai-Liang
( State Key Laboratory of Functional Polymeric Materials for Adsorption and Separation ,
Institute of Polymer Chemistry , Nankai University , T ianjin 300071, China )
Abstract　 The content o f CPT and V CS-L T could be improved to 4. 88% , 21. 52% , respectiv ely f rom
0. 379% , 1. 524% in crude ex t ract solution after refined by X-5 resin. Then the refined solution w as
chroma tog raphically separated wi th hypercro sslinked resin and the contents of V CS-LT could be
improved to about 60% ( CPT 15% ) . The achroma tici ty needle crystal w as obtained af ter sev eral
recrystalli za tion and its structure w as confi rmed by IR,
1
H NMR,
13
C NMR, M S and element
analysis.
Keywords　 Adsorptiv e resin; Vincoside-lactam; Layer ch romatog raphic separation
( Ed. : Y, Z)
1536　　　 高 等 学 校 化 学 学 报 Vol. 24