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不同产地杏香兔耳风酚酸类成分含量比较



全 文 :收稿日期:2014-01-08
基金项目:国家自然青年科学基金(81102787);江西省青年科学基金计划(重点项目)(20133ACB21005);江西中医药大学博士启动基金
(Y055);江西省卫生厅中医药科研计划(2012A027)
作者简介:黄骏(1989-),男,硕士,主要从事中药活性成分研究;E-mail:hjnature@ 163. com。
* 通讯作者:冯育林,E-mail:fengyulin2003@ hotmail. com。
·资源·
不同产地杏香兔耳风酚酸类成分含量比较
黄 骏1,苏 丹1,2,宋永贵1,2,张武岗1,2,陆兔林3,冯育林1,2*
(1. 江西中医药大学,江西 南昌 330006;2. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌 3300063;
3. 南京中医药大学,江苏 南京 210046)
摘要 目的:同时测定不同产地杏香兔耳风药材中主要酚酸类成分的含量,为完善杏香兔耳风药材质量标准
和药材道地产地选择提供参考依据。方法:采用 RP-HPLC 法同时测定杏香兔耳风药材中主要的两类酚酸成分的
含量,即单咖啡酰奎宁酸类(caffeoylquinic acids,CQA)和二咖啡酰奎宁酸类(dicaffeoylquinic acids,DCQA)。色谱
柱:Cosmosil RP-C18柱(250 mm ×4. 6 mm,5 μm);流动相:乙腈-0. 1%甲酸溶液,梯度洗脱;流速:1. 0 mL /min;检测
波长:328 nm;柱温:35 ℃。结果:不同产地杏香兔耳风中单咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸的含量参差不齐;江西
婺源、九江、上饶的杏香兔耳风中各酚酸的含量明显高于其他产地,广西地区的杏香兔耳风药材酚酸类含量最低;
绿原酸和 3,5-DCQA是杏香兔耳风药材中的主要酚酸成分。结论:本方法准确,简便,重复性良好,可用于不同产地
杏香兔耳风药材酚酸类有效成分的检测;结果提示江西产杏香兔耳风为优势特色药材。
关键词 杏香兔耳风;产地;咖啡酰奎宁酸;含量测定;HPLC
中图分类号:R284. 1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-1340-03
DOI:10. 13863 / j. issn1001-4454. 2014. 08. 006
Quantitative Analysis of Phenolic Acids in Ainsliaea fragrans from Different Habitats
HUANG Jun1,SU Dan1,2,SONG Yong-gui1,2,ZHANG Wu-gang1,2,LU Tu-lin3,FENG Yu-lin1,2
(1. Jiangxi University of Traditional Chinese Medicine,Nanchang 330006,China;2. National Pharmaceutical Engineering Center for
Solid Preparation in Chinese Herbal Medicine,Nanchang 330006,China;3. Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210046,
China)
Abstract Objective:The contents of major phenolic acids in Ainsliaea fragrans from different habitats were determined,in order
to improve quality standards of Ainsliaea fragrans and provide reference for optimization its daodi habitat. Methods:Separation and de-
termination of two kinds of phenolic acids,caffeoylquinic acids(CQA)and dicaffeoylquinic acid (DCQA),in Ainsliaea fragrans were
carried out by RP-HPLC with Cosmosil RP-C18 column(250 mm × 4. 6 mm,5 μm),acetonitrile-0. 1% formic acid solution as mobile
phase at the flow rate of 1. 0 mL /min,detection wavelength at 328 nm and column temperature at 35 ℃. Results:CQA and DCQA were
uneven in Ainsliaea fragrans from different habitats. In the sample from Wuyuan,Jiujiang and Shangrao in Jiangxi,the contents of phe-
nolic acids were higher than those from other habitats significantly. The sample from Guangxi habitat had the lowest phenolic acids con-
tent. And the chlorogenic acid and 3,5-DCQAs’percentage were higher than other phenolic acids. Conclusion:This method is accurate
and easy with good repeatability,which can be used in determination of eight phenolic acids in Ainsliaea fragrans from different habi-
tats. Ainsliaea fragrans in Jiangxi Province has good qulity.
Key words Ainsliaea fragrans Champ.;Habitats;Caffeoylquinic acid;Content determination;HPLC
杏香兔耳风 Ainsliaea fragrans Champ. 为菊科
兔耳风属植物,是江西特色优势药材。具有清热解
毒、利湿、止血的功效,用于宫颈炎、白带、毒蛇咬伤
等〔1〕。全草主要含酚酸类、黄酮类、倍半萜内酯类、
萜类等化学成分〔2〕。其中酚酸类成分具有显著的
抗菌活性〔3〕,是该药材临床上发挥抗炎作用的物质
基础。所含酚酸类成分又以咖啡酰奎宁酸类化合物
为主,且主要为单咖啡酰奎宁酸类(caffeoylquinic
acids,CQA)和二咖啡酰奎宁酸类(dicaffeoylquinic
acids,DCQA)。其中,CQA包括绿原酸(3-CQA)、新
绿原酸(5-CQA)、隐绿原酸(4-CQA);DCQA包括 1,
3-DCQA、1,5-DCQA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-
DCQA〔4,5〕。因此,同时对杏香兔耳风药材中这两类
酚酸成分含量进行检测,是确保临床用药有效性的
前提和基础。
目前,杏香兔耳风药材的质量标准分别收载于
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1996 年版《江西省中药材标准》和 1994 年版《上海
市中药材标准》〔1,6〕,控制水平较低,尚缺乏含量测
定项。且在已报道的文献中关于有效成分酚酸的测
定,仅采用紫外分光光度法测定总酚酸含量〔7〕,或
仅对 CQA 或者 DCQA 的某 1 种、2 种成分的检
测〔8〕。本文采用 RP-HPLC 方法,以 CQA 和 DCQA
两类酚酸成分为指标,比较不同产地杏香兔耳风药
材中的含量,为杏香兔耳风的质量控制,药材道地产
地选择提供参考依据。
1 仪器与材料
岛津高效液相色谱仪(SPD-M10A 二极管阵列
检测器,LC-10AT 系列配件,SIL-10AD vp 自动进样
器),Class-VP色谱工作站;Sartorius BS 124S 万分之
一分析天平(德国 Sartorius 公司);KQ-250 型超声清
洗器(昆山市超声仪器有限公司);Milli-Q 纯水仪
(美国 Millipore公司)。
3-CQA(批号:120926)、4-CQA(批号:130502)、
5-CQA(批号:130502)、1,3-DCAQ(批号:130502)、
1,5-DCQA (批号:120926)、3,4-DCQA (批号:
130502)、3,5-DCQA(批号:120622)、4,5-DCQA(批
号:120926)对照品购于成都普菲德生物技术有限
公司(质量分数均大于 99%)。乙腈(色谱纯,山东
禹王集团),甲酸(色谱级,美国 Sigma 公司),水为
超纯水。
杏香兔耳风药材购自江西及广西共 9 个地区,
经南昌市食品药品检验所吴蓓主管药师鉴定均为菊
科植物杏香兔耳风 Ainsliaea fragrans Champ. 的干
燥全草。
2 方法与结果
2. 1 试样的制备及色谱条件
2. 1. 1 对照品溶液的制备:取 5-CQA、3-CQA、4-
CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、
4,5-DCQA 各 2. 5、7. 5、2. 5、2. 5、5. 0、4. 0、15. 0、5. 0
mg,精密称定,置 25. 0 mL 量瓶中,甲醇定容,避光
保存备用,作为混合对照品储备液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备:对不同产地的杏香兔
耳风全草进行粉碎,过 20 目筛,分别取 5. 0 g,精密
称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇 45 mL,称定
重量,超声(150 W,40 kHz)45 min,放冷,再称定重
量,加入甲醇补足减失的重量,摇匀,过 0. 22 μm 微
孔滤膜,取续滤液,即得。
2. 1. 3 色谱条件:色谱柱为 Cosmosil RP-C18 柱
(250 mm × 4. 6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)-
0. 1%甲酸溶液(B),梯度洗脱(0 ~ 2. 5 min,85% ~
80% B;2. 5 ~ 27 min,80% ~ 79% B;27 ~ 30 min,
79% ~78% B;30 ~ 36 min,78% ~ 85% B)。流速:1
mL /min,检测波长:328 nm,柱温:35 ℃。对照品及
样品色谱图见图 1。
图 1 混合对照品(A)和杏香兔耳风药材样品
(B,江西婺源产)HPLC图
1. 5-CQA 2. 3-CQA 3. 4-CQA 4. 1,3-DCQA 5. 3,4-DC-
QA 6. 1,5-DCQA 7. 3,5-DCQA 8. 4,5-DCQA
2. 2 方法学考察
2. 2. 1 线性关系:分别精密吸取混合对照品储备
液 0. 1、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、2. 0、4. 0 mL 于 10 mL 量
瓶中,用甲醇定容至刻度。精密吸取各质量浓度混
合对照品溶液 10 μL 注入高效液相色谱仪,测定。
以峰面积(y)对浓度(x)进行线性回归,得到 3-
CQA、4-CQA、5-CQA、1,3-DCQA、1,5-DCQA、3,4-
DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA的回归方程,见表 1。
表 1 杏香兔耳风中 8 种酚酸类成分的标准曲线
成分 标准曲线
线性范围 /
(μg /mL)
r
5-CQA y = 3. 53 × 104 x + 6. 51 × 103 1 ~ 40 0. 9991
3-CQA y = 2. 64 × 104 x - 1. 10 × 103 3 ~ 120 0. 9998
4-CQA y = 2. 77 × 104 x + 5. 14 × 103 1 ~ 40 0. 9999
1,3-DCQA y = 9. 82 × 104 x - 7. 04 × 103 1 ~ 40 0. 9992
3,4-DCQA y = 3. 91 × 104 x - 2. 37 × 103 2 ~ 80 0. 9998
1,5-DCQA y = 4. 10 × 104 x + 1. 60 × 103 1. 6 ~ 64 0. 9991
3,5-DCQA y = 4. 81 × 104 x - 4. 99 × 103 6 ~ 240 0. 9994
4,5-DCQA y = 6. 53 × 104 x + 6. 42 × 103 2 ~ 80 0. 9996
2. 2. 2 精密度试验:取混合对照品溶液,按
“2. 1. 3”项下色谱条件,重复进样 6 次,测定峰面
积。5-CQA、3-CQA、4-CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、
1,5-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA 的峰面积 RSD 分
别为 1. 9%、2. 7%、2. 0%、1. 5%、2. 1%、1. 8%、
2. 4%、2. 5%。表明仪器精密度良好。
2. 2. 3 稳定性试验:取供试品溶液,室温下放置,
分别于 0、2、4、6、8、10 h 测定,5-CQA、3-CQA、4-
CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、
4,5-DCQA 峰面积的 RSD 分别为 1. 4%、1. 8%、
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2. 7%、2. 1%、2. 6%、2. 4%、1. 9%、2. 1%。表明供
试品溶液在 10 h内稳定性良好。
2. 2. 4 重复性试验:取同一批杏香兔耳风药材粉
末(江西婺源产)6 份,各 5. 0 g,精密称定,按
“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液,“2. 1. 3”项下色
谱条件测定,计算 5-CQA、3-CQA、4-CQA、1,3-DC-
QA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA
含量的 RSD 分别为 1. 4%、1. 3%、1. 9%、2. 7%、
2. 5%、1. 5%、2. 3%、2. 8%。表明方法重复性良好。
2. 2. 5 加样回收率试验:取含量已知的杏香兔耳
风药材粉末(江西婺源产)共 9 份,每份取约 2. 5 g,
精密称定,3 份为 1 组,每 3 组按低、中、高浓度分别
精密加入相当于药材含量 50%、100%、150%的对
照品溶液,依“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液,测
定,计算加样回收率和 RSD 值。5-CQA、3-CQA、4-
CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、
4,5-DCQA 分别为 100. 78% (2. 68%)、98. 35%
(1. 75%)、99. 99% (1. 22%)、102. 61% (2. 63%)、
100. 48% (2. 00%)、99. 95% (1. 48%)、103. 11%
(1. 82%)、102. 08%(2. 30%)。
2. 3 含量测定 取不同产地的杏香兔耳风药材粉
末,按“2. 1. 2”项下方法制备供试品溶液,依
“2. 1. 3”项下色谱条件进样测定,用外标法计算,结
果见表 2。
表 2 各产地杏香兔耳风药材中 8 种酚酸类成分的含量(%)
江西婺源 江西九江 江西上饶 江西宜黄 江西宜春 江西赣州 广西柳州 广西南宁 广西桂林
5-CQA 0. 011 0. 012 0. 011 0. 005 0. 005 0. 003 0. 001 0. 002 0. 001
3-CQA 0. 098 0. 105 0. 099 0. 085 0. 077 0. 051 0. 003 0. 005 0. 017
4-CQA 0. 014 0. 015 0. 014 0. 007 0. 007 0. 005 0. 001 0. 002 0. 004
CQA总量 0. 123 0. 132 0. 124 0. 097 0. 089 0. 059 0. 005 0. 009 0. 022
1,3-DCQA 0. 011 0. 012 0. 013 0. 003 0. 002 0. 001 - 0. 001 0. 002
3,4-DCQA 0. 050 0. 041 0. 037 0. 013 0. 011 0. 006 0. 002 0. 002 0. 005
1,5-DCQA 0. 057 0. 056 0. 060 0. 013 0. 011 0. 006 0. 006 0. 010 0. 028
3,5-DCQA 0. 226 0. 223 0. 227 0. 122 0. 111 0. 069 0. 003 0. 007 0. 005
4,5-DCQA 0. 061 0. 058 0. 057 0. 035 0. 031 0. 018 0. 002 0. 003 0. 007
DCQA总量 0. 405 0. 390 0. 394 0. 186 0. 166 0. 100 0. 013 0. 023 0. 047
总量 0. 528 0. 522 0. 517 0. 282 0. 255 0. 159 0. 018 0. 031 0. 069
3 结论与讨论
对不同产地的杏香兔耳风药材酚酸含量测定结
果进行分析可见,不同省份药材中酚酸含量差异很
大,相同省份不同产地的药材酚酸含量也不尽相同,
其中江西婺源、九江、上饶地区的杏香兔耳风药材中
酚酸含量要明显高于宜黄、宜春、赣州及广西地区;
总体而言,广西地区兔耳风药材酚酸含量远低于江
西地区。
在对不同产地杏香兔耳风药材中单咖啡酰奎宁
酸、二咖啡酰奎宁酸以及总酚酸的含量分别进行统
计后发现:①江西婺源、九江、上饶产杏香兔耳风的
CQA含量较高,在 0. 123% ~ 0. 132%之间;广西地
区 CQA含量较低。②对于 DCQA,江西婺源、九江、
上饶产杏香兔耳风含量在 0. 390% ~ 0. 405%之间,
也远高于其他地区。③总体上,无论以 CQA 或 DC-
QA,或两者总和计算,江西婺源及其附近地区所产
杏香兔耳风酚酸含量均为最高,结果提示该产区是
江西省优势特色药材杏香兔耳风的优质产区。
本研究对杏香兔耳风中 8 种酚酸类成分的含
量进行了测定,结果表明 3-CQA、3,5-DCQA 的含量
在各产地药材中均相对较高,可以作为杏香兔耳风
药材质量控制的指标。
参 考 文 献
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·2431· Journal of Chinese Medicinal Materials 第 37 卷第 8 期 2014 年 8 月

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