全 文 ：收稿日期:2014-01-08
基金项目:国家自然青年科学基金项目(81102787);江西省青年科学基金计划(重点项目)(20133ACB21005);江西中医药大学博士启动基
金(Y055);江西省卫生厅中医药科研计划(2012A027)
作者简介:黄骏(1989-),男,硕士,主要从事中药活性成分研究;E-mail:hjnature@163.com。
*通讯作者:冯育林,E-mail:fengyulin2003@hotmail.com。
·资源·
不同产地杏香兔耳风药材中酚酸类成分含量的比较
黄 骏1,苏 丹1,2,宋永贵1,2,张武岗1,2,陆兔林3,冯育林1,2*
(1.江西中医药大学,江西 南昌 330006;2. 中药固体制剂制造技术国家工程研究中心,江西 南昌
3300063;3.南京中医药大学,江苏 南京210046)
摘要 目的:同时测定不同产地的杏香兔耳风中主要酚酸成分的含量,为完善杏香兔耳风药材质量标准和药
材道地性选择提供参考依据。方法:采用RP-HPLC法同时测定杏香兔耳风药材中主要的两类酚酸成分,即单咖啡
酰奎宁酸类(caffeoylquinicacids,CQA)和二咖啡酰奎宁酸类(dicaffeoylquinicacids,DCQA)的含量。色谱柱:Cos-
mosilRP-C18柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-0.1%甲酸水溶液,梯度洗脱;流速:1mL/min;检测波长:
328nm;柱温:35℃。结果:不同产地的杏香兔耳风中单咖啡酰奎宁酸和二咖啡酰奎宁酸的含量参差不齐;产地江
西婺源、江西九江、江西上饶的杏香兔耳风中各酚酸的含量明显高于其他产地的,其中广西地区的杏香兔耳风药材
酚酸类含量最低;绿原酸和3,5-DCQA是杏香兔耳风药材中的主要酚酸成分。结论:本方法准确,简便,重复性良
好,可用于不同产地杏香兔耳风药材中酚酸有效成分的检测;结果提示江西产杏香兔耳风为优势特色药材。
关键词 杏香兔耳风;产地;咖啡酰奎宁酸;含量测定;HPLC
中图分类号:R284.1 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2014)08-
QuantitativeAnalysisofPhenolicAcidsinAinsliaeafragransfromVariousHabitats
HUANGJun1,SUDan1,2,SONGYong-gui1,2,ZHANGWu-gang1,2,LUTu-lin3,FENGYu-lin1,2
(1.JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine,Nanchang330006,China;2.NationalPharmaceuticalEngineeringCenter
forSolidPreparationinChineseHerbalMedicine,Nanchang330006,China;3.NanjingUniversityofChineseMedicine,Nan-
Jing210046,China)
Abstract Objective:ThecontentsofmajorphenolicacidsinAinsliaeafragransfromdifferenthabitatsweredetermined.It
couldimprovequalitystandardsofAinsliaeafragransandprovidereferenceforoptimizationitsdaodihabitat.Methods:Separa-
tionanddeterminationoftwokindsofphenolicacids,caffeoylquinicacids(CQA)anddicaffeoylquinicacid(DCQA),inAinsliae-
afragranswerecarriedoutbyRP-HPLCwithCosmosilRP-C18column(250mmx4.6mm,5μm),acetonitrile-0.1%formicacid
aqueoussolutionasmobilephaseattheflowrateof1mL/min,detectionwavelengthat328nmandcolumntemperatureat35℃
.Results:CQAandDCQAwereuneveninAinsliaeafragransfromdifferenthabitats.InthesamplefromJiangxiWuyuan,Jiangxi
JiujiangandJiangxiShangrao,thecontentsofphenolicacidswerehigherthanthosefromotherhabitatssignificantly.Thesam-
plefromGuangxihabitathadthelowestphenolicacidscontent.Andthechlorogenicacidand3,5-DCQAs’percentagewerehigher
thanotherphenolicacids.Conclusion:Thismethodisaccurateandeasywithgoodrepeatability,whichcanbeusedindetermina-
tionofeightphenolicacidsinAinsliaeafragransfromdifferenthabitats.AinsliaeafragransinJiangxiProvincehavegoodqulity.
Keywords AinsliaeafragransChamp.;Habitats;Caffeoylquinicacid;Contentdetermination;HPLC
杏香兔耳风AinsliaeafragransChamp.为菊
科兔耳风属植物,是江西特色优势药材。《江西省中
药材标准》中记载其具有清热解毒、利湿、止血的功
效,用于宫颈炎、白带、毒蛇咬伤等〔1〕。全草主要含
酚酸类、黄酮类、倍半萜内酯类、萜类等化学成分〔2〕。
其中酚酸类成分具有显著的抗菌活性〔3〕,是该药材
临床上发挥抗炎作用的物质基础。所含酚酸类成分
又以咖啡酰奎宁酸类化合物为主,且主要为单咖啡
酰奎宁酸类(caffeoylquinicacids,CQA)和二咖啡酰
奎宁酸类(dicaffeoylquinicacids,DCQA)。其中,
CQA包括绿原酸(3-CQA)、新绿原酸(5-CQA)、隐
绿原酸(4-CQA);DCQA包括1,3-DCQA、1,5-DC-
QA、3,4-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA〔4,5〕。因
此,同时对杏香兔耳风药材中这两类酚酸成分含量
进行检测,是确保临床用药有效性的前提和基础。
目前,杏香兔耳风药材的质量标准分别收载于
·9331·JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
网络出版时间：2014-07-31 11:16
网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/44.1286.R.20140731.1116.006.html
1996年版《江西省中药材标准》和1994年版《上海
市中药材标准》〔6〕,控制水平较低,尚缺乏含量测定
项。且在已报道的文献中关于有效成分酚酸的测
定,仅采用紫外分光光度法测定总酚酸含量〔7〕,或仅
对CQA或者DCQA的某1种、2种成分的检测〔8〕。
本文采用RP-HPLC方法,以CQA和DCQA两类
酚酸成分为指标,比较不同产地杏香兔耳风药材中
的含量,为杏香兔耳风的质量控制,药材道地性选择
提供参考依据。
1 仪器与材料
岛津高效液相色谱仪(SPD-M10A二极管阵列
检测器,LC-10AT系列配件,SIL-10ADvp自动进
样器),Class-VP色谱工作站;SartoriusBS124S万
分之一分析天平(德国Sartorius公司);KQ-250型
超声清洗器(昆山市超声仪器有限公司);Mili-Q纯
水仪(美国 Milipore公司)。
3-CQA (批 号:120926)、4-CQA (批 号:
130502)、5-CQA(批号:130502)、1,3-DCAQ(批号:
130502)、1,5-DCQA(批号:120926)、3,4-DCQA(批
号:130502)、3,5-DCQA(批号:120622)、4,5-DCQA
(批号:120926)对照品购于成都普菲德生物技术有
限公司(质量分数均大于99%)。乙腈(色谱纯,山
东禹王集团),甲酸(色谱级,美国Sigma公司),水
为超纯水。
杏香兔耳风药材购自江西及广西共9个地区,
经南昌市食品药品检验所吴蓓主管药师鉴定均为菊
科植物杏香兔耳风 AinsliaeafragransChamp.的干
燥全草。
2 方法与结果
2.1 试样的制备及色谱条件
2.1.1 对照品溶液的制备:取5-CQA、3-CQA、4-
CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DC-
QA、4,5-DCQA 各2.5、7.5、2.5、2.5、5.0、4.0、
15.0、5.0mg,精密称定,置25.0mL量瓶中,甲醇
定容,避光保存备用,作为混合对照品储备液。
2.1.2 供试品溶液的制备:对不同产地的杏香兔耳
风全草进行粉碎,过20目筛,分别取5.0g,精密称
定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇45mL,称定重
量,超声(150W,40kHz)45min,放冷,再称定重量,
加入甲醇补足减失的重量,摇匀,过0.22μm微孔
滤膜,取续滤液,即得。
2.1.3 色谱条件:色谱柱为CosmosilRP-C18柱
(250mm ×4.6mm,5μm);流动相:乙腈(A)–
0.1%甲酸水溶液(B),梯度洗脱(0~2.5min,85%
~80%B;2.5~27min,80%~79%B;27~30min,
79%~78%B;30~36min,78%~85%B)。流速:
1mL/min,检测波长:328nm,柱温:35℃。对照品及
样品色谱图见图1。
图1 混合对照品(A)和杏香兔耳风药材样品
(B,江西婺源产)HPLC图
1.5-CQA 2.3-CQA 3.4-CQA 4.1,3-DCQA 5.3,4-
DCQA 6.1,5-DCQA 7.3,5-DCQA 8.4,5-DCQA
注:与模型组比较,*P<0.05,**P<0.01
2.2 方法学考察
2.2.1 线性关系:分别精密吸取混合对照品储备液
0.1、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、4.0mL于10.0mL量
瓶中,用甲醇定容至刻度。精密吸取各质量浓度混
合对照品溶液10μL注入高效液相色谱仪,测定。
以峰面积(y)对浓度(x)进行线性回归,得到3-
CQA、4-CQA、5-CQA、1,3-DCQA、1,5-DCQA、3,4-
DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA 的回归方程,见表
1。
表1 杏香兔耳风中8种酚酸成分的标准曲线
成分 标准曲线
线性范围
(μg/mL)
r值
5-CQA
y=3.53×104x+6.51×
103
1~40 0.9991
3-CQA
y=2.64×104x-1.10×
103
3~120 0.9998
4-CQA
y=2.77×104x+5.14×
103
1~40 0.9999
1,3-DCQA
y=9.82×104x-7.04×
103
1~40 0.9992
3,4-DCQA
y=3.91×104x-2.37×
103
2~80 0.9998
1,5-DCQA
y=4.10×104x+1.60×
103
1.6~64 0.9991
3,5-DCQA
y=4.81×104x-4.99×
103
6~240 0.9994
4,5-DCQA
y=6.53×104x+6.42×
103
2~80 0.9996
2.2.2 精密度试验:取混合对照品溶液,按“2.1.3”
项下色谱条件,重复进样6次,测定峰面积。5-
CQA、3-CQA、4-CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-
DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA的峰面积RSD分别
为 1.9%、2.7%、2.0%、1.5%、2.1%、1.8%、
2.4%、2.5%。
2.2.3 稳定性试验:取供试品溶液,室温下放置,分
别于 0、2、4、6、8、10h 测定,5-CQA、3-CQA、4-
·0431· JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月
CQA、1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DC-
QA、4,5-DCQA 峰面积的 RSD 分别为 1.4%、
1.8%、2.7%、2.1%、2.6%、2.4%、1.9%、2.1%。
2.2.4 重复性试验:取同一批杏香兔耳风药材粉末
(江西婺源)6份,各5.0g,精密称定,按“2.1.2”项
下方法制备供试品溶液,“2.1.3”项下色谱条件测
定,计算5-CQA、3-CQA、4-CQA、1,3-DCQA、3,4-
DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、4,5-DCQA含量的
RSD分别为 1.4%、1.3%、1.9%、2.7%、2.5%、
1.5%、2.3%、2.8%。
2.2.5 加样回收率试验:取含量已知的杏香兔耳风
药材粉末(江西婺源)共9份,每份取约2.5g,精密
称重,3份为1组,每3组按低、中、高浓度分别精密
加入相当于药材含量50%、100%、150%的对照品
溶液,依“2.1.2”项下方法制备供试品溶液,测定,计
算加样回收率和RSD值。5-CQA、3-CQA、4-CQA、
1,3-DCQA、3,4-DCQA、1,5-DCQA、3,5-DCQA、4,
5-DCQA 分 别 为 100.78% (2.68%)、98.35%
(1.75%)、99.99%(1.22%)、102.61%(2.63%)、
100.48% (2.00%)、99.95% (1.48%)、103.11%
(1.82%)、102.08%(2.3%)。
2.3 样品含量测定 取不同产地的杏香兔耳风药
材粉末按 “2.1.2”项下方法制备供试品溶液,
“2.1.3”项下色谱条件进样测定,用外标法计算,结
果见表2。
表2 各产地杏香兔耳风药材中8种酚酸类成分的含量(%)
江西婺源 江西九江 江西上饶 江西宜黄 江西宜春 江西赣州 广西柳州 广西南宁 广西桂林
5-CQA 0.011 0.012 0.011 0.005 0.005 0.003 0.001 0.002 0.001
3-CQA 0.098 0.105 0.099 0.085 0.077 0.051 0.003 0.005 0.017
4-CQA 0.014 0.015 0.014 0.007 0.007 0.005 0.001 0.002 0.004
CQA总量 0.123 0.132 0.124 0.097 0.089 0.059 0.005 0.009 0.022
1,3-DCQA 0.011 0.012 0.013 0.003 0.002 0.001 - 0.001 0.002
3,4-DCQA 0.050 0.041 0.037 0.013 0.011 0.006 0.002 0.002 0.005
1,5-DCQA 0.057 0.056 0.060 0.013 0.011 0.006 0.006 0.010 0.028
3,5-DCQA 0.226 0.223 0.227 0.122 0.111 0.069 0.003 0.007 0.005
4,5-DCQA 0.061 0.058 0.057 0.035 0.031 0.018 0.002 0.003 0.007
DCQA总量 0.405 0.390 0.394 0.186 0.166 0.100 0.013 0.023 0.047
总量 0.528 0.522 0.517 0.282 0.255 0.159 0.018 0.031 0.069
3 结果与讨论
对不同产地的杏香兔耳风药材酚酸含量测定结
果进行分析可见,不同省份药材中酚酸含量差异很
大,相同省份不同产地的药材酚酸含量也不尽相同,
其中江西婺源、九江、上饶地区的杏香兔耳风药材中
酚酸含量要明显高于宜黄、宜春、赣州及广西地区;
总体而言,广西地区兔耳风药材酚酸含量远低于江
西地区。
在对不同产地杏香兔耳风药材中单咖啡酰奎宁
酸、二咖啡酰奎宁酸以及总酚酸的百分含量分别进
行统计后发现:①婺源、九江、上饶产杏香兔耳风的
CQA含量较高,在0.123%~0.132%之间;广西地
区CQA含量较低。②对于DCQA,婺源、九江、上
饶产杏香兔耳风含量在0.390%~0.405%之间,也
远高于其他地区。③总体上,无论以CQA或DC-
QA,或两者总和计算,婺源及其附近地区所产杏香
兔耳风酚酸含量均为最高,结果提示该产区是江西
省优势特色药材杏香兔耳风的优质产区。
本研究对杏香兔耳风中8种酚酸类成分的含
量进行了测定,结果表明除5-CQA、4-CQA的含量
在个别产地药材中较低之外,其他6种成分均可以
作为杏香兔耳风药材质量控制的指标。
参 考 文 献
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·1431·JournalofChineseMedicinalMaterials 第37卷第8期2014年8月