全 文 ：书·１０２４　 ·
第二军医大学学报　　２０１４年９月第３５卷第９期　　ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｊｓｍｍｕ．ｃｎ
Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｅｃｏｎｄ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｅｐ．２０１４，Ｖｏｌ．３５，Ｎｏ．９
ＤＯＩ：１０．３７２４／ＳＰ．Ｊ．１００８．２０１４．０１０２４ ·短篇论著·
香附对川芎中阿魏酸在正常及偏头痛模型大鼠体内药代动力学的影响
张　毅１，杨凌鉴１，王笑笑１，马晓毅１，于　洁１，贾　璞１，岳　俏１，杨璞叶２，郑晓晖１，３＊
１．西北大学生命科学学院中药学系，西安７１００６９
２．北方医院感染科，西安７１００４３
３．深圳创新中药及天然药物联合研究实验室，深圳５１８０５７
　　［摘要］　目的　研究香附对川芎中阿魏酸（ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＦＡ）在正常及偏头痛模型大鼠体内的药代动力学影响。方法　
用硝酸甘油（１０ｍｇ／ｋｇ）制作偏头痛大鼠模型，ＳＤ大鼠分为正常川芎组、正常川芎－香附组、模型川芎组、模型川芎－香附组，灌胃
给药，采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）检测血药浓度，流动相为０．２％甲酸水（Ａ）－甲醇（Ｂ），梯度洗脱，检测波长为３２２ｎｍ，检测
给药后０～８ｈ内大鼠血浆中ＦＡ的浓度，ＤＡＳ　２．０软件计算药代动力学参数。结果　ＨＰＬＣ法的方法学考察均符合测定要
求。正常组中川芎配伍香附后ＦＡ的吸收半衰期ｔ１／２Ｋａ缩短（Ｐ＜０．０５），达峰时间Ｔｍａｘ提前（Ｐ＜０．０５），但其他药代动力学参数
与配伍前比较差异无统计学意义。模型组中川芎配伍香附后ＦＡ的达峰浓度Ｃｍａｘ、药时曲线下面积 ＡＵＣ（０－ｔ）、分布半衰期
ｔ１／２α、表观分布容积增大（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），Ｔｍａｘ提前（Ｐ＜０．０５），清除率降低（Ｐ＜０．０１）。结论　在正常大鼠体内香附加
快了ＦＡ的吸收，而在偏头痛模型大鼠体内香附减慢ＦＡ在体内的分布和代谢，延长药物在体内的作用时间，从而提高了ＦＡ
的生物利用度。
　　［关键词］　川芎；香附；阿魏酸；药代动力学；偏头痛
　　［中图分类号］　Ｒ　２８５．５　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　０２５８－８７９Ｘ（２０１４）０９－１０２４－０５
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｏｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ　ｗａｌｌｉｃｈｉ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ
ｎｉｔｒｏｇｌｙｃｅｒｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｉｇｒａｉｎｅ　ｒａｔｓ
ＺＨＡＮＧ　Ｙｉ　１，ＹＡＮＧ　Ｌｉｎｇ－ｊｉａｎ１，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｏ－ｘｉａｏ１，ＭＡ　Ｘｉａｏ－ｙｉ　１，ＹＵ　Ｊｉｅ１，ＪＩＡ　Ｐｕ１，ＹＵＥ　Ｑｉａｏ１，ＹＡＮＧ　Ｐｕ－ｙｅ２，ＺＨＥＮＧ
Ｘｉａｏ－ｈｕｉ　１，３＊
１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ　Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ　７１００６９，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ
２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ　Ｄｉｓｅａｓｅｓ，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｘｉ’ａｎ　７１００４３，Ｓｈａａｎｘｉ，Ｃｈｉｎａ
３．Ｊｏｉｎｔ　Ｌａｂ　ｆｏｒ　Ｎｅｗ　Ｄｒｕｇ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｆ　ＴＣＭ　ａｎｄ　Ｎａｔｕｒａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　ｏｆ　Ｓｈｅｎｚｈｅｎ，Ｓｈｅｎｚｈｅｎ　５１８０５７，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ
［收稿日期］　２０１４－０１－０２　　　　［接受日期］　２０１４－０５－１３
［基金项目］　教育部长江学者和创新团队发展计划资助（ＩＲＴ１１７４）；陕西省重点科技创新团队计划（２０１３ＫＣＴ－２４）；西北大学大学生创新基金
（２０１２０９９）．Ｓｕｐｐｏｒｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　Ｙａｎｇｔｚｅ　Ｒｉｖｅｒ　ｓｃｈｏｌａｒｓ　ａｎｄ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｔｅａｍ　Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　Ｐｌａｎ　ｏｆ　Ｍｉｎｉｓｔｒｙ　ｏｆ　Ｅｄｕｃａｔｉｏｎ（ＩＲＴ１１７４），Ｋｅｙ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｔｅａｍ　Ｐｌａｎ　ｏｆ　Ｓｈａａｎｘｉ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ（２０１３ＫＣＴ－２４），ａｎｄ　ｔｈｅ　Ｓｔｕｄｅｎｔ　Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎ　Ｆｕｎｄ　ｏｆ　Ｎｏｒｔｈｗｅｓｔ
Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（２０１２０９９）．
［作者简介］　张　毅，硕士生．Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈａｎｇｙｉ０２２１１＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
＊通信作者（Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ）．Ｔｅｌ：０２９－８８３０２６８６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｚｈｅｎｇｘｈ＠ｎｗｕ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｏｎ　ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ
ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ａｎｄ　ｎｉｔｒｏｇｌｙｃｅｒｉｎ－ｉｎｄｕｃｅｄ　ｍｉｇｒａｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｒａｔ　ｍｉｇｒａｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｗａｓ　ｃｒｅａｔｅｄ　ｂｙ
ｎｉｔｒｏｇｌｙｃｅｒｉｎ（１０ｍｇ／ｋｇ）．ＳＤ　ｒａｔｓ　ｗｅｒｅ　ｄｉｖｉｄｅｄ　ｉｎｔｏ　ｎｏｒｍａｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ｇｒｏｕｐ，ｎｏｒｍａｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ
ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ａｎｄ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ｇｒｏｕｐ，ａｎｄ　ｍｏｄｅｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ａｎｄ
ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｇｒｏｕｐ．Ｗｅ　ｕｓｅｄ　ＲＰ－ＨＰＬＣ（０．２％ｆｏｒｍｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｔｅｒ［Ａ］－ｍｅｔｈａｎｏｌ［Ｂ］，ｇｒａｄｉｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　３２２ｎｍ）ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｔｈｅ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｒａｔ　ｐｌａｓｍａ　ａｔ　８ｈａｆｔｅｒ　ｏｒａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ．ＤＡＳ　２．０ｓｏｆｔｗａｒｅ　ｗａｓ　ｕｓｅｄ　ｔｏ　ｃａｌｃｕｌａｔｅ　ｔｈｅ
ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ　ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｆｏｒｍｅｄ　ｔｈａｔ　ＨＰＬＣ　ｍｅｔ　ｔｈｅ　ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ　ｆｏｒ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．
Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｎｏｒｍａｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｈａｌｆ　ｔｉｍｅ（ｔ１／２Ｋａ）ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｒｅｄｕｃｅｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ａｎｄ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｔｈｅ　ｐｅａｋ　ｔｉｍｅ（Ｔｍａｘ）ｗａｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ
ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ（Ｐ＜０．０５），ｗｉｔｈ　ｎｏ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ　ｆｏｕｎｄ　ｆｏｒ　ｏｔｈｅｒ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ．Ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｍｏｄｅｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ
ｇｒｏｕｐ，ｍｏｄｅｌ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｌｉｇｕｓｔｉｃｉ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ　ａｎｄ　ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｇｒｏｕｐ　ｈａｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｍａｘｉｍｕｍ　ｐｌａｓｍａ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（Ｃｍａｘ），ａｒｅａ　ｕｎｄｅｒ　ｃｕｒｖｅ（ＡＵＣ），ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｈａｌｆ－ｌｉｆｅ　ｔｉｍｅ（ｔ１／２α），ａｎｄ　ａｐｐａｒｅｎｔ　ｖｏｌｕｍｅ　ｏｆ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ（Ｐ＜０．０５
ｏｒ　Ｐ＜０．０１），ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｓｈｏｒｔｅｎｅｄ　Ｔｍａｘ（Ｐ＜０．０５），ａｎｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｄ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｒａｔｅ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｌｅａｒａｎｃｅ　ｓｐｅｅｄ
第９期．张　毅，等．香附对川芎中阿魏酸在正常及偏头痛模型大鼠体内药代动力学的影响 ·１０２５　 ·
（Ｐ＜０．０１）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｒｈｉｚｏｍａ　ｃｙｐｅｒｉ　ｅｎｈａｎｃｅｓ　ｔｈｅ　ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ｉｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｒａｔｓ，ｗｈｉｌｅ　ｉｎ　ｍｉｇｒａｉｎｅ　ｍｏｄｅｌ　ｒａｔｓ　ｉｔ
ｒｅｄｕｃｅｓ　ｔｈｅ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｏｎｇｓ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ　ｔｉｍｅ，ｓｕｂｓｅｑｕｅｎｔｌｙ　ｐｒｏｍｏｔｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｉｏａｖａｉｌａｂｉｌｉｔｙ
ｏｆ　ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ．
　　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ｌｉｇｕｓｔｉｃｕｍ　ｗａｌｌｉｃｈｉｉ；Ｃｙｐｅｒｕｓ　ｒｏｔｕｎｄｕｓ；ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ；ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ；ｍｉｇｒａｉｎｅ　ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ
［Ａｃａｄ　Ｊ　Ｓｅｃ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ，２０１４，３５（９）：１０２４－１０２８］
　　川芎味辛性温，入肝、胆、心包经，有活血化瘀、
行气止痛、祛风通络之功，香附具有行气疏肝、调经
止痛之功，二者配伍可气血并调、理气解郁、活血止
痛［１］。药理学研究发现，川芎配伍香附后可不同程
度减少痛经模型小鼠的扭体次数，延长扭体潜伏
期［２］，降低大鼠的全血黏度［３］；此外还可治疗植物神
经功能紊乱、血管舒缩障碍导致的偏头痛［４］。阿魏
酸（ｆｅｒｕｌｉｃ　ａｃｉｄ，ＦＡ）为川芎行气止痛的主要成分，
具有一定的促血管新生、降压、抗脑缺血、抗缺血性
心肌再灌注损伤、镇痛、缓解血管痉挛等作用［５－６］。
川芎和香附配伍前后醇提液中ＦＡ含量变化已
有报道［７］，但是香附对川芎中ＦＡ在正常及偏头痛
模型大鼠体内的药代动力学影响还未见文献报道。
本文采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）研究正常及偏头
痛模型大鼠体内川芎－香附配伍后香附对川芎中ＦＡ
的药代动力学影响，为临床应用提供依据。
１　材料和方法
１．１　仪器　Ａｇｉｌｅｎｔ１１００系列高效液相色谱仪（美
国安捷伦公司）；ＢＰ２２１Ｓ电子分析天平（德国赛多利
斯公司）；ＫＱ５２００ＤＥ型数控超声波清洗仪（昆山市
超声仪器有限公司）；电子调温电热套９８－１－Ｎ型（天
津市泰斯特仪器有限公司）；ＳＥＮＣＯ型旋转蒸发器
（上海申生科技有限公司）；ＴＧＬ－１６Ｇ高速离心机
（上海安亭科学仪器公司）。
１．２　药品与试剂　川芎、香附药材（购于西安市万
寿路药材市场，由西北大学房敏峰教授鉴定）；ＦＡ对
照品（中国食品药品检定研究院，批号：１１０７７３－
２００６１１）；肝素钠注射液（河北常山生化药业有限公
司，批号：１００１０９）；色谱级甲醇（美国斯百全公司）；
实验用水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
１．３　实验动物　ＳＰＦ级雄性ＳＤ大鼠（购自西安交
通大学实验动物中心，合格证号：陕医动证字
２００６１０５），５个月龄，体质量２００～２３０ｇ。
１．４　川芎及川芎－香附合煎液的制备　称取干燥至
恒质量的川芎药材粗粉（过４０目筛）１００ｇ，置于
２　０００ｍＬ圆底烧瓶中，１０倍量水浸泡１ｈ后，加热回
流提取３次（２ｈ、２ｈ、１ｈ），合并提取液，减压浓缩至
５０ｍＬ（生药量以川芎计２．０ｇ／ｍＬ），４℃冷藏备用。
按川芎与香附１∶１配比，同法制备川芎－香附合煎
液。川芎和川芎－香附合煎液用双蒸水稀释１００倍，
过０．４５μｍ水系微孔滤膜，按１．７．１项下条件分析
ＦＡ的含量分别为２．１０ｍｇ／ｍＬ和２．２９ｍｇ／ｍＬ。
１．５　硝酸甘油偏头痛模型大鼠的制备　取健康ＳＤ
大鼠皮下注射硝酸甘油注射剂（１０ｍｇ／ｋｇ）制作偏头
痛模型［８－１２］，于造模后３ｍｉｎ左右与正常组动物比
较，模型组动物出现明显的双耳发红、前肢挠头、爬
笼次数增多、烦躁不安等现象，此现象在５ｈ后消失。
１．６　动物分组及药代动力学实验　取正常ＳＤ大鼠
２４只，随机分为正常川芎组、正常川芎－香附组，模型
川芎组、模型川芎－香附组，每组６只。模型组大鼠
自由饮水，禁食１２ｈ后按１．５项下条件操作制作偏
头痛病理模型。４组动物分别灌服对应的药材提取
液（均以ＦＡ计，按２０ｍｇ／ｋｇ剂量给药），并分别于
给药后０、２、５、１０、１５、３０、４５、６０、１２０、１８０、３００、４８０
ｍｉｎ从大鼠眼底静脉丛取血０．５ｍＬ，置肝素化离心
管中８　０００×ｇ 离心１０ ｍｉｎ，吸取上清液，置于
－２０℃保存。各时间点取完血后腹腔注射０．５ｍＬ
生理盐水以补充血容量。
１．７　ＦＡ血药浓度的测定
１．７．１　色谱条件　色谱柱：Ａｇｉｌｅｎｔ　ＴＣ－Ｃ１８（４．６
ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：０．２％甲酸水（Ａ）－甲
醇（Ｂ），梯度洗脱（０～２８ｍｉｎ，１０～３０％Ｂ；２８～６８ｍｉｎ，
３０～７０％Ｂ；６８～７２ｍｉｎ，７０％Ｂ）；检测波长：３２２ｎｍ；
柱温：３０℃；流速：０．６ｍＬ／ｍｉｎ；进样量：５０μＬ。
１．７．２　对照品溶液的制备　精密称取ＦＡ对照品３．８
ｍｇ，置于１０ｍＬ棕色容量瓶中，用甲醇定容，制得浓度
为０．３８ｍｇ／ｍＬ　ＦＡ对照品储备液，４℃冷藏备用。
１．７．３　血浆样品的前处理　取１．６项下血浆０．２
ｍＬ，加入２０μＬ　１０％高氯酸水溶液沉淀蛋白，涡旋２
ｍｉｎ，加入０．６ｍＬ乙酸乙酯，涡旋２ｍｉｎ，８　０００×ｇ
离心１０ｍｉｎ，移取全部乙酸乙酯层（上层），再用相同
·１０２６　 · 第二军医大学学报　２０１４年９月，第３５卷
体积的乙酸乙酯重复萃取２次，合并３次乙酸乙酯
萃取液，室温下氮气保护吹干，残渣用甲醇∶０．２％
甲酸水＝２０∶８０超声溶解，过０．２２μｍ微孔有机滤
膜，取续滤液进样分析。
１．８　方法学考察
１．８．１　专属性、线性关系及检测限　分别取空白血
浆供试品溶液和空白血浆＋对照品供试品溶液在
１．７．１项色谱条件下进样分析，考察方法的专属性。
在２００μＬ空白血浆中加入用甲醇稀释的系列浓度
ＦＡ对照品溶液各２０μＬ，配制成ＦＡ 浓度分别为
０．３８、０．７６、１．５２、３．８０、５．７０、７．６０、９．５０ｍｇ／Ｌ的系
列空白血浆＋标品供试品溶液，按１．７．３项下方法
处理，在１．７．１项液相条件下进样分析，以浓度（Ｘ，
ｍｇ／Ｌ）为横坐标、以峰面积（Ｙ）为纵坐标，绘制标准
曲线；同时以逐步稀释法确定检测限。
１．８．２　精密度和回收率　取空白血浆，分别加入适
量的ＦＡ对照品溶液，得到０．３８、３．８、９．５ｍｇ／Ｌ空
白血浆＋对照品溶液，每个浓度６份；同时配制相同
浓度的以水为基质的对照品溶液，按照１．７．３项下
方法处理，按１．７．１项液相条件下进样分析，同一样
品在１ｄ内重复进样６次，６ｄ内连续测定６次，求得
３个浓度的日内和日间精密度。以血浆中ＦＡ与水
溶液中ＦＡ的含量之比计算提取回收率。
１．８．３　稳定性　本实验分别考察了冻融周期、温度
及贮存时间对样品稳定性的影响。
冻融稳定性：将在－２０℃的条件下冷冻２４ｈ的
０．３８、３．８、９．５ｍｇ／Ｌ的空白血浆＋ＦＡ对照品样品
取出，于室温下解冻，在１．７．１项色谱条件下，进样
分析，记录峰面积，根据标准曲线计算ＦＡ的浓度。
完全解冻后样品再次冷冻２４ｈ，重复６次。
短期稳定性：将０．３８、３．８、９．５ｍｇ／Ｌ的空白血
浆＋ＦＡ对照品样品，室温下放置２、４、６、８、１２、２４ｈ，
按１．７．３项下样品制备方法对血样进行前处理，在
１．７．１项色谱条件下进样分析。
长期稳定性：将０．３８、３．８、９．５ｍｇ／Ｌ的空白血
浆＋ＦＡ对照品样品置于－２０℃冷冻保存，分别于冻
存１、２、４、８周后取出，置于室温下解冻，按１．７．３项
下方法处理样品，在１．７．１项色谱条件下进样分析。
１．９　统计学处理　采用ＳＰＳＳ　１６．０软件和ｔ检验
对川芎组和川芎－香附组大鼠的药代动力学参数进
行统计学分析，所得结果用珔ｘ±ｓ表示，检验水准（α）
为０．０５。血药浓度数据用ＤＡＳ　２．０软件处理得到
药代动力学参数。
２　结　果
２．１　ＨＰＬＣ方法学考察结果
２．１．１　专属性及检测限　图１为空白血浆、空白血
浆＋ＦＡ对照品溶液及含药血浆色谱图。结果显示，
空白血浆中的内源性物质与ＦＡ分离良好，不影响
ＦＡ的检测，且基线较平稳，噪音小。在拟定色谱条
件下ＦＡ的检测限为０．１３ｍｇ／Ｌ（Ｓ／Ｎ＝３），定量限
为０．３０ｍｇ／Ｌ（Ｓ／Ｎ＝１０）。符合血浆样品测定要求。
图１　ＨＰＬＣ法测定阿魏酸（ＦＡ）血药浓度色谱图
Ａ：空白血浆；Ｂ：空白血浆＋ＦＡ对照品溶液；Ｃ：正常大鼠灌胃川芎提取液后血浆；Ｄ：正常大鼠灌胃川芎－香附提取液后血浆
第９期．张　毅，等．香附对川芎中阿魏酸在正常及偏头痛模型大鼠体内药代动力学的影响 ·１０２７　 ·
２．１．２　线性关系　线性方程为：Ｙ＝１８．６９２　Ｘ－
０．３７４　３，ｒ＝０．９９９　８（ｎ＝６），表明血样中ＦＡ在浓度
为０．３８～９．５０ｍｇ／Ｌ范围内具有良好的线性关系。
２．１．３　精密度和回收率　求得３个浓度提取回收
率为（９５．４５±２．５７）％、（９３．２４±２．６６）％、（８９．９３±
４．８７）％。日内精密度ＲＳＤ和日间精密度ＲＳＤ分
别为３．０３％、２．８９％、０．４２％和３．１３％、４．１７％、
０．７４％。结果表明方法精密度和回收率良好，符合
测定要求。
２．１．４　稳定性实验　ＦＡ　３个浓度冻融稳定性结果
分别为（９１．６７ ± ０．０２）％、（９５．６ ± ０．１４）％、
（９７．６１ ± ０．１３）％；短 期 稳 定 性 结 果 分 别 为
（８９．２５±０．０２）％、（８５．９３±０．１４）％、（９４．８８±
０．２９）％；长期稳定性结果分别为（９０．２６±０．０３）、
（８６．０５±０．２８）％、（９２．２１±０．６１）％。表明冻融
稳定性、短期稳定性及长期稳定性均良好，符合测定
要求。
２．２　药代动力学实验结果　血药浓度－时间曲线见
图２，ＦＡ的药代动力学参数见表１。
可以看出，ＦＡ在正常大鼠和模型大鼠体内的代
谢均呈现二室开放模型。与正常川芎组对比，正常
川芎－香附组中ＦＡ的吸收半衰期（ｔ１／２Ｋａ）缩短（Ｐ＜
０．０５），达峰时间提前（Ｐ＜０．０５），但其他参数与配
伍前差异并无统计学意义。与模型川芎组比较，模
型川芎－香附组中ＦＡ的达峰浓度（Ｃｍａｘ）、药物浓度－
时间曲线下面积（ＡＵＣ（０－ｔ）、ＡＵＣ（０－∞））、分布半衰期
（ｔ１／２α）、表观分布容积增大（Ｐ＜０．０１或Ｐ＜０．０５），
达峰时间提前（Ｐ＜０．０５），清除率降低（Ｐ＜０．０１）。
图２　阿魏酸在正常大鼠（Ａ）和偏头痛模型大鼠（Ｂ）体内的血药浓度－时间曲线
ｎ＝６，珔ｘ±ｓ
表１　阿魏酸（ＦＡ）在正常及模型大鼠体内的药代动力学参数
ｎ＝６，珚ｘ±ｓ
　参数 正常川芎组 正常川芎－香附组 模型川芎组 模型川芎－香附组
ｔ１／２αｔ／ｍｉｎ　 ６９．３１５±０　 ６０．８９１±１２．００４　 ２０．２８６±２４．９５７　 ６４．３９１±１２．０６１△△
ｔ１／２βｔ／ｍｉｎ　 ６９．３１５±０　 ６８．０４８±３．１０４　 ６９．３１５±０　 ６９．３１５±０
Ｖｄ（Ｌ·ｋｇ－１） ３０．７１７±１７．７０４　 １５．６１９±８．０６３　 ７．１０３±４．７３８▲ １３．５４４±２．３１８△▲
ＣＬ／Ｆ（Ｌ·ｍｉｎ－１·ｋｇ－１） ０．１８５±０．０３９　 ０．１６８±０．０３９　 ０．０６６±０．００４▲▲ ０．０４４±０．００４△△▲▲
ＡＵＣ（０－ｔ）（ｍｇ·ｍｉｎ·Ｌ－１） １０８．１９９±１６．７６５　 １２６．１３６±２８．９１１　 ２９３．３５４±１２．１６２▲▲ ４２５．３９±３０．１８４△△▲▲
ＡＵＣ（０－∞）（ｍｇ·ｍｉｎ·Ｌ－１） １１７．４４５±２２．７４９　 １３０．７７７±３０．９９１　 ３１６．８０１±１８．９２２▲▲ ４７８．８９５±４２．２３１△△▲▲
ＣｍａｘρＢ／（ｍｇ·Ｌ－１） ２．２３２±０．１５４　 ２．３１８±０．２８８　 ３．０５５±０．１２２▲▲ ３．５８８±０．１５７△△▲▲
Ｔｍａｘｔ／ｍｉｎ　 ５±０　 ２±０＊ １０±０▲ ５±０△▲
ｔ１／２Ｋａｔ／ｍｉｎ　 ８．２２６±０．８７６　 ４．９４３±２．８０５＊ ８．０６２±１０．７３４　 １６．５７１±２．９１７
ｔ１／２α：分布半衰期；ｔ１／２β：消除半衰期；Ｖｄ：表观分布容积；ＣＬ／Ｆ：清除率；ＡＵＣ：药物浓度－时间曲线下面积；Ｃｍａｘ：达峰浓
度；Ｔｍａｘ：达峰时间；ｔ１／２Ｋａ：吸收半衰期．＊Ｐ＜０．０５与正常川芎组比较；△Ｐ＜０．０５，△△Ｐ＜０．０１与模型川芎组比较；▲Ｐ＜
０．０５，▲▲Ｐ＜０．０１与对应的正常组比较
３　讨　论
３．１　ＨＰＬＣ色谱条件的选择　本研究对ＦＡ的色
谱条件进行了优化。考察了等度洗脱和梯度洗脱２
种方式以及不同配比乙腈－水、甲醇－水、乙腈－甲酸
水、甲醇－甲酸水等流动相系统。结果显示，采用甲
·１０２８　 · 第二军医大学学报　２０１４年９月，第３５卷
醇－０．２％甲酸水溶液作为洗脱系统最佳，此条件下
药材中的ＦＡ以及血浆中的内源性物质和代谢产物
实现良好分离，基线平稳，ＦＡ色谱峰对称性良好，保
留时间适宜。选择ＦＡ的最大吸收波长３２２ｎｍ为检
测波长，响应值同等最高，保证了ＦＡ的检测灵敏度。
３．２　血浆样品前处理方法的选择　对不同蛋白沉
淀剂进行了筛选，先后比较了３倍于血浆量的乙腈、
甲醇、乙醇，以及０．１倍于血浆量的１０％高氯酸、１０％
三氯乙酸等试剂沉淀蛋白的效果，最终确定血样前处
理方法为０．１倍于血浆量的１０％ 高氯酸沉淀蛋白，３
倍于血浆量的乙酸乙酯萃取３次，此方法能使０．３８、
３．８、９．５ｍｇ／Ｌ的空白血浆＋ＦＡ对照品样品回收率
均在８５％ 以上，满足生物样品检测要求。
３．３　药代动力学考察结果分析　对比正常组和模
型组中ＦＡ的药代动力学数据可以发现，与正常组相
比，模型组中 ＦＡ 的Ｃｍａｘ和 ＡＵＣ（０－ｔ）均增大（Ｐ＜
０．０１），Ｔｍａｘ均推迟（Ｐ＜０．０５）、ＣＬ／Ｆ下降（Ｐ＜０．０１），
表观分布容积减小（Ｐ＜０．０５），说明在偏头痛病理条
件下，香附能促进川芎中ＦＡ更多地吸收入血，机体
对其吸收和清除变慢，使其在体内的停留时间和作用
时间延长，从而能更好地发挥药效。本实验结果提示
香附对川芎起到了协同增效作用，在病理状态下尤为
显著。由于某些中药在某一证候存在的情况（机体处
于特定病理状态）下才能体现其药效，仅在正常生理
状态下进行中药成分的代谢研究则不能全面评价其
药效，还必须考察病理状态下中药成分在体内的吸
收、分布、生物转化、消除等药代动力学过程。
４　利益冲突
　　所有作者声明本文不涉及任何利益冲突。
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［本文编辑］　尹　茶