全 文 ：茅苍术多糖的分析
韩　丽 ,欧阳臻＊ ,杨　凌 ,张　磊
(江苏大学药学院制药工程系 ,江苏镇江 212013)
　　摘要　目的:从茅苍术中提取粗多糖 ALP, 进行分离纯化 , 得到均一的多糖 ALP2, 并初步研究其组成和结构。
方法:采用热水提取后残渣稀碱水提取 , 乙醇沉淀 ,三氯乙酸法脱蛋白 , DEAE-52柱层析 , SephadexG-100柱层析分
离纯化得白色粉末状多糖。HPLC法进行纯度鉴定 , 气相色谱法测定其单糖组成。结果:纯度鉴定其为均一组分;
红外光谱显示有多糖的特征结构;气相色谱分析 , 茅苍术多糖由鼠李糖 、阿拉伯糖和半乳糖三种单糖组成 , 其摩尔
比为鼠李糖∶阿拉伯糖∶半乳糖 =0.59∶4.42∶0.54。结论:本研究为茅苍术的进一步开发利用提供了一定的理论依
据。
关键词　茅苍术;多糖;红外光谱;气相色谱
中图分类号:R284　　文献标识码:A　　文章编号:1101-4454(2008)12-1841-03
基金项目:江苏省自然科学基金项目(BK2004062);江苏省中医药局中医药科技专项(HZ07005)作者简介:韩丽(1980-),女 ,硕士研究生 ,主要从事天然药物研究与开发。＊通讯作者:欧阳臻 , Tel:0511-8791564, E-mail:zhenouyang@ujs.edu.cn。
　　茅苍术 Atractylodeslancea(Thunb.)DC.系菊
科苍术属多年生草本植物 。因主产于江苏茅山地区
而得名茅苍术 ,也称南苍术。性温 ,味甘 、苦;归
脾 、胃 、肝经。具有燥湿健脾 、祛风散寒 、明目的功
效 。国内外研究表明 ,茅苍术具有抗溃疡 、抗心率失
常 、降血压 、利尿 、保肝 、抗炎 、抗菌等作用 〔1, 2〕。迄
今 ,对茅苍术的研究多集中在对挥发性成分的化学
和药理研究上〔3〕 ,对水溶性成分的研究报道较少 。
茅苍术 多糖 (Atractylodeslanceapolysaccharide,
ALP)是从茅苍术中提取的水溶性大分子物质 。有
研究发现 , 苍术中的水溶性多糖具有肠免疫活
性 〔4〕。一般来说 ,多糖的功效作用与其结构和组成
有着密切的关系 ,而茅苍术多糖结构组成的研究 ,目
前国内尚未见报道。本文研究了茅苍术多糖的提取
纯化及结构组成 ,以期为茅苍术的进一步研究与应
用提供依据 。
1　材料 、仪器及试剂
1.1　材料　茅苍术采自江苏茅山自然保护区 ,经
江苏大学欧阳臻教授鉴定为菊科植物茅苍术 Atrac-
tylodeslancea(Thunb.)DC.的干燥根茎。
1.2　仪器及试剂　UV-2102 PCS型紫外分光光度
计(尤尼柯上海仪器有限公司);SHB-111循环水式
多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);ALRа冷
冻干燥机(德国);R-200旋转蒸发仪(Buchi公司);
METTLERAE240分析天平(上海托利多-梅特勒仪
器有限公司);NEXUS670智能型傅里叶红外光谱仪
(美国尼高利公司);UV-2102PCS紫外-可见分光光
度计(上海优尼科公司);高效液相色谱仪(日本分
光公司);示差折光检测器和 N2000色谱工作站 ,
Agilent4890D气相色谱仪(美国惠普公司);氢火焰
离子化检测器;HP-1毛细管柱 。茅苍术多糖(本实
验室提取纯化);标准单糖(Sigma公司);肌醇六乙
酸酯(内标 ,本实验室合成);苯酚 、硫酸 、乙醇 、盐酸
羟胺 、吡啶 、乙酸酐 、肌醇均为分析纯。
2　方法
2.1　粗多糖的提取 　称取一定量茅苍术干燥粉
末 ,依次用石油醚和无水乙醇进行脱脂 ,然后将药材
粉末经热水提取后残渣按预先设计的料液比加 5%
的氢氧化钠于 4℃下冷浸提取 ,提取液浓缩至原液
的 1/5,缓缓加入 95%的乙醇 ,使乙醇含量达 80%
(V/V),于冰箱中静置 12 h,可见大量的浅棕色沉
淀析出 ,以 3000 r/min离心 15min,沉淀依次用无水
乙醇 ,丙酮 ,乙醚淋洗 ,得疏松粉末后加适量水复溶 ,
冷冻干燥 ,即得茅苍术粗多糖 。
2.2　茅苍术多糖的含量测定　采用改良的苯酚 -
硫酸法〔5〕。
2.3　茅苍术多糖的纯化
2.3.1　三氯乙酸(TAC)法脱除蛋白质〔6〕:用少量
蒸馏水溶解粗多糖 ,放入冰水浴中 ,搅拌下缓慢滴加
20%的三氯乙酸至终浓度为 3%,溶液不再产生浑
浊 ,冰浴中静置 4h,可见下层有胶状蛋白质析出 ,以
3000 r/min离心 ,弃去沉淀 。取少量上清液 , UV检
测 ,结果如图 1。将上清液装入透析袋中流水透析
2d,浓缩 ,加入 95%的乙醇 ,使乙醇含量达 80%(V/
V), 于冰箱中静置 12 h后以 3000 r/min离心
15min,取沉淀 ,冷冻干燥 ,即得脱除蛋白质的茅苍术
多糖(ALP)。
2.3.2　DEAE-52柱层析和 SephadexG-100凝胶柱
·1841·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2008.12.027
层析:将茅苍术多糖(ALP)用少量蒸馏水溶解后上
DEAE-52柱 ,用不同浓度的氯化钠洗脱 ,流速 1.0
ml/min,硫酸 -苯酚法跟踪检测 。收集尖峰部分的溶
液 ,透析 ,冻干 ,得较纯的茅苍术多糖(ALP1)。然后
取(ALP1)用少量蒸馏水复溶后上 SephadexG-100
凝胶柱 ,流速 0.3ml/min,硫酸-苯酚法跟踪检测 。收
集尖峰部分的溶液 ,透析 ,冻干 ,得精多糖(ALP2)。
图 1　三氯乙酸法除蛋白质后的 UV图
2.4　多糖的纯度鉴定　采用高效液相色谱法 。见
图 2。
图 2　茅苍术多糖的高效液相色谱图
2.5　结构鉴定
2.5.1　红外光谱分析:取经过干燥的茅苍术多糖
样品 1 mg与 100 ～ 200 mg经干燥的溴化钾粉末在
红外灯下于玛瑙研钵中研磨均匀 ,压成薄片 ,进行红
外光谱测定 。见图 3。
图 3　茅苍术多糖的红外光谱
2.5.2　气相色谱分析:(1)气相色谱条件:载气 N2
流速为 1 ml/min,分流比 40∶1。柱温:起始温度
130℃,保持 5 min, 程序升温 4℃/min, 终止温度
240℃,保持 5 min,进样口温度 250℃,检测器温度
250℃。 (2)单糖衍生物的制备:准确称取 6种标准
单糖各 5.0 mg于反应瓶中 ,加入盐酸羟胺 5.0 mg
和内标 5.0 mg,加入吡啶 0.5 ml,振荡混匀 , 放入
90℃的水浴中加热反应 30 min。取出后冷却至室
温 ,加入 0.5 ml乙酸酐 ,在 90℃继续反应 30min进
行乙酰化 ,反应产物经 0.45 μm滤膜过滤后取 0.5
μl进行气相色谱分析。 (3)茅苍术多糖衍生物的制
备:精密称取茅苍术多糖样品 5.0 mg于安瓿瓶中 ,
加新鲜配置的 2 mol/L的硫酸溶液 3 ml,用酒精喷
灯封口。放入 100℃的水浴中加热水解 8h,取出水
解液加碳酸钡中和至中性 ,冻干 。后按照单糖衍生
化的方法 ,依次加入各种试剂进行衍生化反应 ,反应
产物经 0.45 μm滤膜过滤后取 0.5 μl进行气相色
谱分析。结果见图 4,图 5。
图 4　混合标准单糖气相色谱图谱
1.鼠李糖　2.阿拉伯糖　3.木糖　4.甘露糖　5.葡萄糖
6.半乳糖　7.内标
图 5　茅苍术多糖水解产物气相色谱图
从左至右的四个峰依次为:1.鼠李糖　2.阿拉伯糖　3.半
乳糖　4.内标
3　结果与讨论
3.1　茅苍术多糖的研究　茅苍术多糖为白色粉
末 ,易溶于水 ,不溶于其它有机溶剂 。硫酸-苯酚法
测得粗多糖中多糖含量为 7.39%。
3.2　TCA法除蛋白　从图 1可以看出 ,在波长 260
nm及 280 nm处无明显吸收峰 ,说明无核酸及蛋白
质。此法与除蛋白常用的 Sevag法和酶法比较 ,
TCA法操作简便 ,蛋白清除效率高。
3.3　多糖的纯度鉴定　从图 2可以看出 ,提取纯
化后的多糖经 HPLC测定 ,峰形单一对称 ,可认为其
相对分子质量分布较为集中 ,为纯多糖 。
3.4　多糖的红外光谱分析　如图 3所示 ,茅苍术
多糖具有一般多糖在红外光谱中的特征吸收峰 ,
3428 cm-1处的宽峰为 -OH的 O-H伸缩振动和 N-H
·1842· JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月
的伸缩振动 , 2924 cm-1处为 -CH2 的 C-H伸缩振
动 , 1654 cm-1是 C=O伸缩振动 , 1541cm-1处是 N-H
的变角振动 , 1112 cm-1是吡喃糖环的醚键 C-O-C的
伸缩振动。茅苍术多糖的红外光谱显示了糖的特征
结构。
3.5　多糖的气相色谱分析　根据茅苍术多糖样品
的 GC图和各种单糖标准品的 GC图比较 ,可以确定
在茅苍术多糖中含有 3种单糖成分:鼠李糖 、阿拉伯
糖 、半乳糖。各种单糖组成的摩尔比为:鼠李糖∶阿
拉伯糖∶半乳糖 =0.59∶4.42∶0.54。
参 考 文 献
[ 1] K.W.Yu, H.Kiyohara, T.Matsumoto, etal.Structural
characterizationofintestinalimmunesystem modulating
newarabino-3, 6-galactanfrom rhizomesofAtractylodes
lanceaDC.CarbohydratePolymers2001, 46:147-156.
[ 2] ReschM, SteigelA, ChenZL, etal.5-Lipoxygenaseand
cyclooxygenase-1 inhibitoryactivecompoundsfromAtrac-
tylodeslancea.JNatProd., 1998, 61(3):347-350.
[ 3] 郭兰萍 , 刘俊英 , 吉力 , 等 .中国中药杂志 , 2002, 27
(11):814-819.
[ 4] YuPZ, LiN, LiuXG, etal.PhamacologicalResearch,
2003, 48(6):543-549.
[ 5] 董群 , 郑丽伊 ,方积年 .改良的苯酚-硫酸法测定多糖和
寡糖含量的研究 .中国药学杂志 , 1996, 31(9):550-
553.
[ 6] 张琳华 .桑叶中多糖提取分离工艺的研究 .中草药 ,
2005, 36(4):534-537.
(2008-06-05收稿)
灵芝孢子油中麦角甾醇含量测定方法研究
陈路林 ,李吉来 ,宁德山 ,陈文俊 ,葛发欢
(中药提取分离过程现代化国家工程研究中心 /广州汉方现代中药研究开发有限公司 ,广东广州 510240)
　　摘要　目的:建立灵芝孢子油的含量控制方法。 方法:采用 HPLC色谱法建立了灵芝孢子油中的麦角甾醇含
量测定方法。结果:能准确的测定原料及制剂中的该成分的含量 , 该方法操作简便 , 重现性高 ,特异性强 , 麦角甾醇
在 0.316 ～ 580mg/ml范围内呈良好的线性关系;回归方程:Y=1.08581X+1.58888, r=0.9999;平均加样回收率在
99.37% ～ 103.80%之间 , RSD为 1.54%。结论:可作为控制灵芝孢子油类产品质量的有效方法和依据。
关键词　灵芝孢子油;HPLC色谱法;麦角甾醇;含量测定
中图分类号:R284.1　　文章标识码:A　　文章编号:1001-4454(2008)12-1843-03
　　灵芝孢子粉是灵芝成熟时期不断从菌盖下释放
的孢子 ,具有滋养强壮 、扶正固本 、补益精气 、宁心安
神 、健脾和胃之功效 ,现代研究表明灵芝孢子粉有抗
肿瘤 、抗辐射 、降血糖 、降血脂 、抗氧化及免疫增强作
用 〔1〕 ,灵芝孢子粉主要成分包括:脂肪酸类 、甾醇
类 、三萜类 、维生素类 、胡萝卜素等 ,破壁灵芝孢子脂
质活性物质为灵芝孢子油〔2〕。麦角甾醇类是菌类
植物中特有成分 ,有文献报道存在于灵芝孢子粉中 ,
灵芝孢子油是目前所了解的唯一的菌类植物油 ,因
此麦角甾醇可以作为灵芝孢子油区别于其它植物油
的特征成分 〔3〕。本研究在前期对灵芝孢子油中甾
醇类成分的分离与鉴定研究的基础上 ,在国内首次
建立了灵芝孢子油及其制剂中麦角甾醇的含量测定
方法 ,为灵芝孢子油及其制剂产品的质量控制提供
了有效方法和检验依据。
1 　仪器与样品
仪器:Agilent1100高效液相色谱仪 , DAD检测
器 ,四元梯度泵 , G2170AA数据处理软件系统(美
国)。甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 ,其它试剂均为分
析纯 。
对照品麦角甾醇由 sigma公司提供;灵芝孢子
油由广州汉方现代中药研究开发有限公司从灵芝孢
子粉中提取 ,灵芝孢子粉经鉴定为多孔菌科灵芝
GanodermaLucium(LeyS.exFr.)Karst的干燥孢子。
产地:山东 、安徽 、梅州 。灵芝孢子油生产批号:
0508003、 0508005、 0501006、 0510006、 0511008、
0511009、 0602003、 0603004、 0603005、 0605002、
0606001。
2　含量测定
2.1　色谱条件　色谱柱:KormasilC18(4.6 mm×
250 mm, 5μm)柱;柱温:30℃;检测波长:280 nm,流
速:0.8ml/min。
2.2　流动相的选择 　考察麦角甾醇在 Kromasil
C18柱 、不同流动相中的各参数 ,结果以甲醇 、甲醇 -
·1843·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 31卷第 12期 2008年 12月