全 文 ：HPLC-Q-TOF-MS和 UPLC-QqQ-MS的三叶青
主要成分定性与定量研究
许文1，2，3，傅志勤1，林婧3，黄学城1，陈丹1，于虹敏1，黄泽豪1* ，范世明1*
(1. 福建中医药大学 药学院，福建 福州 350122;2. 福建中医药大学 生物医药研发中心，福建 福州 350122;
3. 福建中医药大学 中西医结合研究院，福建 福州 350122)
［摘要］ 建立高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法(HPLC-Q-TOF-MS)快速鉴定三叶青化学成分，建立超高效液相
色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-QqQ-MS)同时测定三叶青中 4 种成分(芦丁、异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、紫云英苷)的含
量。HPLC-Q-TOF-MS法采用月旭 Ultimate-XB C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)-0. 1%甲酸水(B)梯度
洗脱，流速 0. 8 mL·min －1，柱温 30 ℃。飞行时间质谱，采用负离子模式扫描。UPLC-QqQ-MS 法采用 Waters COＲTECS C18
(2. 1 mm × 100 mm，1. 6 μm) ，流动相为乙腈(A)-0. 1%甲酸水(B)梯度洗脱，柱温 45 ℃，采用负离子多反应监测(MＲM)方式
进行含量测定。结果 HPLC-Q-TOF-MS法推断鉴定了三叶青中的 24 种成分，UPLC-QqQ-MS 法定量分析三叶青中 4 种成分在
考察的浓度范围内，线性关系良好(r ＞ 0. 996 6) ;回收率均在 98. 27% ～ 101. 6%，ＲSD 3. 2% ～ 5. 9%。通过 HPLC-Q-TOF-MS
联用技术，为鉴定三叶青的化学成分提供了一种快速、高效的定性分析方法。建立的 UPLC-QqQ-MS同时测定三叶青中 4 种
成分的定量分析方法简便、快捷、准确，为综合评价三叶青的质量提供参考。
［关键词］ 三叶青;HPLC-Q-TOF-MS;UPLC-QqQ-MS;质量控制
［收稿日期］ 2014-06-09
［基金项目］ 福建省教育厅课题(JA13154) ;福建中医药大学校管课
题(X2013017) ;福 建 省“大 学 生 创 新 创 业 训 练 计 划”项 目
(20140393063)
［通信作者］ * 黄泽豪，副教授，研究方向为中草药品种鉴定及化学
成分研究，E-mail:huangzehao@ fudan. edu. cn;* 范世明，高级实验师，
研究方向为中药鉴定与资源评价研究，E-mail:3570379@ 163. com
三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤 Tet-
rastigma hemsleyanum，其块根名为蛇附子，异名有石
猴子、石抱子、拦山虎、雷胆子、破石珠、阴灵子、三叶
扁藤、金丝吊葫芦，是福建、浙江地区传统习用青草
药，习称为“一粒珠”。三叶青以块根入药，具有清
热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，现代药理研究
表明三叶青具有抗炎、镇痛及解热、抗肿瘤、抗病毒、
调节免疫［1］等作用，并广泛用于多种中成药或保健
品，如华佗风痛宝、结石康胶囊、三叶青粉末、金丝地
甲胶囊、金芪片等。三叶青中的化学成分研究已有
报道［2-5］，但以这些分离得到的成分为指标的质量控
制却未见报道。近来，HPLC-Q-TOF-MS 技术广泛运
用于中药及复方多成分的鉴定上［6-7］，通过液相色谱
分离，利用串联高分辨飞行时间质谱的精确分子量
定性优势，全面而快速对中药多成分进行准确鉴定。
另外，目前关于三叶青块根药材质量控制的研究报
道也较少［8-9］，因此本文采用 HPLC-Q-TOF-MS 对三
叶青化学成分进行全面定性分析，同时采用 UPLC-
QqQ-MS法对其 4 种主要成分进行定量分析，为三
叶青的质量控制提供新的科学依据。
1 仪器与试药
MicrOTOF 飞行时间质谱仪(德国 Bruker 公
司) ;Xevo TQMS 三重四级杆质谱(美国 Waters 公
司) ;CPA225D 型 1 /10 万分析天平(德国 Sartorius
公司) ;KQ-500E 台式超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司) ;FY135 型中草药粉碎机(天津市泰斯
特仪器有限公司) ;乙腈为色谱纯(德国 MEＲCK 公
司) ;Milli-Q 超纯水(美国 Millipore公司) ;其余试剂
均为分析纯。
对照品芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷
及紫云英苷由本实验室分离制备，1 H，13 C-NMＲ 和
MS数据与文献［10］比较确认;纯度经 HPLC-DAD(面
积归一法)检测含量均大于 98. 0%。儿茶素、表儿
茶素、表没食子儿茶素、原花青素 B1、原花青素 B2、
山柰酚-3-O-新橙皮苷和对羟基苯甲酸由本实验室
从三叶青中分得，供 QTOF定性鉴定比对使用;内标
甘草苷购自上海同田生物技术股份有限公司，新绿
原酸、隐绿原酸、绿原酸购自北京赛百草科技有限公
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司。三叶青 26 批样品分别采自或购自不同产地，经
福建中医药大学药用植物实验室范世明高级实验师
及生药教研室黄泽豪副教授鉴定，均为葡萄科植物
三叶青 T. hemsleyanum 的干燥块根，样本存放于福
建中医药大学药学院药用植物标本室。
2 方法与结果
2. 1 色谱及质谱条件
2. 1. 1 HPLC-Q-TOF-MS 分析 色谱条件为月旭
Ultimate-XB C18色谱柱(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，
流动相乙腈(A)-(0. 1% 甲酸)水(B) ，梯度洗脱
(0 ～ 5 min，5% ～ 10% A;5 ～ 30 min，10% ～ 15%
A;30 ～ 40 min，15% ～18%A;40 ～ 50 min，18% ～
23%A;50 ～ 60 min，23% ～ 37% A;60 ～ 70 min，
37% ～70%A;70 ～ 100 min，70% A) ，流速 0. 8 mL
·min －1，柱温 30 ℃，进样量 2 μL。质谱条件为飞
行时间质谱采用电喷雾负离子模式:毛细管电压
4. 5 kV，喷雾器压力 2. 0 bar，干燥气体(N2)流速
4. 0 L·min －1，干燥气体温度 180 ℃，funnel 1∶ 200. 0
Vpp，funnel 2∶ 200. 0 Vpp，hexapole Ｒf 100. 0 Vpp，四
级杆离子能量 3. 0 eV，collision Ｒf 150. 0 Vpp，离子
传输时间 80 μs，前脉冲存储时间 5 μs，碰撞气体氩
气，碰撞能量 30 eV。质谱测定数据采用全扫描模
式采集，数据采集范围 m / z 50 ～ 1 000。
2. 1. 2 UPLC-QqQ-MS 法定量分析 色谱条件 Wa-
ters COＲTECS C18(2. 1 mm × 100 mm，1. 6 μm) ，流
动相乙腈(A)-(0. 1%甲酸)水(B) ，梯度洗脱(0 ～
0. 5 min，8% ～ 10% A;0. 5 ～ 2. 5 min，10% ～ 15%
A;2. 5 ～ 4. 5 min，15% ～ 20% A;4. 5 ～ 6. 5 min，
20% ～40% A;6. 5 ～ 8. 5 min，10% ～ 10% A) ，流速
0. 25 mL·min －1，柱温 45 ℃，进样量 1 μL。质谱条
件:电喷雾负离子模式，毛细管电压 2. 5 kv，锥孔电
压 50 v，脱溶剂气流 N2 800 L·h
－1，脱溶剂温度 200
℃，锥孔气流 N2 50 L·h
－1，离子源温度 150 ℃，Ex-
tractor 3. 00 V，碰撞气体氩气。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 供试品溶液的制备 取三叶青药材粉碎，过
60 目筛得三叶青药材粉末。取三叶青 0. 5 g，精密
称定，置具塞三角瓶中，精密加入 80% 甲醇 25 mL，
密塞，称定质量，超声处理(功率 250 W，频率 50
kHz)30 min，放冷，再称定质量，用 80%甲醇补足减
失重，摇匀，0. 22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。用
于定量分析的样品:取续滤液稀释 5 倍，按 1 ∶ 1
(300∶ 300，μL)加入内标后测定。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 取芦丁、异槲皮苷、山
柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷对照品适量，精密称
定，加入甲醇分别制备含 1. 132，1. 244，1. 108，
0. 206 g·L －1的单一对照品储备液。其他不同质量
浓度的对照品溶液由乙腈稀释储备液得到。内标液
为甘草苷，质量浓度为 500 μg·L －1。
2. 3 三叶青化学成分数据库的建立
查阅国内外三叶青块根、叶及其同属植物狭叶
崖爬藤［2-5，11］化学成分研究相关文献，收集了三叶青
中各类化学成分，并通过 micrOTOF Compass Iso-
topePattern 软件(含各元素精确质量数) ，根据各成
分碳、氢、氧的个数，计算精确相对分子质量，建立包
括化合物名称、分子式、精确相对分子质量的三叶青
化学成分数据库。
2. 4 三叶青中主要化学成分的鉴定
三叶青样品在 2. 1. 1 项色谱条件及质谱条件下
分析得三叶青的 HPLC-Q-TOF-MS 总离子流图，见
图 1。化合物的鉴定方法是:首先，根据总离子流色
谱峰上所得到的精确化合物分子量信息，通过 Com-
pass DataAnalysis Smart Formula Manually 软件在 5
ppm的质量偏差范围内计算其精确分子式，与所建
的数据库进行比对，对各化合物进行初步鉴定。其
次，选择合适分子离子峰进行碰撞诱导解离(CID) ，
通过二级质谱的裂解，获得化合物相应的碎片离子，
根据离子的裂解情况并结合标品及文献进一步比对
推测，共鉴定三叶青中 24 种成分。
峰 1 和峰 2 TOF-MS均给出分子离子峰 305. 066
9，质谱软件计算出精确分子式为 C15H14O7，与三叶青
化学成分数据库比对，与文献报道的没食子酰基儿
茶素分子式一致，初步推测其为没食子儿茶素或表
没食子儿茶素。再根据 TOF-MS 二级碎片离子有
m/z 287，261，219，179，167，137，125，与文献［12］
报道没食子儿茶素二级质谱离子相一致，并且经裂
解推测二级质谱图上 m/z 287 峰为［M － H －
H2O］
－，m/z 261 为［M － H － CO2］
－，m/z 219 峰为
［M － H － CO2 － C2 H2 O］
－，m/z 179 峰为［M － B
ring］－，m/z 167 和 m/z 137 峰是 A环 1，3 开环裂解
碎片峰，m/z 125 峰是 A环 1，4 开环裂解碎片峰，见
图 2，并且其中峰 2 经标品比对确认为表没食子儿
茶素。峰 3，4，6，12 TOF-MS 均给出分子离子峰
577. 135 4，质 谱 软 件 计 算 出 精 确 分 子 式 为
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C30H26O12，与文献报道的原花青素二聚体类分子式
一致，再根据 TOF-MS二级碎片离子 m/z 425，407，
289，245，125 与文献［13］报道原花青素二级质谱相
一致，并且峰 4 和峰 6 经标品比对分别确定为原花
青素 B1 和原花青素 B2，而峰 3 和峰 12 暂时鉴定为
原花青素二聚体。其质谱裂解过程见图 2。其余色
谱峰采用类似方法鉴定:峰 5 经标品比对为对羟基
苯甲酸，其二级质谱 m/z 93 峰为［M － H － CO2］
－。
峰 7，9 和 10 为绿原酸及异构体，其二级质谱 m/z
191 峰为［M － H － caffeoyl］－。峰 8 和 11 经标品比
对为儿茶素和表儿茶素，其二级质谱裂解见图 2。
峰 13，14，15，16，18，19 和 20 均为槲皮素或山奈酚
的氧苷黄酮类成分，其二级质谱均为苷键裂解产生
相应的苷元碎片。峰 17 经鉴定为氧化白藜芦醇，
m/z 225 峰为［M － H － H2O］
－，m/z 199 峰为［M －
H － CO2］
－，m/z 175 峰为苯环 1，4开环产生［M －
H － C3 H4 O2］
－，其继续脱一分子水产生 m/z 157
峰。峰 21 号经推测为二咖啡酰奎宁酸，m/z 353 峰
为［M － H － caffeoyl］－，m/z 191 峰为［M － H －
2caffeoyl］－。峰 22，23 和 24 为芹菜素、槲皮素和山
奈酚，黄酮苷元二级质谱易发生丢失 CO，CO2，C2
H2O及 C 环 1，3 位或 1，4 位的 ＲDA 裂解
［14］，产生
相应的碎片峰。HPLC-Q-TOF-MS鉴定结果见表 1。
图 1 三叶青样品 HPLC-Q-TOF-MS的负离子流图
Fig. 1 HPLC-Q-TOF-MS total ion chromatogram of Tetrastigma
hemsleyanum in negative ion mode
2. 5 UPLC-QqQ-MS定量方法学考察
2. 5. 1 质谱测定方法 采用 MＲM 定量模式，4 种
分析物及内标的质谱分析条件参数见表 2，三叶青
样品和混合对照品在 2. 1. 2 项色谱条件及质谱条件
下分析得三叶青的 UPLC-QqQ-MS 色谱图，见图 3。
4 种分析物及内标均基线分离，并且黄酮甘草苷内
标出峰介于 4 种分析物之间，符合定量分析要求。
2. 5. 2 线性和范围 取 2. 2. 2 下方法制备的各对
照品储备液，用 50%甲醇稀释配制系列梯度浓度的
对照品混合溶液，测定前按 1∶ 1(300∶ 300 μL)加入
内标。在 2. 1. 2 项下测定峰面积，以峰面积与内标
峰面积的比值(Y)对分析物浓度(X)作线性回归，
绘制标准曲线，得到回归方程和相关系数，并以信噪
比 S /N = 10 计算定量限，以信噪比 S /N = 3 计算检
测限，结果见表 3。
2. 5. 3 精密度试验 精密吸取同一份对照品混合
溶液 1 μL，在 2. 1. 2 项下 1 d 内连续进样 6 次，及连
续 3 d测定，分别记录 4 种分析物及内标的峰面积，
根据标准曲线计算浓度，其日内精密度 ＲSD 分别为
2. 1%，1. 9%，3. 9%，1. 9%，日间精密度 ＲSD 分别为
3. 2%，2. 3%，3. 8%，2. 9%，表明仪器精密度良好。
2. 5. 4 稳定性试验 取本品按 2. 2. 1 项下制备供
试品溶液，分别于 0，2，6，10，12 和 24 h 按 2. 1. 2
项下测定，记录 4 种分析物及内标峰面积，根据标准
曲线计算浓度，其 ＲSD分别为 1. 9%，2. 8%，3. 4%，
4. 0%，表明样品在 24 h内稳定。
2. 5. 5 重复性试验 精密称取同一批三叶青样品
6 份，按 2. 2. 1 项下制备供试品溶液，按 2. 1. 2 项下
测定峰面积，计算 4 种分析物的质量分别为
443. 44，235. 64，919. 58，128. 63 μg· g －1，其含量
ＲSD分别为 3. 3%，3. 3%，4. 3%，1. 7%，表明方法
重复性良好。
2. 5. 6 回收率试验 精密称取 2. 5. 5 项下已知含
量的三叶青粉末 6 份，约 0. 5 g，精密加入近似等量
的 4 种对照品，按 2. 2. 1 项下方法制备供试品溶液，
按 2. 1. 2 项下测定含量，结果见表 4。
2. 5. 7 样品含量测定 分别精密称取不同批次的
三叶青样品粉末 0. 5 g，按 2. 2. 1 项下方法制备供试
品溶液，按 2. 1. 2 下测定峰面积，根据标准曲线计算
其含量，结果见表 5。
3 讨论
3. 1 HPLC-Q-TOF-MS定性分析
比较了正离子模式和负离子检测模式，发现负
离子模式下峰响应优于正离子模式，同时较多文献
报道了负离子模式下文中化合物的质谱解析，方便
二级质谱的文献比对。通过色谱条件优化，比较了
4 种流动相系统:乙腈-0. 5%醋酸水，乙腈-0. 1%甲
酸水，甲醇-0. 1%甲酸水，甲醇-0. 5%醋酸水，结果
表明，使用乙腈-0. 1%甲酸最佳，添加 0. 1%甲酸不
仅有利于峰形的改善，还可以增加质谱响应。TOF-
MS鉴定过程中，一级质谱只能给出分子离子峰的精
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图 2 表没食子儿茶素(A)、原花青素 B1(B)和儿茶素(C)质谱裂解过程
Fig. 2 The detail fragmentation pathway of EGC(A) ，Procyanidins B1(B)and (+)-catechin (C)
确分子式，虽然有些成分分子离子峰一致，但可以根
据其二级质谱数据的差异加以区分，紫云英苷和槲
皮苷的分子离子峰相同，但是其二级质谱产生的苷
元碎片峰 284，285 和 300，301 不同而相互区分，并
且黄酮氧苷类成分其在负离子模式下均产生［M －
H －糖基］－ 和［M － 2H － 糖基］－ 2 种苷元峰。另
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表 1 三叶青各化学成分的鉴定分析
Table 1 Qualitative analysis of chemical constituents in Tetrastigma hemsleyanum
No. tＲ /min 化合物 分子式 测定值 m/z 理论值 m/z 误差 二级质谱 m/z
1［12］ 9. 63 没食子儿茶素 C15H14O7 305. 066 9 305. 066 1 2. 62 287，261，219，179，167，137，125
2［12］ 10. 19 表没食子儿茶素1) C15H14O7 305. 066 9 305. 066 1 2. 62 287，261，219，179，167，137，125
3［13］ 12. 72 原花青素二聚体 C30H26O12 577. 135 4 577. 134 6 1. 39 425，407，289，245，125
4［13］ 13. 69 原花青素 B11) C30H26O12 577. 135 8 577. 134 6 2. 08 425，407，289，245，125
5［3］ 14. 36 对羟基苯甲酸1) C7H6O3 137. 023 6 137. 023 9 －2. 19 93
6［13］ 14. 96 原花青素 B21) C30H26O12 577. 134 4 577. 134 6 －0. 35 425，407，289，245，125
7［11，15］ 11. 93 新绿原酸1) C16H18O9 353. 088 7 353. 087 3 3. 97 191
8［13］ 16. 87 儿茶素1) C15H14O6 289. 072 7 289. 071 3 4. 84 245，203，179，151，137，125
9［11，15］ 16. 94 绿原酸1) C16H18O9 353. 087 4 353. 087 3 0. 28 191
10［11，15］ 18. 06 隐绿原酸1) C16H18O9 353. 088 3 353. 087 3 2. 83 191
11［13］ 24. 14 表儿茶素1) C15H14O6 289. 071 5 289. 071 3 0. 69 245，203，179，151，137，125
12［13］ 32. 04 原花青素二聚体 C30H26O12 577. 136 4 577. 134 6 3. 12 425，407，289，245，125
13［3］ 39. 98 山奈酚-7-O-鼠李糖-3-O-葡萄糖苷 C27H30O15 593. 152 4 593. 150 7 2. 87 284，285
14［15］ 42. 24 芦丁1) C27H30O16 609. 145 4 609. 145 6 －0. 33 300，301
15［14］ 42. 85 山柰酚-3-O-新橙皮苷1) C27H30O15 593. 152 0 593. 150 7 2. 19 284，285
16［15］ 44. 22 异槲皮苷1) C21H20O12 463. 088 8 463. 087 7 2. 38 300，301
17［16］ 45. 53 氧化白藜芦醇 C14H12O4 243. 066 7 243. 065 7 4. 11 225，199，175，157
18［15］ 49. 25 山柰酚芸香糖苷1) C27H30O15 593. 152 2 593. 150 7 2. 53 284，285
19［15］ 50. 95 紫云英苷1) C21H20O11 447. 094 4 447. 092 7 3. 80 284，285
20［14］ 52. 01 槲皮苷 C21H20O11 447. 094 2 447. 092 7 3. 36 300，301
21［15］ 55. 81 二咖啡酰奎宁酸 C25H24O12 515. 119 1 515. 119 0 0. 19 353，191
22［14］ 59. 01 芹菜素 C15H10O5 269. 045 0 269. 045 0 0. 00 227，225，151，117
23［14］ 62. 63 槲皮素 C15H10O7 301. 036 2 301. 034 8 4. 65 273，229，179，151，121，107
24［14］ 67. 07 山柰酚 C15H10O6 285. 040 5 285. 039 9 2. 10 255，227，181
注:1)表示与对照品比对确认。
表 2 4 种分析物及内标甘草苷(IS)的质谱测定条件
Table 2 MS analysis on parameters of 4 detected compounds and liquiritin (IS)
化合物 前体离子 /m/z 子代离子 /m/z 锥孔电压 / v 碰撞能量 / eV
芦丁 609. 14 300. 02 35 35
异槲皮苷 463. 08 300. 02 45 28
山柰酚芸香糖苷 593. 15 285. 04 35 30
紫云英苷 447. 09 284. 03 35 22
甘草苷(IS) 417. 12 255. 06 25 20
外，结构相似的同分异构体，其不仅分子式一样，而
且有着类似的质谱裂解方式，如新绿原酸、绿原酸、
隐绿原酸，他们的区分就需要对照品的比对来进一
步确认，文中也有部分同分异构体未有对照品比对，
如 4 个原花青素二聚体峰，其质谱行为完全一致，除
了原花青素 B1 和 B2 通过对照品确定外，其余 2 个
二聚体的取代位置暂时无法确定。
3. 2 UPLC-QqQ-MS定量分析
采用 MＲM 模式进行定量分析，通过 Mass Tune
对待测 4 种主要黄酮质谱参数进行优化，考察了最
佳的毛细管电压、锥孔电压、碰撞能量。色谱柱比较
了 Waters COＲTECS C18 (2. 1 mm × 100 mm，1. 6
μm)、Phenomenex kintecx (2. 1 mm × 100 mm，1. 7
μm)、Waters HSS T3 C18(2. 1 mm × 100 mm，1. 8
μm) ，结果表明 1. 6 μm 的超高效液相色谱柱在分
离度和灵敏度明显高于其他超高效液相色谱柱，并
且使 4 种分析物达到基线分离的分析时间大大缩
短，节省流动相，故最终选择 Waters COＲTECS C18
(2. 1 mm × 100 mm，1. 6 μm，USA)色谱柱。同时，
HPLC-Q-TOF-MS定性分析结果表明三叶青中芦丁、
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1. 芦丁;2. 异槲皮苷;3. 山柰酚-3-O-芸香糖苷;4. 紫云英苷;IS. 甘
草苷。
图 3 混合对照品(A)和三叶青样品(B)UPLC-QqQ-MS 色
谱图
Fig. 3 UPLC-QqQ-MS chromatograms of reference (A)and
Tetrastigma hemsleyanum sample(B)
异槲皮苷、山柰酚芸香糖苷、紫云英苷为其主要黄酮
类成分，而目前针对三叶青中这 4 种黄酮苷的含量
测定均未有报道，并且大量三叶青药理研究表明其
抗肿瘤药效物质基础为黄酮类成分［17-21］。因此，本
实验选择这 4 种成分进行同时定量研究。
3. 3 样品测定结果分析
对于 26 批三叶青含量测定，结果表明，不同产
地三叶青中 4 种黄酮含量差异很大，甚至有些批次
中未检测出。批次 2，5，20 芦丁含量较高，批次 2，
4，20 异槲皮苷含量较高，2，3，20，22，23 批次山奈酚
芸香糖苷含量较高，12，2，11 批次紫云英苷含量较
高，2，3，20，22，23 批次 4 种黄酮总量最高，另外本
次 3 个栽培产地收集的样品 4 种黄酮成分的含量相
表 3 三叶青中 4 种分析物的线性范围，检测限，定量限(n = 3)
Table 3 Calibration curves，linear ranges，LOQ and LOD of 4 detected compounds(n = 3)
化合物 线性方程 线性范围 /μg·L －1 r LOQ /μg·L －1 LOD /μg·L －1
芦丁 Y = 2. 948X － 0. 032 4 19. 91 ～ 1 991 0. 998 4 1. 99 0. 99
异槲皮苷 Y = 6. 011X － 0. 063 4 19. 96 ～ 1 996 0. 999 1 0. 99 0. 33
山柰酚芸香糖苷 Y = 2. 061X + 0. 002 3 9. 961 ～ 3. 984 0. 996 6 0. 98 0. 49
紫云英苷 Y = 4. 300X － 0. 014 3 9. 943 ～ 1. 988 0. 999 3 3. 28 0. 99
表 4 三叶青中 4 种分析物的回收率试验(n = 6)
Table 4 Ｒecoveries of 4 detected compounds(n = 6)
化合物 原含量 /μg 添加量 /μg 检测值 /μg 回收率 /% ＲSD /%
芦丁 221. 72 200 424. 18 ± 6. 37 101. 23 ± 3. 19 3. 15
异槲皮苷 117. 82 100 217. 36 ± 4. 55 99. 54 ± 4. 55 4. 57
山奈酚芸香糖苷 459. 79 500 967. 67 ± 23. 91 101. 58 ± 4. 78 4. 71
紫云英苷 64. 315 50 113. 45 ± 2. 89 98. 27 ± 5. 77 5. 88
表 5 三叶青中 4 种分析物的含量(n = 3)
Table 5 Determination of 4 detected compounds in Tetrastigma hemsleyanum (n = 3) μg·g －1
No. 来源 年份 芦丁 异槲皮苷 山柰酚芸香糖苷 紫云英苷 总和
1 湖南双牌野生 2014-01 160. 47 22. 27 291. 97 21. 37 496. 08
2 湖南药材市场 2012-12 443. 44 235. 64 919. 58 128. 63 1 727. 29
3 贵州凯里野生 2012-11 298. 63 90. 62 649. 31 66. 29 1 104. 85
4 贵州药材市场 2012-11 76. 2 184. 68 113. 07 83. 59 457. 54
5 贵州毕节野生 1 2012-12 334. 84 118. 01 390. 79 42. 2 885. 84
6 贵州毕节野生 2 2012-11 102. 13 36. 2 131. 76 15. 3 285. 39
7 浙江台州栽培 2013-09 209. 48 123. 41 386. 98 64. 08 783. 95
8 浙江磐安药材市场 2013-09 147. 07 51. 06 249. 56 27. 76 475. 45
9 浙江丽水药材市场 2013-09 71. 65 12. 98 135. 07 － 219. 70
10 浙江丽水栽培 2013-09 243. 98 96. 41 399. 5 58. 7 798. 59
11 福建福鼎野生 1 2012-12 21. 75 40. 92 59. 46 118. 95 241. 09
12 福建福鼎野生 2 2013-12 19. 21 118. 12 － 320. 69 458. 02
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续表 5
No. 来源 年份 芦丁 异槲皮苷 山柰酚芸香糖苷 紫云英苷 总和
13 福建福安栽培 2012-12 162. 91 124. 97 316. 43 76. 52 680. 84
14 福建福安野生 1 2012-12 17. 32 32. 88 19. 29 31. 77 101. 25
15 福建福安野生 2 2013-08 18. 18 22. 05 － 36. 39 76. 63
16 福建柘荣野生 2013-07 104. 8 41. 5 87. 65 23. 7 257. 65
17 福建古田野生 1 2013-08 69. 74 － 104. 18 － 173. 92
18 福建古田野生 2 2013-08 74. 96 23. 52 262. 12 24. 11 384. 71
19 福建光泽野生 1 2013-12 17. 01 29. 71 － 108. 84 155. 55
20 福建关泽野生 2 2013-01 337. 91 95. 04 524. 88 53. 69 1011. 52
21 亳州药材市场 2014-01 53. 92 20. 39 87. 23 20. 08 181. 62
22 安徽野生 1 2013-01 283. 12 137. 06 550. 06 50. 25 1020. 49
23 安徽野生 2 2013-01 272. 28 144. 6 528. 56 60. 18 1005. 62
24 重庆药材市场 1 2012-07 27. 27 25. 31 126. 97 71. 23 250. 78
25 重庆药材市场 2 2012-01 － 25. 85 28. 43 76. 36 130. 64
26 江西三青山野生 2013-01 74. 96 31. 15 112. 44 35. 68 254. 23
注:－表示含量低于检测限。
对较高，而野生品则差异悬殊，说明三叶青可能存在
较多的变种，提示药农引种过程中不能盲目从野生
品驯化种植，引种前除了对基原鉴定外，有必要对引
种样品进行黄酮成分测定评价。
本文建立 HPLC-Q-TOF-MS /MS联用技术，共鉴
定三叶青 24 个化合物，为三叶青成分定性提供了一
种快速、高效的分析方法;建立 UPLC-QqQ-MS 法同
时测定三叶青中 4 种成分的定量分析方法简便、快
捷、准确，为综合评价三叶青的质量提供参考。
［致谢］ 感谢福建中医药大学中西医结合研究院陈达
鑫在 TOF-MS测定中的帮助。
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2850.
Qualitative and quantitative analysis of major constituents in Tetrastigma
hemsleyanum by HPLC-Q-TOF-MS and UPLC-QqQ-MS
XU Wen1，2，3，FU Zhi-qin1，LIN Jing3，HUANG Xue-cheng1，CHEN Dan1，YU Hong-min1，HUANG Ze-hao1* ，FAN Shi-ming 1*
(1. School of Pharmacy，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China;
2. Centre of Biomedical Ｒesearch ＆ Development，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China;
3. Academy of Integrative Medicine，Fujian University of Traditional Chinese Medicine，Fuzhou 350122，China)
［Abstract］ A qualitative analytical method of liquid chromatography coupled with quadrupole time-of-flight tandem mass spec-
trometry(HPLC-Q-TOF-MS)was developed for identification of multi-constituents and an analytical method was developed for simulta-
neously determining 4 major compounds(rutin，isoquercitrin，kaempferol-3-O-rutinoside，and astragalin)in Tetrastigma hemsleyanum
Diels et Gilg. The HPLC-Q-TOF-MS assay was performed on a Welch Ultimate XB-C18 column (4. 6 mm × 150 mm，5 μm)with the
mobile phase consisting of acetonitrile (A)and water containing 0. 1% Formic acid (B)in gradient mode at a flow rate of 0. 8 mL·
min －1. The column temperature was at 30 ℃，and negative ion mode was used for TOF-MS. The UPLC-QqQ-MS assay was performed
on a Waters COＲTECS C18(2. 1 mm × 100 mm，1. 6 μm)with the mobile phase consisting of acetonitrile (A)and water containing
0. 1% formic acid (B)in gradient mode at a flow rate of 0. 25 mL·min －1. The column temperature was at 45 ℃，and MＲM mode
was used for QqQ-MS. Based on the retention time and MS spectra，24 compounds were identified or tentatively characterized by com-
paring with reference substances or literatures. For quantitative the linear range of 4 detected compounds were good(r ＞ 0. 996 6) ，and
the overall recoveries ranged from 98. 27% to 101. 58%，with the ＲSD ranging from 3. 15% to 5. 88% . The results indicated that new
approach conbined HPLC-Q-TOF-MS and UPLC-QqQ-MS was applicable in qualitative and quantitative quality control of Tetrastigma
hemsleyanum.
［Key words］ Tetrastigma hemsleyanum;HPLC-Q-TOF-MS;UPLC-QqQ-MS;quality control
doi:10． 4268 /cjcmm20142218
［责任编辑 孔晶晶］
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