全 文 ：青果多酚超声波醇提工艺条件的研究
向 丽1，周铁军2，叶迎春1，王光西1
(1．泸州医学院病原生物学教研室，四川泸州 646000;2．泸州医学院病理学教研室，四川泸州 646000)
摘要 ［目的］研究超声波醇提青果多酚的工艺条件。［方法］采用超声波醇提青果多酚，通过单因素试验和正交试验优化最佳超声波
提取条件。［结果］影响提取率的因素顺序为乙醇浓度 ＞料液比 ＞超声波功率 ＞提取时间;超声波最佳提取条件为乙醇浓度 40%、超声
功率 40 W、料液比 1∶ 20 (g /ml)、提取时间 45 min，在此条件下，青果多酚的得率为 3． 422%。［结论］该研究优选出了超声提取青果多酚
的最佳工艺条件，为青果药用价值的开发奠定了基础。
关键词 青果(FRUCTUS CANARII );多酚;超声波
中图分类号 S667． 5 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611(2012)02 －00772 －03
Ultrasonic Ethanol Extraction Technology of Polyphenol from FRUCTUS CANARII
XIANG Li et al (1． Department of Pathogen Biology Luzhou Medical College，Luzhou，Sichuan 646000)
Abstract ［Objective］To study on the extraction technology of polyphenol from FRUCTUS CANARII by ultrasonic ethanol method．［Methods］
Polyphenol from FRUCTUS CANARII was extracted by ultrasonic ethanol method，the ultrasonic ethanol extraction conditions were optimized by
single factor test and orthogonal test．［Results］Factors which affected the extraction of polyphenol from FRUCTUS CANARII were in order of eth-
anol concentration ＞ solid-liquid ratio ＞ ultrasonic power ＞ extraction time． The optimal ultrasonic ethanol extraction conditions were as follow-
ing:40%(V/V)ethanol，ultrasonic power of 40 W ，solid-liquid ratio of 1∶ 20 and extraction time of 45 min．［Conclusion］This research provided
scientific basis for the further exploitation of medicinal value of FRUCTUS CANARII．
Key words FRUCTUS CANARII;Polyphenol;Ultrasonic wave
基金项目 泸州市科技计划项目( ［2010］128 号)。
作者简介 向丽(1977 － ) ，女，四川德阳人，讲师，硕士，从事细菌的耐
药机制研究，E-mail:xiangli006@ sina． com。
收稿日期 2011-10-08
青果(FRUCTUS CANARII)别名橄榄，是我国常用中药
材，为橄榄科(Burevaceae)植物橄榄的(Canarzum album Rae-
usch．)的干燥成熟果实，具有清热、利咽、祛痰、生津、健脾、
解毒等功能。研究显示，青果还具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤和
抗氧化等药理作用［1 －4］，具有较高的药用价值。多酚类化合
物是青果最重要的功效成分，与青果的药理作用密切相关。
试验以乙醇为溶剂，采用超声波辅助提取青果多酚，通过 Fo-
lin － Ciocalteu法进行定量分析，以期为进一步筛选、提取青
果活性成分及综合开发青果药用价值提供研究基础。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。青果(CANARII FRUCTUS) ，购自泸州宝
光医药有限公司，经鉴定为橄榄科(Burevaceae)植物橄榄的
(Canarzum album Raeusch．)的干燥成熟果实。
1． 1． 2 主要仪器。JY96-Ⅱ超声粉碎仪，购自宁波新芝生物科
技股份有限公司;SP-752 型紫外可见分光光度计，购自上海
光谱仪器有限公司;AL104 /00 电子天平，购自梅特勒 －托利
多仪器有限公司;DK-98-1恒温水浴锅，购自天津泰斯特仪器
有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。没食子酸标准品，购自中国食品药品检
定所，批号 MUST-10080401，纯度≥98%;乙醇，碳酸钠，酚试
剂，购自上海源聚生物科技有限公司。
1． 2 方法
1． 2． 1 供试品溶液的制备(图 1)。
1． 2． 2 对照溶液的制备。精密称取 20． 0 mg没食子酸标准
品溶解于 20 ml蒸馏水中，配制成 1 mg /ml的标准溶液，取 1
ml标准溶液定容到 100 ml，制得浓度为 10 μg /ml 的对照品
溶液。
图 1 供试品溶液的提取流程
1． 2． 3 线性关系的考察。取 5只 10 ml具塞试管，分别加入
0． 0、0． 5、1． 0、1． 5、2． 0 和 2． 5 ml 浓度为 10 μg /ml 的对照品
溶液，然后向各个试管中加入 1． 5 ml Folin-ciocalteu试剂，摇
匀，再加入 6 ml 浓度 10% Na2CO3 溶液，摇匀，最后用蒸馏水
定容至 10 ml，水浴(30 ℃)反应 1 h。在 765 nm波长处测定
标准溶液的吸光度，以标准溶液的浓度为横坐标(x) ，以吸光
度为纵坐标(y) ，绘制标准曲线。
1． 2． 4 超声波醇提青果多酚的单因素试验［5 －7］。
1． 2． 4． 1 超声功率对青果多酚提取率的影响。称取 5． 000
g青果果实干燥粉末，按料液比 1∶ 20(g /ml)加入 100 ml 浓度
60%乙醇，分别在 40、80、120、160 和 200 W条件下超声波处
理 25 min，然后将上清液抽滤，滤液采用 Folin-ciocalteu法分
析测定多酚的提取率，考察超声功率对青果多酚提取率的
影响。
1． 2． 4． 2 超声时间对青果多酚提取率的影响。称取 5． 000 g
青果果实干燥粉末，按料液比为 1∶ 20(g /ml)加入 100 ml 浓
度 60%乙醇，在 80 W条件下分别超声处理 15、25、35、45 和
55 min，然后将上清液抽滤，滤液采用 Folin-ciocalteu 法分析
测定多酚的提取率，考察超声时间对青果多酚提取率的
影响。
责任编辑 石金友 责任校对 卢瑶安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2012，40(2):772 － 774
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2012.02.213
1． 2． 4． 3 乙醇浓度对青果多酚提取率的影响。称取 5． 000 g
青果果实干燥粉末，按料液比为 1∶ 20(g /ml)分别加入 100 ml
浓度 20%、40%、60%、80%和 100%的乙醇，在 80 W条件下
超声波处理 25 min，然后将上清液抽滤，滤液采用 Folin-cio-
calteu法分析测定多酚的提取率，考察乙醇浓度对青果多酚
提取率的影响。
1． 2． 4． 4 料液比对青果多酚提取率的影响。称取青果果实
干燥粉末 5． 000 g，按料液比 1∶ 5、1∶ 10、1∶ 15、1∶ 20 和 1∶ 25
(g /ml)分别加入浓度 60%的乙醇，在 80 W条件下超声波处
理 25 min，然后将上清液抽滤，滤液采用 Folin-ciocalteu法分
析测定多酚的提取率，考察料液比对青果多酚提取率的影
响。
1． 2． 5 正交试验优化青果多酚超声波醇提工艺［8 －9］。在单
因素试验的基础上，选择乙醇作为提取溶剂，以超声波功率、
提取时间、乙醇浓度和料液比为考察因素，采用 L9(3
4)进行
4因素 3水平的正交试验(表 1)。
表 1 正交试验因素与水平设计
水平
因素
超声波功
率(A)∥W
提取时
间(B)∥min
乙醇浓度
(C)∥%
料液比(D)
g /ml
1 40 25 20 1∶ 15
2 120 45 40 1∶ 20
3 160 55 60 1∶ 25
1． 2． 6 青果多酚的含量测定。在单因素试验和正交试验的
基础上，优选出超声提取青果多酚的最佳工艺条件。按最佳
条件进行提取，并用 Folin-ciocalteu 法分析测定多酚的提
取率。
2 结果与分析
2． 1 线性关系的考察 计算得线性回归方程为 y = 0． 121 2
x +0． 004，r2 = 0． 998 6，表明在 0 ～2． 5 μg /ml浓度范围内，吸
光度呈良好的线性关系。
2． 2 单因素试验
2． 2． 1 超声波功率对提取率的影响。由图 2 可知，在 40 W
时，提取率最高，功率升高到 160 W 时，提取率变化较为平
缓，但功率升高到 200 W时，提取率明显下降，这可能是由于
功率加大，升温加快，导致了多酚类化合物的损失而造成的，
故选择 40 W进行青果多酚的提取。
2． 2． 2 提取时间对提取率的影响。由图 3 可知，提取时间
为 45 min时提取率最高，但在 15 ～ 55 min 的提取时间变化
过程中，多酚的提取率总体变化不明显。因此在提高效率的
基础上可以缩短提取时间。
2． 2． 3 乙醇浓度对提取率影响。由图 4 可知，乙醇浓度为
60%时提取率最高，但随乙醇浓度的升高，提取率明显下降，
可能是因为高浓度乙醇导致蛋白质变性，使药物颗粒渗透性
降低，从而影响多酚的提取。所以，从节约成本的角度考虑，
选择浓度 60%的乙醇作为提取溶剂。
2． 2． 4 料液比对提取率的影响。由图 5 可知，在一定范围
为，提取率随料液比增大而上升，当料液比超过 1∶ 15(g /ml)
图 2 不同超声波功率的多酚提取率
图 3 不同提取时间的多酚提取率
图 4 不同乙醇浓度的多酚提取率
图 5 不同料液比的多酚提取率
时，提取率开始下降，故选择料液比为 1∶ 15(g /ml)进行提取。
2． 2． 5 在单因素水平下，当超声波功率为 40 W，提取时间为
45 min，乙醇浓度为 60%，料液比为 1∶ 15(g /ml)时，多酚提取
率最高。采用单因素最佳条件提取青果多酚，提取率为
3． 240%。
2． 3 正交试验优化青果多酚的提取工艺 根据单因素试验
结果，选择影响青果多酚提取效果各因素中有意义的水平进
行正交试验，以确定最佳提取条件(表2)。由表2可知，根据
极差 R值的大小，确定各因素对青果多酚提取率影响顺序为
37740 卷 2 期 向 丽等 青果多酚超声波醇提工艺条件的研究
C ＞ D ＞ A ＞ B。其中，C(乙醇浓度)对提取率的影响明显，提
取时间对提取率的影响较小。因此，确定通过超声波醇提青
果多酚的最佳条件是 A1B2C2D2，即超声波功率 40 W、提取时
间 45 min、乙醇浓度 40%、料液比 1∶ 20(g /ml) ;在此条件下，
青果多酚的得率为 3． 422%。
表 2 正交试验设计及结果
Table 2 Design and result of orthogonal test
序号 A B C D 提取率∥%
1 1 1 1 1 2． 475
2 1 2 2 2 3． 422
3 1 3 3 3 3． 163
4 2 1 2 3 2． 860
5 2 2 3 1 2． 649
6 2 3 1 2 2． 498
7 3 1 3 2 3． 036
8 3 2 1 3 2． 503
9 3 3 2 1 2． 583
k1 3． 020 2． 790 2． 492 2． 569 T =25． 189
k2 2． 669 2． 858 2． 955 2． 985
k3 2． 707 2． 748 2． 949 2． 842
R 0． 351 0． 110 0． 463 0． 416
最优方案 A1 B2 C2 D2
3 结论
超声波提取中药和天然药物的原理是在提取溶媒中产
生的“空化效应”和机械作用，可有效地破碎药材的细胞壁，
使有效成分呈游离状态并溶入提取溶媒中。超声波提取具
有提取温度低、提取率高、提取时间短的独特优势，在提高生
产效率的同时，能有效保持生物大分子的活性，对一些受热
易被破坏、氧化、分解的物质是一种很好的提取方法，现已广
泛应用于中药材和各种动、植物有效成分的提取。乙醇作为
一种提取溶剂，具有无毒且价格低的优点。试验选择乙醇为
提取溶剂，进行超声波辅助提取青果多酚，通过单因素试验
和正交试验进行优化，确定了青果多酚的超声波醇提最佳条
件:超声波功率 40 W，提取时间 45 min，乙醇浓度 40%，料液
比 1∶ 20(g /ml) ;在该条件下青果多酚的提取率为 3． 422%。
4个影响因素中，乙醇浓度对提取率有明显影响，提取时间影
响较小，因此在提高效率的前提下可适当缩短提取时间。对
于超声波提取是否会影响多酚结构和连接方式进而影响药
效，有待进一步研究。
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(上接第 768 页)
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