全 文 ：收稿日期:2008-11-05;　修订日期:2009-03-17
基金项目:四川省教育厅重点项目(No.2005A076)
作者简介:田　吉(1971-),女(汉族),四川江安人 ,现任泸州医学院药学
院药物研究所副主任中药师 ,硕士学位 ,主要从事中药药剂研究工作.
高效液相色谱法测定楤木
及其提取物中齐墩果酸的含量
田　吉1 ,李翅翔 2 ,何　兵 1 ,肖顺汉1
(1.泸州医学院药学院药物研究所 ,四川 泸州　646000;
2.泸州医学院药学院药学专业 2007级 ,四川 泸州　646000)
摘要:目的 建立楤木及其提取物中齐墩果酸的含量测定方法。方法 采用 高效液相色谱(HPLC)法 ,色谱柱为 Kromasil
C18柱(250mm×4.6mm, 5 μm),流动相为甲醇 -水(95∶5), 检测波长 210 nm, 柱温 30℃;流速 1.0 ml· min-1;进样量
10μl。结果 齐墩果酸在 0.502 ～ 4.016μg范围内与峰面积具有良好的线性关系(r=0.999 9), 平均回收率 96.38%, RSD
为 1.17%。结论 该方法灵敏 、准确 , 可用于楤木及其提取物的质量控制。
关键词:楤木;　提取物;　齐墩果酸;　含量测定;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)10-2426-02
DeterminationofOleanolicAcidinRootBarkofAraliaanditsExtractsbyHPLC
TIANJi1 ,LIChi-xiang2 , HEBing1 ,XIAOShun-han1
(1.InstituteofMateriaMedica, Luzhou646000, China;2.PharmacySpecialtyofLuzhouMedicalColege, Grade
2007, Luzhou646000, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofoleanolicacidinrootbarkofAraliaanditsextracts.Meth-
odsAKromasilC18 column(250mm×4.6mm, 5μm)withmobilephaseconsistingofmethanol-water(95∶5)wasadopted, and
thedetectionwavelengthwassetat210 nm.Thecolumntemperaturewas30℃.Theflowratewas1.0 ml· min-1 , andthesam-
plevolumewas10μl.ResultsThecalibrationcurveshowedgoodlinearityovertherangeof0.502 ～ 4.016μg(r=0.999 9).The
averagerecoverywas96.38 % withRSD1.17%.ConclusionThemethodissensitive, accurate, andissuitableforthequality
controlofrootbarkofAraliaanditsextracts.
Keywords:RootbarkofAralia;　Extracts;　Oleanolicacid;　Contentdetermination;　HPLC
　　楤木 , 又称楤木白皮 , 为五加科楤木属植物楤木 Aralia
chinensisL.的根皮 , 具有祛风湿 , 利小便 , 散淤血 , 消肿毒的功
效 [ 1] 。全国各地以多种楤木属植物的根皮作楤木入药 , 常见的
有楤木 、太白楤木 、辽东楤木 、黄毛楤木等种。楤木属植物的主要
有效成分为楤木皂苷 , 苷元为齐墩果酸。楤木皂苷具有适应原样
作用 , 以及中枢神经抑制 、强心 、降血脂 、降血糖和降血压 、抗癌等
多种药理作用 [ 2, 3] 。但目前国家尚无楤木皂苷的法定对照品 ,为
控制质量 , 本实验采用高效液相色谱法 , 以苷元齐墩果酸为指标 ,
测定了楤木药材及其提取物楤木总皂苷的含量。
1 　仪器与试药
1.1　仪器 戴安高效液相色谱仪(P680A四元低压梯度泵 , PDA
-100二极管阵列检测器 , TCC-100柱温箱 , Chromeleon色谱工
作站);瑞士 Precisa电子天平(XR205SM-DR)。
1.2　试药 辽东楤木 , 购至安徽亳州药材市场 ,产地辽宁 , 楤木 ,
采至四川省泸州市纳溪区龙车乡 ,经泸州医学院生药教研室鉴定
分别为辽东楤木 Araliaelata(Miq.)的及楤木 AraliachinensisL.
的根皮。楤木总皂苷 , 由泸州医学院药物研究所自制。齐墩果酸
对照品(110781 -200512), 中国药品生物制品检定所提供 , 经
HPLC峰面积归一化法计算纯度在 98%以上 。甲醇为色谱纯 ,水
为重蒸馏水 , 其他试剂均为分析纯。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 DikmaKromasilC18(250 mm×4.6
mm, 5 μm);流动相为甲醇 -水(95∶5);检测波长为 210 nm;柱
温为 30℃;流速为 1.0ml· min-1;进样量 10 μl。
2.2　对照品溶液的制备 精密称取齐墩果酸对照品 5 mg,加甲
醇 25ml制成 0.2 mg· ml-1的对照品溶液(实际 0.200 8 mg·
ml-1)。
2.3　供试品溶液的制备
2.3.1　楤木药材供试品溶液的制备 精密称取药材细粉 0.2g,
加入 25ml甲醇 ,回流提取 4 h, 过滤 , 少量甲醇洗涤 , 合并滤液 ,
水浴挥去甲醇 , 加 20 ml10%稀硫酸 ,水浴回流 4h, 氯仿 60 ml分
5次萃取 , 合并萃取液 , 10 ml水洗后水浴蒸干 , 加甲醇溶解并定
容到 10ml。
2.3.2　楤木提取物供试品溶液的制备 精密称取总皂苷 0.2g,
加入 20ml10%稀硫酸 ,水浴回流 4 h, 氯仿 60ml分 5次萃取 , 合
并萃取液 ,水浴蒸干 , 加入甲醇定容到 25 ml, 精密量取 1ml, 用甲
醇定容至 10 ml。
2.4 　系统适应性实验 分别精密吸取上述对照品溶液 、供试品
溶液各 10 μl, 注入高效液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定 , 记录
色谱图 ,结果见图 1 ～ 4。在试验条件下 ,齐墩果酸与其相邻色谱
峰的分离度大于 1.5,理论塔板数以齐墩果酸峰计均大于 10 000,
溶剂无干扰。
2.5　线性关系考察 精密吸取齐墩果酸对照品溶液 (0.200 8
mg· ml-1)2.5, 5, 7.5, 10, 15, 20 μl, 注入液相色谱仪 , 按上述色
谱条件测定峰面积 ,以峰面积 A对进样量 C(μg)进行回归 ,回归
方程为:A=8.135 4C-0.012 2, r=0.999 9。齐墩果酸在进样量
·2426·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 10期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.10
0.502～ 4.016 μg范围内 , 峰面积与进样量有良好的线性关系。
图 1　齐墩果酸对照品的 HPLC图谱
图 2　辽东楤木药材的 HPLC图谱
图 3　楤木药材的 HPLC图谱
图 4　楤木总皂苷的 HPLC图谱
2.6　 精密度实验 分别取 “ 2.2”项下对照品溶液 10 μl, 按上述
色谱条件连续进样 6次 , 记录齐墩果酸的峰面积 , RSD为 0.45%。
表明仪器精密度良好 。
2.7　稳定性实验 取 “ 2.3.1”项下供试品溶液 ,于制备后 0, 4, 8,
12, 24, 36 h进样 10 μl, 记录齐墩果酸的峰面积 , 其 RSD为
1.95%,表明供试品溶液在 36 h内较稳定。
2.8　 重复性实验 取同一批药材(批号:070801), 按 “ 2.3.1”项
下方法分别制得 6份供试品溶液 ,进样测定 , 记录齐墩果酸的峰
面积并计算含量 , RSD为 1.29%。表明上述方法重复性良好。
2.9 　加样回收实验 精密称取已知含量(1.69%)的楤木药材
(批号:070801)9份 , 每份 0.1g, 分成 3组 ,每组 3份 , 分别精密
添加齐墩果酸对照品储备液(0.675 mg· ml-1)2, 2.5, 3 ml,按照
“ 2.3.1”项下方法制备供试品溶 , 按上述色谱条件测定 , 并计算
平均加样回收率。结果见表 1。
实验结果表明 ,上述方法具有良好的回收率。
2.10　样品测定 分别精密量取齐墩果酸对照品溶液和各供试
品溶液 10μl,照上述色谱条件测定 ,并计算齐墩果酸的含量 。结
果见表 2。
表 1　加样回收实验结果
测定
次数
取样量
m/g
齐墩果
酸的量 m/mg
添加对照
品量 m/mg
测出量
m/mg
回收率
(%)
平均回
收率(%)
RSD
(%)
1 0.100 5 1.698 5 1.350 0 3.001 7 96.53
2 0.101 2 1.710 3 1.350 0 3.007 0 96.05
3 0.100 8 1.703 5 1.350 0 2.989 4 95.25
4 0.101 0 1.706 9 1.687 5 3.315 9 95.35
5 0.100 7 1.701 8 1.687 5 3.322 0 96.01 96.38 1.17
6 0.101 2 1.710 3 1.687 5 3.356 6 97.56
7 0.100 4 1.696 8 2.025 0 3.642 4 96.08
8 0.101 1 1.708 6 2.025 0 3.649 4 95.84
9 0.100 5 1.698 5 2.025 0 3.698 7 98.78
表 2　楤木及其提取物中齐墩果酸含量测定结果
样品 来源 批号 齐墩果酸含量(%) RSD(%)
辽东楤木 辽宁 070801 1.69 1.05
辽东楤木 辽宁 071011 1.59 1.97
楤木 四川 060625 1.86 1.21
楤木 四川 080630 1.12 1.37
楤木 四川 080728 1.55 1.18
楤木总皂苷 自制 080409 18.59 0.97
楤木总皂苷 自制 080415 17.37 0.98
楤木总皂苷 自制 080420 18.18 1.24
　　n=3
3　讨论
3.1 　检测波长的确定 采用二级管阵列检测器在 190 ～ 500 nm
波长范围对对照品及各样品中的齐墩果酸峰进行光谱扫描 ,其最
大吸收波长均为 201 nm,但由于流动相在短波长处有末端吸收 ,
为了减少干扰 , 经不同波长的色谱图比较 , 选择 210 nm为检测波
长 , 峰形好 ,干扰小。
3.2 　前处理方法的选择 参考文献资料 , 对药材的前处理采取
了先水解后氯仿萃取 ,以及先甲醇提取 , 水解后氯仿萃取两种方
法 , 进行对比 ,结果前者测得的齐墩果酸含量为后者的 80%, 所
以 , 最后选择了甲醇提取 +水解 +氯仿萃取的方法。
3.3　提取方法的选择 实验对药材的甲醇提取方法也进行了
比较 , 考察了超声一次 ,超声两次 ,回流提取 4 h, 索氏提取 4 h四
种方法 ,结果 ,以回流提取得到的齐墩果酸含量最高 ,最终选择甲
醇回流 4h的药材提取方法。
3.4 　辽东楤木 、楤木图谱比较 两种药材的齐墩果酸含量差别
不大 , 但在 HPLC图谱中 ,楤木在齐墩果酸峰前面有明显的 3个
小峰 , 而辽东楤木仅有 1个小峰 ,且含量极低 ,能否作为区别二者
的依据之一 ,尚需加大样本量 , 作进一步考察。
参考文献:
[ 1 ] 　湖南省卫生厅.湖南省中药材标准 [ S] .长沙:湖南省科学技术出版
社 , 1993:339.
[ 2 ] 　许旭东 ,杨峻山 ,朱兆仪.楤木属植物三萜皂甙研究进展 [ J] .药学
学报 , 1997, 32(9):711.
[ 3 ] 　王忠壮 ,万　鲲 ,胡晋红.楤木属药用植物的药理活性研究 [ J].中
国药学杂志 , 2002, 37(2):86.
·2427·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.10 时珍国医国药 2009年第 20卷第 10期