免费文献传递   相关文献

干姜和炮姜的质量比较及提高研究



全 文 :药 物 研 究
The medicine study
基金项目:安徽省自然科学基金项目 (10040606Q40)。
通讯作者:夏伦祝,教授、主任药师,主要从事中药质量控制和制剂研究;E - mail:xialunzhu@ sohu. com。
干姜和炮姜的质量比较及提高研究
韩燕全1 夏伦祝1 洪 燕2 左 冬2 姜 蕾2 罗 欢2
1. 安徽中医学院第一附院 /国家中医药管理局中药制剂三级实验室,安徽 合肥 230031;2. 安徽中医学院,安徽 合肥 230031
【摘 要】 目的:采用 UPLC法比较干姜和炮姜的质量并加以提高。方法:采用十八烷基硅烷键合硅胶为固定相,乙腈 - 0. 1%醋酸
溶液;流速为 0. 25mL·min - 1 梯度洗脱,检测波长为 280nm,同时测定 6、8、10 -姜酚的含量。结果:6、8、10 -姜酚浓度分别在 79. 0
~ 395. 0、14. 4 ~ 72. 0 和 13. 5 ~ 67. 5μg /mL范围内,与峰面积成良好的线性关系 (R2 < 0. 9997) ;平均加样回收率 99. 74、99. 28、99. 13,
RSD值分别为 1. 08、1. 95、1. 26。结论:干姜和炮姜中三种姜酚含量差异明显;所建立的质量控制提高方法快捷、准确、灵敏度高、重复
性好,可用于干姜和炮姜的质量控制。
【关键词】 干姜;炮姜、超高效液相色谱;6 -姜酚;8 -姜酚;10 -姜酚
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 - 8517 (2011)04 - 0030 - 03
Compare and improve the quality control standards of the Rhizoma zingiber and Processing Rhizoma zingiber
Han yan - quan,Xia lun - zhu,Hong yan,Zuo dong,Jiang lei,Luo huan
1. The First Affiliated Hospital,Anhui College Of TCM,Grade 3 Laboratory of TCM Preparation,State Administration of TCM,
Hefei 230031,China;2. Anhui College Of TCM,Hefei 230031,China
Abstract:Objective:To Compare and improve the quality stand of Rhizoma zingiber and Processing Rhizoma zingiber. Methods:6
- ginger,8 - ginger and 10 - ginger were simultaneously determined by UPLC with Waters Acquity UPLC BEH C18 (2. 1mm × 50mm,
1. 7μm)column. The mobile phase consisted of acetonitrile and 0. 1% phosphoric acid with gradient elution at the flow rate of 0. 25 mL/min,
the colum temperature was at 35℃,and the detector was set at 280nm. Results:The calibration curves showed good linearity (r2≥
0. 9997). The recoveries were 99. 74%,99. 28%,99. 13% and the RSD were 1. 08%,1. 95%,1. 26% for 6 - ginger,8 - ginger and 10 -
ginger,respectively. Conclusion:The contents of three compounds were obviously difference between Rhizoma zingiber and Processing Rhi-
zoma zingiber. The higher quality standards to better control the quality of Rhizoma zingiber and Processing Rhizoma zingiber.
Key words:Rhizoma zingiber;Processing Rhizoma zingiber;UPLC;6 - ginger;8 - ginger ;10 - ginger
干姜为姜科植物姜 Zingiber officinalies (Willd. )
Rose. 的干燥根茎,为多年生草本植物,炮姜是其常用
炮制品,二者均是中医临床用途广泛的中药材。二者功
效有较大差别,干姜味大辛大热,主温中回阳,炮姜用
于温中散寒温经止血。前人一直有 “……干姜能走能
守,炮姜守而不走”之说。现代研究表明姜酚 (gin-
gerol)是干姜中的辣味物质,也是干姜的主要生物活性
成分,其种类有十多种,其中含量较高的为 6 -姜酚、8
-姜酚、10 -姜酚,姜酚的化学性质极不稳定,在炮制
中也会有些损失,了解姜酚类成分在炮制过程中的变
化,对于认识其药性变化、了解其炮制前后的质量变化
具有重要的意义[1,2]。本文在文献研究的基础上,采用
超高效液相色谱 (UPLC)法,建立了同时、快速测定
6、8、10 -姜酚的测定条件,比较了干姜炮制前后的含
量变化并对二者的质量进行了提高研究,结果表明,实
验建立的方法快捷、简便、灵敏度高,准确性好,为干
姜、炮姜的质量提高和炮制工艺的合理选择提供了一定
的实验依据。
1 仪器与试药
Waters Acquity H - Class UPLC 超高效液相色谱仪,包
括四元梯度泵、恒温自动进样器、柱温箱、二极管阵列检
测器以及 Empower 2 工作站;KQ3200DB型超声洗器 (江苏
昆山超声仪器有限公司) ;0. 2μm 微孔滤膜 (上海陆纳生
物科技有限公司) ;乙腈为色谱纯 (TEDIA,USA) ;屈臣
氏蒸馏水;乙醇等试剂均为分析纯。
含量测定用姜酚对照品批号分别为:6 -姜酚 (23513
- 146) ,8 - 姜酚 (23513 - 088) ,10 - 姜酚 (23513 -
157) ;由鼎瑞化工 (上海)有限公司,经 1H - NMR、13C
- NMR、MS、IR和 UV等光谱鉴定其结构;按本方法色谱
条件,归一化法测得它们的纯度分别为 98. 79%,98. 81%,
99. 13%。干姜药材分别购于安徽合肥市的医院及零售药
店,经安徽中医学院第一附属医院中药房李立华副主任药
师鉴定均为姜科植物姜 Zingiber officinalies (Willd.)Rose.
的干燥根茎;炮姜由干姜按照《中国药典》2010 版 (附录
ⅡD)项下烫法要求炮制得到。
2 方法与结果
2. 1 炮制品制备 按照《中国药典》2010 版 (附录ⅡD)
项下烫法要求,将已洗好的 10 倍药材量的细砂置入铁锅
内,武火加热至微变色,炒至灵活状态,再加入大小、厚
度接近的干姜片,不断翻动,炒至鼓起,表面棕褐色,急
出锅,筛去砂、晾凉备用。
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取 6 -姜酚 1. 58mg、8 -
姜酚 1. 44mg、10 -姜酚 1. 08mg,精密称取,分别置于 2mL
量瓶中,加甲醇溶解并至刻度,摇匀,再分别精密吸取
1. 0、0. 20、0. 25mL定容至 10mL,即得。
2. 3 供试品溶液的制备 分别取干、炮姜粉末 (过三号
筛)约 0. 25g,精密称定,分别置具筛锥形瓶中,干姜精密
加入 75%甲醇 20mL,超声 (100W,40Hz)40min,炮姜精
密加入 50% 甲醇 20mL,超声 (100W,40Hz)30min,放
冷,称量,分别加 75%、50%甲醇补足,摇匀,滤过,取
续滤液作为供试品溶液。
2. 4 色谱条件 流动相为乙腈 - 0. 1%醋酸水溶液,梯度
·03·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
洗脱 (乙腈 – 0. 1%醋酸水溶液比例分别为 0 ~ 1min,55:
45;1 ~ 6min,65:35;6 ~ 7min,70:30;7 ~ 10min,90:
10) ,流速 0. 25mL /min,柱温 30℃进样量 2. 0μL,检测波
长 280 纳米。
2. 5 线性关系考察 分别精密吸取 6、8、10 -姜酚的对照
品溶液 1. 0,2. 0,3. 0,4. 00,5. 0μL,分别进样,测定峰
面积,以各色谱峰面积分值 (Y)对其浓度 (X)进行线性
回归,结果如表 1。
表 1 6、8、10 -姜酚的峰面积及浓度的线性关系
成分 线性范围 (μg /mL) 回归方程 R2
6 -姜酚 79. 0 ~ 395. 0 Y = 16107X - 15436 0. 9999
8 -姜酚 14. 4 ~ 72. 0 Y = 40657X - 3078 0. 9997
10 -姜酚 13. 5 ~ 67. 5 Y = 39501X - 2434 0. 9999
结果表明 6 -姜酚在 79. 0 ~ 395. 0μg /mL ;8 -姜酚在 14. 4
~ 72. 0;10 -姜酚 13. 5 ~ 67. 5;范围内,与峰面积均成良
好的线性关系。
2. 6 精密度实验 吸取对照品溶液 2. 0μL,连续进样 5
次,6,8,10 -姜酚峰面积的 RSD (n = 5)分别为 0. 27%,
0. 31%,0. 90%,表明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性实验 取供试品溶液,在 0 ~ 12h内每隔 2h进样
一次,计算 6,8,10 - 姜酚峰面积的 RSD,结果分别为
0. 38%,1. 90%,2. 08%,表明供试品溶液在 12小时内稳定。
2. 8 样品含量测定 分别取上述对照品溶液和供试品溶液
各 2μL,注入超高效液相色谱仪,记录色谱图 (见图 1) ,
以峰面积计算样品中 6、8、10 -姜酚的含量,见表 2。
图 1 姜酚对照品 (A)、干姜 (B)
和炮姜 (C)的 UPLC色谱图
1 - 6 -姜酚;2 - 8 -姜酚;3 - 10 -姜酚
表 2 干姜和炮姜中 6、8、10 -姜酚的含量 (%;n = 3)
样品 样品产地 6 -姜酚 8 -姜酚 10 -姜酚
干姜
山东 1 1. 379 0. 203 0. 272
山东 2 0. 837 0. 154 0. 249
四川 0. 956 0. 213 0. 295
安徽 0. 983 0. 216 0. 260
炮姜
山东 1 0. 811 0. 123 0. 145
山东 2 0. 667 0. 173 0. 230
四川 0. 726 0. 109 0. 122
安徽 0. 874 0. 179 0. 223
2. 9 回收率试验 精密量取已测知含量的干姜药材 (山东
2)样品约 0. 1g共 6 份,分别置 10mL量瓶中,加入各对照
品溶液适量,按 2. 2 项下处理溶液,用甲醇稀释定容,过
0. 2μm的微孔滤膜,取 2. 0μL 续滤液注人液相色谱仪,测
定,计算各成分回收率,结果见表 3。
表 3 6、8、10 -姜酚的加样回收率
成分
称样量
(g)
样品含量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD%
6 -姜酚
0. 1003 0. 838 0. 841 1. 679 100. 070
0. 1023 0. 854 0. 841 1. 681 98. 291
0. 1031 0. 861 0. 841 1. 699 99. 700
0. 1021 0. 853 0. 841 1. 707 101. 564
0. 1028 0. 858 0. 841 1. 694 99. 312
0. 1035 0. 864 0. 841 1. 701 99. 515
99. 74 1. 08
8 -姜酚
0. 1003 0. 154 0. 155 0. 311 101. 249
0. 1023 0. 158 0. 155 0. 310 98. 100
0. 1031 0. 159 0. 155 0. 309 97. 096
0. 1021 0. 157 0. 155 0. 314 101. 318
0. 1028 0. 158 0. 155 0. 314 100. 403
0. 1035 0. 159 0. 155 0. 310 97. 490
99. 28 1. 95
10 -姜酚
0. 1003 0. 251 0. 255 0. 509 101. 332
0. 1023 0. 256 0. 255 0. 511 99. 904
0. 1031 0. 258 0. 255 0. 509 98. 368
0. 1021 0. 255 0. 255 0. 506 98. 509
0. 1028 0. 257 0. 255 0. 507 98. 118
0. 1035 0. 259 0. 255 0. 510 98. 537
99. 13 1. 26
3 讨论
中药的药效是通过其所含化学成分群的综合作用而发
挥的,因此建立中药评价质量标准时应考虑尽量多地选取
含量测定对象,从而反映出其整体成分的情况。多组分多
指标含量测定,对于全面控制药材的质量比单一成分测定
更具科学性。《中国药典》2010 版Ⅰ部干姜项下规定干姜
和炮姜药材以 6 - 姜酚含量分别不得少于 0. 050%,和
0. 30%[3],标准相对较低。同时测定 3 种姜酚类成分的含
量,对与控制姜的质量更具合理性。中药经过炮制前后,
所含的化学成分会在“质”、“量”两方面产生不同程度的
改变,因而药性、功效、临床疗效发生随之而改变,这也
是中医临床选择不同炮制品入药的依据。此外,炮制前后
化学成分含量的变化是中药炮制研究的重要内容之一,其
研究结果不但能阐明炮制原理,而且能指导炮制工艺的设
计、改进和质量标准的制定。
(下转第 33 页)
·13·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
The medicine study
卫畅通;配板蓝根清热解毒,凉血利咽;防风、柴胡、白
芷疏风散表,又可散结消肿;皂角刺、胆南星通行凉血;
人工牛黄清热化痰、止咳、凉血、解毒、消肿散结,共为
佐使药。诸药合用,同奏疏散风热,清热解毒、活血凉血、
消肿止痛之功,故痈疮初期用之能散,脓已成者用之能溃,
清痰热而利咽喉。本品辛苦偏凉,聚清热解毒,滋阴凉血,
疏风散表,化瘀散结诸法于一方,是治疗上呼吸道感染,
急、慢性咽喉炎,扁桃腺炎,疖肿等的良方。
2 众生丸的美誉
2. 1 美誉的传媒报道
中国医药科技出版社 1993 年版的《药海扬帆》中,有
标题为“中成药的抗生素———众生丸”的一篇文章,作者
黄每裕是《中国医药报》、 《中国医药》杂志、 《健康报》
等刊物驻广东记者,国家医药局副局长刘永纲为该书写了
代序,称黄每裕身兼数职,文章多产,所写文章具有很强
的时效性和指导意义,多被报社采用。 “中成药的抗生素
———众生丸”一文,为众生丸的这一美誉留下了最早的文
字见证。
2. 2 美誉的依据
“中成药的抗生素———众生丸”的文章说: [自从抗生
素发明以来,一直作为人类制服细菌性感染疾病的首选良
药。然而,由于患者情况各异,有些人不能使用或不能长
期使用抗生素,只好“望药兴叹”。如今,广东石龙制药厂
给这些患者带来了福音:该厂根据祖国医学理论研制成功
的一种纯中药制剂———众生丸,在抗菌消炎方面有显著疗
效,从而被誉为“中药抗生素”。] 文章还列举了临床数据
和专家的评价, [众生丸对急慢性咽喉炎、扁桃腺炎、疮
毒、口舌生疮等临床验证 400 多例,总有效率达 93%,其
中,显效 (包括痊愈)率为 55%。] 广东著名老中医梁乃
津主任医师和刘仕昌教授等专家认为,[众生丸的组方充分
体现了中医的清热解毒利咽喉、凉血活血、软坚散结消肿
毒的治疗原则。制成浓缩丸利于药物吸收,到达病所,充
分发挥疗效;它的特点是剂量虽小,而疗效高,且起效快。
治疗多种病症均 3—6 天即见满意疗效,多数患者服药当天
即见好转,而未发现副作用。]
3 众生丸的展望
众生丸的生产企业———广东众生药业股份有限公司,
是一家致力于健康事业的药品生产企业,已于 2009 年 12
月在深圳股票交易所挂牌上市,成为了东莞当时总共 6 家上
市公司中,每股股价最高的上市企业。2010 年 1 月, “众
生”商标经国家工商总局认定为中国驰名商标。当年以商
标命名的众生丸没有辜负人们的愿望,与时共进,持续发
展,显示了强大的生命力。25 年来声誉日隆,取得了许多
荣誉,一个闪亮的品牌在成长。众生丸的生产经过设备更
新,工艺改进,溶散加速,质量提高,销售逐年递增。据
生产批量的统计,2009 年共 296 批,为 2008 年的 123%,
今年 1—6 月批量与去年持平,年销售额有否超亿元,令人
瞩目,请大家关注。众生丸以“六神丸”、“片籽癀”为榜
样,努力打造全国一流中成药的名牌。
参考文献
[1] 丁学民,胡佐良,等. 常用中医方药手册 [M]. 长沙:湖南科学技术
出版社,1984:146,249.
[2] 江苏新医学院. 中药大辞典 [M]. 上海:人民出版社,1977:675,
1093,1250,2017,2459.
[3] 黄每裕 药海扬帆 [M]. 北京:中国医药科技出版社,1993:87.
(收稿日期:2010. 12. 10
檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
)
(上接第 31 页)
UPLC法与普通的 HPLC 比较具有分析时间快、灵敏
度高等特点,在中药成分分析中应用越来越广泛。以往采
用高效液相色谱进行干姜药材 3 种成分分析,完成 l 次进
样分析就需要 40min 以上[4],而本研究采用 UPLC 方法,
在 8min内即可完成 1 次进样,可同时准确测定 3 种姜酚
类成分的测定量。与 HPLC 相比,UPLC 的分离效果和分
析效率均有大幅度提高,本方法简单易行,需时较短,对
于快速测定姜药材中多种姜酚类成分含量具有很好的可操
作性。
实验共考察了不同来源地 4 批干姜药材中 3 种姜酚的
检测,并对炮制前后含量进行了比较。从测定结果可以看
出,不同来源地干姜中 3 种姜酚含量差异明显,炮姜在炮
制过程中 3 种姜酚的含量均有不同程度的降低提示姜酚类
成分在炮制中含量的降低是姜药性、药效内在变化的机制
之一。实验结果同时表明,干姜炮姜内的 6 姜酚含量,均
高于《中国药典》2010 版Ⅰ部炮姜项下的含量要求,建议
《中国药典》将姜的质量标准提高为:同时测定姜中 6、8、
10 -姜酚三种成分的总量分别为:干姜不低于 0. 80%,炮
姜不低于 0. 5%,以全面控制其质量。
参考文献
[1] 芮雯,冯毅凡,吴妍,等. 干姜油中姜酚类成分的 UPLC /Q - TOFMS分
析 [J]. 中草药,2008,39 (5) :667 - 668.
[2] 蒋苏贞,宓穗卿,王宁生. 姜酚心血管药理作用研究进展 [J]. 时珍国
医国,2007,18 (1) :229 - 221.
[3] 国家药典委员会. 中国药典 (2010 版一部) [S]. 北京:化学工业出版
社,2010:13;14.
[4] 钮翠然,陆娟,宋丽丽,等. RP - HPLC法测定干姜中 3 种姜酚的含量
[J]. 药物分析杂志,2008,28 (12) :2008 - 2010.
(收稿日期:2010. 12. 25)
·33·
中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy