全 文 ：2012 年第 70 卷 化 学 学 报 Vol. 70, 2012
第 5 期, 551～560 ACTA CHIMICA SINICA No. 5, 551～560

* E-mail: syliu19@yahoo.com.cn
Received August 31, 2011; accepted November 8, 2011.
Project supported by the National Natural Science Foundation of China (Nos. 81073040, 30472134, 21175127), the National Basic Research Program of China
(“973 Program”) (No. 2011CB505300-05) and Jilin Province Science and Technology Department (No. YYZX201131).
国家“973”计划中医理论专项基金(No. 2011CB505300-05)、国家自然科学基金(Nos. 81073040, 30472134, 21175127)和吉林省科技厅项目(No.
YYZX201131)资助项目.
·研究论文·
利用液质联用技术分析干姜对乌头类生物碱在大鼠肠内吸收的影响
辛 杨 a,b 皮子凤 a 宋凤瑞 a 刘志强 a 刘淑莹*,a
(a中国科学院长春应用化学研究所 长春 130022)
(b中国科学院研究生院 北京 100039)
摘要 为从吸收的角度考察干姜对乌头类双酯型生物碱的解毒机理, 采用外翻肠囊法展开实验. 利用超高液相与三重
四极杆质谱联用技术定量检测双酯型生物碱成分, 采用标准曲线法计算乌头碱、中乌头碱、次乌头碱在肠囊内吸收的
绝对含量, 采用质谱峰面积直接分析其它双酯型生物碱的相对变化, 结果加入干姜提取液后, 乌头碱、中乌头碱、次乌
头碱的单位肠管面积累计吸收量均降低, 10-羟基中乌头碱的的累积峰面积降低; 加入维拉帕米后, 双酯型生物碱的单
位肠管面积累计吸收量及累积峰面积均增加; 向含有地高辛的肠营养液中加入干姜提取液后, 地高辛在各实验时间点
的单位肠管面积累计吸收量均降低, 根据以上结果推测干姜抑制乌头类双酯型生物碱在大鼠肠囊内吸收的可能机制是
通过诱导肠内 P-葡糖蛋白, 从而抑制作为 P-葡糖蛋白底物的双酯型生物碱的吸收, 最终起到减毒作用.
关键词 外翻肠囊法; 乌头类生物碱; 干姜; 液质联用; P-葡糖蛋白
Study on the Influence of Rhizoma Zingiberis on the Absorptive Pro-
file of Aconite Alkaloids in the Rat Gut Sacs by Ultra Performance
Liquid Chromatography-Mass Spectrometry
Xin, Yanga,b Pi, Zifenga Song, Fengruia Liu, Zhiqianga Liu, Shuying*,a
(a Changchun Institute of Applied Chemistry, Chinese Academy of Sciences, 5625 Renmin Street, Changchun 130022)
(bGraduate School of the Chinese Academy of Sciences, Beijing 100039)
Abstract Everted rat gut sac model was used to carry out the experiments about detoxification mechanism
of Rhizoma Zingiberis on the diester-aconite alkaloids in Radix Aconiti. All the diester-aconite alkaloids
were detected by Waters Ultra Performance Liquid Chromatography coupled with triple quadrupole Mass
Spectrometry. Content of aconitine, mesaconitine and hypaconitine were calculated by standard curve
method and other diester-aconite alkaloids were calculated by peak area. Results showed that the accumula-
tive absorptive content of aconitine, mesaconitine, hypaconitine and the peak area of 10-OH-mesaconitine in
unit area of the rat gut sac decreased when the extract of Rhizoma Zingiberis was added into K-R solution
contained the exact of Radix Aconiti, and that increased when verapamil was added into K-R solution con-
tained the exact of Radix Aconiti, which indicated the diester-aconite alkaloids might be the potential sub-
strate of P-glycoprotein (P-gp). The accumulative content of digoxin in unit area of the rat gut sac decreased
when the extract of Rhizoma Zingiberis was added into the intestinal nutritious solution contained digoxin,
which indicated the extract of Rhizoma Zingiberis might be the revulsant of P-glycoprotein. On the basis of
the above results, it could be concluded that the possible mechanism of the inhibition of the extract of Rhi-

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zoma Zingiberis on the absorption of the aconite alkaloids in the rat gut sacs was the extract of Rhizoma
Zingiberis which served as the potential revulsant could inhibit the absorption of aconite alkaloids by inhib-
iting the activity of the intestinal P-gp.
Keywords everted rat gut sacs; aconite alkaloids; Rhizoma Zingiberis; ultra performance liquid chroma-
tography-mass spectrometry; P-glycoprotein
川乌是毛茛科乌头属植物乌头(Aconitum carmicha-
eli Debx.)的干燥母根, 主要功效是祛风除湿, 温经止痛.
川乌中的主要化学成分为生物碱, 统称为乌头类生物
碱, 是川乌中的药效成分, 同时也是其毒性成分, 尤其
是其中的双酯型生物碱, 如乌头碱、中乌头碱、次乌头
碱, 毒性最强[1,2]. 乌头类生物碱中毒的表现为肢体麻
木、头晕、眼花等症[3]. 由于川乌中生物碱引起的强烈
毒性, 临床多用其炮制品, 并多与其它中药配伍共用.
干姜是报道解乌头类生物碱毒性的中药之一[4]. 本文通
过研究干姜对川乌中双酯型生物碱在大鼠肠内吸收的
影响, 来探讨干姜对川乌的解毒机理.
目前研究药物吸收的方法主要有外翻肠囊法[5,6]、在
体回肠灌流法[7]、Caco-2 细胞模型[8]. 基于离体实验的
外翻肠囊法, 以其操作简单、实验条件可控、影响因素
少的特点, 适用于同时考察药物在不同肠段的吸收特性
及影响因素[9,10]. 外翻肠囊法是将大鼠肠段外翻后将一
端结扎, 向囊内注入空白肠营养液后将另一端结扎, 然
后将外翻肠囊置于含药肠营养液中培养, 定时从肠囊内
侧取样, 测定药物浓度变化.
超高液相与三重四级杆质谱联用技术是将快速液
相强大的分离能力和定量质谱的高灵敏度、多反应监测
扫描模式的优势完美结合, 适合用于中药多组分体内吸
收的同步研究. 本实验中所有成分(生物碱、葡萄糖、地
高辛)的测定均采用此技术, 并且对于每一种成分, 均选
取定性与定量两种子离子进行扫描, 增加了结果的准确
性. 质谱作为葡萄糖的检测器取代了传统既繁琐又相对
不准确的显色方法[11,12], 充分体现了液质联用技术应用
广泛的特点.
本文以川乌中的双酯型生物碱为研究对象, 考察加
入干姜提取液后, 川乌中乌头碱、中乌头碱、次乌头碱
的精确含量变化及其它双酯型生物碱的相对含量变化.
在确定干姜提取液对川乌中双酯型生物碱在大鼠肠囊
内吸收的影响后, 选取公认的 P-葡糖蛋白抑制剂维拉帕
米及公认的 P-葡糖蛋白底物地高辛[13～15], 分别与川乌
提取液及干姜提取液共同培养, 间接考察川乌中双酯型
生物碱与 P-葡糖蛋白的关系及干姜提取液对 P-葡糖蛋
白的影响, 探讨干姜提取液影响双酯型生物碱在大鼠肠
囊内吸收的可能机理, 进而从中药化学成分肠吸收的角
度阐明干姜对川乌的解毒作用.
1 实验部分
1.1 试剂与仪器
AcquityTM UPLC-Xevo TQ 质谱仪(美国 Waters 公
司); Agilent 1100 HPLC -ELSD 2000 (美国 Alltech 公司).
环己烷、二甲基亚砜(分析纯, 北京化工厂), 甲醇(色谱
纯, 美国 Fisher 公司). 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱(中
国药品生物制品检定所), 利血平、维拉帕米、地高辛(美
国 Sigma 公司). 川乌(四川江油), 干姜(长春市吉林大药
房).
1.2 生川乌、干姜提取液的制备
称取50 g生川乌, 加500 mL无水乙醇超声提取3 h,
共两次, 合并两次提取液, 浓缩后用环己烷与水萃取,
萃取的下层溶液定容至 50 mL, 用于外翻肠囊法实验.
称取 10 g 干姜, 加 100 mL 水浸泡 1 h, 煎煮 1 h, 共
煎煮两次, 合并两次煎煮液, 浓缩至 10 mL, 用于外翻
肠囊法实验.
1.3 空白肠营养液及含药肠营养液的配制
1.3.1 空白肠营养液的配制
称取 7.8 g NaCl, 0.35 g KCl, 0.32 g NaH2PO4, 1.37 g
NaHCO3, 1.4 g 葡萄糖(葡萄糖临用前添加), 将上述药品
用蒸馏水溶解后定容至 1000 mL, 即得空白 Krebs-
Ringer’s 肠营养液.
1.3.2 含药肠营养液的配制
本实验所研究的是干姜与生川乌的配伍比例为 1∶
1 时, 干姜提取液对生川乌提取液中双酯型生物碱在肠
内吸收的影响 . 文献报道生川乌的 LD50 值为 11.3
g/kg[16], 本实验选取其 1/11.3 量为实验剂量, 即每只大
鼠给药剂量为 1 g 生药/kg. 相应地, 本实验选择了干姜
的给药剂量为 1 g生药/kg. 各含药肠营养液的配制如下:
生川乌提取液组: 向 7800 μL 空白 K-R 肠营养液中加入
200 μL 生川乌提取液, 即得; 生川乌提取液＋干姜提取
液组: 向 7600 μL空白K-R肠营养液中加入 200 μL生川
乌提取液及 200 μL 干姜提取液, 即得; 生川乌提取液＋
维拉帕米组: 向 7600 μL 空白 K-R 肠营养液中加入 200
μL 生川乌提取液及 200 μL 浓度为 1 mg/mL 的维拉帕米

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溶液, 即得; 干姜提取液＋地高辛组: 向 7600 μL 空白
K-R 肠营养液中加入 200 μL 干姜提取液及 200 μL 浓度
为 0.8 mg/mL 的地高辛溶液, 即得.
1.4 离体外翻肠囊法实验
26 只 Wister 大鼠(购于长春生物制品所)随机分为 6
组, 分别为药液空白组 3 只(用于测定葡萄糖含量)、生
川乌提取液组 3 只(用于测定葡萄糖含量)、生川乌提取
液组 5 只(用于测定生物碱含量)、生川乌提取液＋干姜
提取液组 5 只、生川乌提取液＋维拉帕米组 5 只、干姜
提取液＋地高辛组5只, 实验前禁食24 h, 自由饮水. 然
后将大鼠断头处死, 立刻打开腹腔, 分别迅速取出 10
cm 长的十二指肠(自幽门 1 cm 处开始)、空肠(自幽门 15
cm 处开始)、回肠(自盲肠上行 20 cm 处开始)、结肠(从
盲肠后端开始). 将各肠段立即放入 37 ℃ K-R 肠营养
液中, 冲洗至无内容物流出, 小心剥离肠管表面肠系膜
和脂肪. 冲洗干净后将肠段一端结扎, 翻转, 向其中加
入约1.5 mL空白K-R肠营养液, 将另一端结扎后放入持
续通有O2-CO2混合气体(95∶5)的含药K-R肠营养液中.
分别在 20, 40, 60, 80, 100, 120 min 时间点吸取肠囊
内液 100 μL, 并向囊内补充等体积、新鲜且 37 ℃的K-R
肠营养液.
实验结束后, 测定肠囊内液体积, 液面高度, 计算
肠管面积.
离体外翻肠囊样品冻干保存, 备用.
在测定样品之前需对肠囊活性进行判断. 保持活性
的肠囊可将葡萄糖由黏膜侧转运至浆膜侧, 因此测定浆
膜侧与黏膜侧葡萄糖含量比值是否随培养时间的延长
而增大可以评估肠囊的活性. 本实验已通过实验证实肠
囊保持活性.
1.5 液相与质谱条件
1.5.1 乌头类生物碱的测定
Waters AcquityTM-Xevo TQ 液质联用仪, 电喷雾离
子源, 锥孔电压 54 V, 毛细管电压 3.00 kV, 脱溶剂气温
度 350 ℃, 脱溶剂气流速 700 L/h, 碰撞气流速 0.15
mL/min. 采用多反应监测正离子扫描模式, 其中乌头
碱、中乌头碱、次乌头碱、10-羟基中乌头碱的定量离子
分别为 m/z 586.31, m/z 572.3, m/z 556.31, m/z 588, 定性
离子分别为 m/z 368.23, m/z 354.2, m/z 338.19, m/z
478.24. BEH Extend-C18 色谱柱(2.1 mm×50 mm, 1.7
µm, 美国安捷伦公司). 流动相为甲醇-乙腈(1∶1) (A)
与 5.143 μmol/L 的三乙胺水溶液(B). 梯度洗脱条件为:
0～1 min 10%～43% A, 2～4.5 min 55%～100% A, 5～7
min 10% A.
流速为 0.3 mL/min, 柱温为 35 ℃. 外翻肠囊冻干样品
测定前用 100 μL 流动相(A)溶解, 进样 5 μL. 测得肠囊
样品中双酯型生物碱的多反应监测质谱图见图 1, 乌头
碱、中乌头碱、次乌头碱的浓度分别为 0.3541, 0.1688,
0.1815 μg/mL.
1.5.2 地高辛的测定
仪器与色谱柱同乌头类生物碱的测定. 锥孔电压50
V, 毛细管电压 2.50 kV, 采用多反应监测负离子扫描模
式, 选择 m/z 649.64 作为定量离子, m/z 475.35 作为定性
离子, 对应的碰撞电压分别为 45 和 45 V. 流动相为甲
醇-乙腈(1∶1)(A)与超纯水(B)采用 70%A 等度洗脱. 流
速为 0.3 mL/min, 柱温为 30 ℃. 外翻肠囊冻干样品测
定前用 50 μL 二甲基亚砜与 50 μL 流动相(A)溶解, 进样
5 μL. 测得肠囊样品中地高辛的多反应监测质谱图见图
2, 地高辛浓度为 3.479 μg/mL.
1.5.3 葡萄糖的测定
仪器同乌头类生物碱的测定. 电喷雾离子源, 锥孔
电压 10 V, 毛细管电压 2.50 kV, 脱溶剂气温度 350 ℃,
脱溶剂气流速 700 L/h, 碰撞气流速 0.15 mL/min. 采用
多反应监测负离子扫描模式, 选择 m/z 59 作为定量离
子, m/z 89 作为定性离子, 对应的碰撞电压分别为 15 和
15 V. Hypersil NH 色谱柱(4.6 mm×150 mm, 25 µm, 中
国依利特公司)流动相采用 80%乙腈与 20%超纯水等度
洗脱. 流速为 0.3 mL/min, 柱温为 35 ℃. 外翻肠囊冻干
样品测定前用 100 μL 超纯水溶解, 进样 5 μL. 葡萄糖标
准品的多反应监测质谱图见图 3.
1.6 数据处理
乌头碱、中乌头碱、次乌头碱在各个时间点的单位
肠管面积累积吸收量(Q)计算:
1
1
n
n i
i
C V C
Q
A
=
∑－× ＋ ×0.1
＝

其中 Cn是某时间点样品中待测成分的浓度, V 是肠囊内
液体积,
1
1
n
i
i
C
=
∑－ 是各时间点待测浓度之和, A 是肠囊表面
积 . 以 Q (μg/cm2)对时间 (h)进行零级方程拟合 , 用
Origin7.5 软件绘图.
各肠段乌头碱表观渗透系数(Papp)计算 : Papp＝
[V/(Area•C0)]•dC/dt, 其中 V 是肠囊内液体积, Area 是肠
囊表面积, C0是囊外乌头碱初始浓度, dC/dt 是囊内乌头
碱对时间的变化率, 可由囊内乌头碱浓度与时间直线回
归求得.



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图 1 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱和 10-羟基中乌头碱的多反应监测质谱图
Figure 1 Multiple reaction monitoring (MRM) mass spectra of diester-alkaloids


图 2 地高辛的多反应监测质谱图
Figure 2 MRM mass spectra of digoxin


No. 5 辛 杨等：利用液质联用技术分析干姜对乌头类生物碱在大鼠肠内吸收的影响 555


图 3 葡萄糖的多反应监测质谱图
Figure 3 MRM mass spectra of glucose
2 结果与讨论
2.1 分析方法有效性验证
2.1.1 选择性考察
取空白肠囊内液 100 μL, 冷冻干燥后用 100 μL 流
动相溶解, 离心后取上清液用于质谱检测. 四种双酯型
生物碱、地高辛的多反应监测谱图见图 4.
2.1.2 线性关系考察
配制乌头碱、中乌头碱、次乌头碱浓度分别为 18.13,
8.93, 10.6 μg/mL 的混标溶液, 逐级稀释 5, 10, 50, 100,
500, 1000, 10000 倍, 配制成系列标准品溶液. 配制地高
辛浓度为 3.2 μg/mL 的标准品溶液, 逐级稀释 5, 25, 125,
625, 15625倍按1.5节下方法检测, 以各待测成分浓度为
横坐标, 以峰面积为纵坐标, 得到乌头碱、中乌头碱、
次乌头碱、地高辛的标准曲线见表 1.
2.1.3 精密度试验
配制低、中、高三种浓度的乌头碱、中乌头碱、次
乌头碱混标溶液, 及地高辛的单标溶液, 对每一浓度取
平行 15 个样本进行分析, 连续测定 3 d, 在相同的色谱
条件下检测, 根据每种成分的标准曲线计算各标准溶液
的浓度, 计算日内及日间浓度的相对标准偏差(RSD),
结果见表 2.
2.1.4 检测限与定量下限
本实验采用比较直观的方法确定各被测成分的检
测限(LOD)与定量下限(LLOQ), 即在标准曲线低浓度点
附近添加一系列已知浓度的双份样品进行检测, 选取分
析物峰附近的一段基线为参照, 仪器可自动计算选定色
谱峰的信噪比(S/N), 以 S/N≥3 时的样品浓度为 LOD,
以 S/N≥10 时的样品浓度为 LLOQ. 乌头碱、中乌头碱、
次乌头碱、地高辛的 LOD 值分别为 0.03626, 0.01786,
0.0212, 8 ng/mL, LLOQ 值分别为 0.09065, 0.04465,
0.053 , 16 ng/mL.
2.1.5 基质效应与提取回收率考察
取低、中、高三种浓度的乌头碱、中乌头碱、次乌
头碱混标溶液, 及地高辛的单标溶液, 各 6 份, 按各成
分质谱条件测定后计算浓度为 C1, 取空白肠囊内液 100
μL, 冷冻干燥后, 残渣加入 100 μL 待测成分标准溶液,
测定后计算浓度为 C2, 以 C2/C1 计算基质效应; 取空白
肠囊内液 100 μL, 加入 100 μL 待测成分标准溶液各 6
份, 冻干, 残渣用 100 μL 流动相溶解后, 用于质谱检测,
计算浓度为 C3以 C3/C2计算提取回收率. 结果见表 3.
2.1.6 稳定性考察
配制低、中、高三种浓度的乌头碱、中乌头碱、次
乌头碱混标溶液, 及地高辛的单标溶液, 对每一浓度取
平行 6个样本进行分析, 分别在 0, 24, 48 h时检测, 根据
每种成分的标准曲线计算各标准溶液的浓度, 计算不同
时间浓度的相对标准偏差(RSD), 结果低、中、高 3 个浓
度样品的稳定性(RSD)见表 4.
2.2 双酯型生物碱单位肠管面积累积吸收量的测定
乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的单位肠管面积累积
吸收量见表 5. 由表 5 可知, 乌头碱、中乌头碱、次乌头
碱在空肠的单位肠囊面积累积吸收量及吸收率均最大,
在结肠均最小, 说明三种生物碱的吸收主要发生在小
肠. 由表 5 还可知, 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的累
积吸收量与三者的初始浓度有关, 中乌头碱的初始浓度
最大, 其在各肠段的累积吸收量也最大, 说明双酯型生
物碱的累积吸收量存在浓度依赖性. 但吸收率值仅在空

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图 4 空白肠营养液的多反应监测质谱图
Figure 4 MRM mass spectra of blank intestinal nutritious solution
A: digoxin, B: aconite alkaloids
表 1 线性关系考察结果
Table 1 Linear relationship of aconite alkaloids and digoxin
Component Standard curve Linearity range/(ng•mL－1) R2
Aconitine y＝164.7x－26455 1.813～18130 0.9988
Mesaconitine y＝92.71x－5574 0.8930～8930 0.9994
Hypaconitine y＝104.8x－11926 1.060～10600 0.9983
Digoxin y＝0.1856x＋17.12 2.048～32000 0.9984


No. 5 辛 杨等：利用液质联用技术分析干姜对乌头类生物碱在大鼠肠内吸收的影响 557

表 2 日内、日间精密度试验结果
Table 2 Inter-day and Intra-day precision of aconite alkaloids and digoxin
Components Added/(ng•mL－1) Found/(ng•mL－1) Inter-day RSD/% Intra-day RSD/% RE/%
Aconitine 14504 13018 3.450 1.405 10.24
1133 1171 0.2911 10.62 3.375
226.6 220.4 4.789 3.365 2.762

Mesaconitine 7144 7906 3.001 12.27 10.67
558 589 2.324 8.360 5.556
111.6 112.0 6.567 3.515 0.3286

Hypaconitine 8480 8881 7.068 6.539 4.732
662 604.6 2.926 9.339 8.671
132.5 151.0 3.797 3.509 13.92

Digoxin 16000 17231 7.735 3.995 7.694
3200 3292 9.853 8.178 2.882
128 125.8 14.17 7.657 1.709
表 3 基质效应与提取回收率试验结果
Table3 Extracted recovery and matrix effect of aconite alkaloids and digoxin
Component Added/(ng•mL－1) Matrix effect Extracted recovery
Aconitine 14504 99.36±8.421 100.7±9.285
1133 88.69±4.950 98.13±1.949
226.6 101.7±3.763 102.7±1.004

Mesaconitine 7144 88.30±2.089 106.8±5.689
558 90.33±4.757 99.16±8.307
111.6 87.93±5.967 104.4±2.979

Hypaconitine 8480 97.35±6.580 107.1±4.716
662 110.4±4.418 97.15±2.274
132.5 101.3±4.901 101.9±1.215

Digoxin 16000 90.77±3.157 89.38±4.530
3200 101.2±3.921 97.56±9.564
128 93.56±3.386 86.97±4.436
表 4 稳定性考察结果
Table 4 Stability of aconite alkaloids and digoxin
RSD/%

Aconitine Mesaconitine Hypaconitie Digoxin
High concentration 10.04 12.97 4.136 1.336
Middle concentration 11.72 11.58 6.089 4.913
Low concentration 2.448 5.703 2.223 2.036
表 5 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱在肠囊内的累积吸收量及吸收率 a
Table 5 The accumulative absorptive content and abosrptivity of aconitine, mesaconitine and hypaconitine in unit area of the rat gut sac
Q/(ng•cm－2) I/%
Alkaloid
C0/
(ng•mL－1) Duodenum Jejunum Ileum Colon Duodenum Jejunum Ileum Colon
Aconitine 20697.6 395.0±0.15 405.5±0.06 369.6±0.03 232.4±0.11 0.2386 0.2449 0.2232 0.1404
Mesaconitine 235652.9 6239±0.14 10283±0.18 2978±0.05 2913±0.19 0.3309 0.5454 0.1580 0.1545
Hypaconitine 73838.2 1315±0.24 1471±0.17 1222±0.26 674.6±0.18 0.2226 0.2491 0.2068 0.1142
a C0 represents initial concentration. Q represents the accumulative absorptive content in unit area of the rat gut sac. I represented the accumulative absorptivity in
unit area of the rat gut sac, I＝100%×Q/C0.

558 化 学 学 报 Vol. 70, 2012


肠段符合此规律, 其余三个肠段的吸收率值并无规律可
循, 推测双酯型生物碱在十二指肠、回肠、结肠段的吸
收除与浓度有关外, 还可能与化合物的结构有关.
由于缺少 10-羟基中乌头碱的对照品, 故 10-羟基中
乌头碱的单位肠管面积累积吸收量无法计算, 但可根据
峰面积计算其在肠囊内吸收的变化趋势(图 5)及吸收率.
经过计算, 10-羟基中乌头碱在十二指肠、空肠、回肠、
结肠的单位肠管面积累积吸收率分别为 0.08300%,
0.08764%, 0.07226%, 0.06144%, 其中在空肠的吸收率
最大, 结肠的吸收率最小.
2.3 干姜提取液对双酯型生物碱在肠囊内吸收的影响
为考察干姜提取液对双酯型生物碱在肠内吸收的
影响, 引入增渗透比(ER)作为评价指标. ER＝P/P0, P 和
P0 分别是加与不加干姜提取液时双酯型生物碱的表观
渗透系数(Papp). 各生物碱的 Papp 值计算结果见表 6.
由表 6 可以看出, 加入干姜提取液后, 三种双酯型生物
碱的 Papp 值均降低, 说明干姜提取液可抑制三种生物
碱在肠囊内的吸收. 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱在各
肠段增渗比的最小值分别为 0.1557, 0.1504, 0.1252, 说
明干姜对乌头碱在十二指肠吸收的抑制作用最强, 对中
乌头碱与次乌头碱在空肠吸收的抑制作用最强.
对于 10-羟基中乌头碱, 由于缺乏其标准品, 故不
能对其Papp值进行计算, 但由图 5可直观地看出干姜提
取液同样抑制了其在各肠段内的吸收.
2.4 P-葡糖蛋白抑制剂对双酯型生物碱在肠囊内吸收
的影响
P-葡糖蛋白是存在于小肠粘膜上皮细胞的一种重
要糖蛋白. 它可将药物由浆膜侧泵回黏膜侧, 抑制药物
的吸收. 但对于毒性药物而言, 其可降低毒性药物在小
肠内的吸收, 从而减低毒性. 维拉帕米是 P-葡糖蛋白的
抑制剂, 可促进 P-葡糖蛋白底物在肠内的吸收, 因此通
过判断维拉帕米对双酯型生物碱在肠内吸收的影响, 可
判断双酯型生物碱是否为 P-葡糖蛋白的底物.
在分析维拉帕米对双酯型生物碱肠内吸收的影响
时, 同样引入增渗透比(ER)作为评价指标, 结果见表 7.
由表 7 可以看出, 加入维拉帕米后, 三种双酯型生物碱
的 Papp 值均增大, 说明维拉帕米可促进三种生物碱在
肠囊内的吸收. 乌头碱、中乌头碱、次乌头碱在各肠段
增渗比的最大值分别为 5.752, 8.340, 11.98, 表明维拉帕
米对乌头碱在回肠吸收的促进作用最强, 对中乌头碱与
次乌头碱在结肠吸收的促进作用最强.
对于 10-羟基中乌头碱, 图 5 可直观地看出维拉帕
米促进了其在各肠段内的吸收, 说明其为 P-葡糖蛋白的
底物.
2.5 干姜提取液对地高辛在肠囊内吸收的影响
为进一步研究干姜提取液对双酯型生物碱的解毒
机制, 我们将干姜提取液加入到含有地高辛的肠营养液
中, 通过测定加入干姜提取液前后地高辛在肠囊内吸收
的变化来判断干姜提取液与 P-葡糖蛋白的关系. 地高辛
为 P-葡糖蛋白的底物, 若加入干姜提取液后, 地高辛的
单位面积累积吸收量升高或降低, 可说明干姜提取液中
存在能够抑制或诱导 P-葡糖蛋白的成分. 图 6 给出了加
入干姜提取液前、后地高辛在实验时间内的吸收曲线.
由图 6 可以看出, 在加入干姜提取液的各肠段中, 地高
辛在任意时间点的单位面积累积吸收量均低于未加入
干姜提取液的对应值. 说明干姜提取液抑制了地高辛在
肠囊内的吸收, 干姜提取液中很可能存在诱导 P-葡糖蛋
白的成分, 还有待进一步研究

表 6 干姜提取液对乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的表观渗透系数(Papp)的影响 a
Table 6 Influence of the extract of Rhizoma Zingiberis on Papp value of aconitine, mesaconitine and hypaconitine
Group Alkaloid Duodenum Jejunum Ileum Colon
Before Rhizoma
Zingiberis being
added
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
(1.497±0.1259)E-05
(1.193±0.1482)E-05
(0.9689±0.1204)E-05
(1.135±0.1253)E-05
(3.181±0.3236)E-05
(1.755±0.1785)E-05
(1.066±0.1392)E-05
(1.215±0.1670)E-05
(1.151±0.1582)E-05
(1.033±0.08100)E-05
(1.433±0.2958)E-05
(0.8884±0.06965)E-05
After Rhizoma
Zingiberis being
added
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
(2.330±0.05633)E-06
(7.460±0.1205)E-06
(2.182±0.04368)E-06
(5.747±0.04572)E-06
(4.785±0.04247)E-06
(2.197±0.01748)E-06
(4.851±0.02251)E-06
(2.401±0.01114)E-06
(4.556±0.02114)E-06
(3.254±0.03686)E-06
(5.494±0.06222)E-06
(1.546±0.01751)E-06
ER (P1/P0)
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
0.1557
0.6254
0.2252
0.5063
0.1504
0.1252
0.4548
0.1977
0.3958
0.3150
0.3835
0.1740
a P0 represents the Papp value of aconitine, mesaconitine and hypaconitine before Rhizoma Zingiberis was added; P1 represents the Papp value of aconitine, mesaco-
nitine and hypaconitine after Rhizoma Zingiberis was added.

No. 5 辛 杨等：利用液质联用技术分析干姜对乌头类生物碱在大鼠肠内吸收的影响 559


图 5 维拉帕米、干姜提取液对 10-羟基中乌头碱肠内吸收的影响
Figure 5 Effect of verapamil and the extract of Rhizoma Zingiberis on the absorptive profile of 10-OH-aconitine (Mean±SD, n＝5)
a: duodenum, b: jejunum, c: ileum, d: colon
表 7 维拉帕米对乌头碱、中乌头碱和次乌头碱的表观渗透系数(Papp)的影响 a
Table 7 Influence of verapamil on Papp value of aconitine, mesaconitine and hypaconitine
Group Alkaloid Duodenum Jejunum Ileum Colon
Before vepapamil
being added
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
(1.497±0.1259)E-05
(1.193±0.1482)E-05
(0.9689±0.1204) E-05
(1.135±0.1253 )E-05
(3.181±0.3236 )E-05
(1.755±0.1785 )E-05
(1.066±0.1392)E-05
(1.215±0.1670)E-05
(1.151±0.1582 )E-05
(1.033±0.08100)E-05
(1.433±0.2958)E-05
(0.8884±0.06965)E-05
After vepapamil
being added
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
(4.665±0.5615)E-05
(3.299±0.2390)E-05
(2.841±0.2058)E-05
(5.361±0.4831)E-05
(4.616±0.2296)E-05
(3.798±0.1889 )E-05
(6.135±0.3381)E-05
(8.582±0.4554)E-05
(3.637±±0.1693)E-05
(5.521±0.4268)E-05
(11.94±1.710)E-05
(10.65±1.418)E-05
ER (P2/P0)
Aconitine
Mesaconitine
Hypaconitine
3.117
2.770
2.932
4.923
1.450
2.164
5.752
7.060
3.160
5.344
8.340
11.98
a P0 represents the Papp value of aconitine, mesaconitine and hypaconitine before verapamil was added; P2 represents the Papp value of aconitine, mesaconitine and
hypaconitine after verapamil was added..

3 结论
根据本文的实验结果可初步得出以下结论: 乌头
碱、中乌头碱、次乌头碱在大鼠肠囊内的单位肠管面积
累积吸收量与三者的初始浓度有关, 初始浓度高的成分
在各时间点的单位肠管面积累积吸收量均高于初始浓
度低的成分; 各双酯型生物碱在空肠内的吸收最大; 干
姜水提液中存在抑制双酯型生物碱在肠内吸收的成分,
具体成分有待进一步研究; 干姜提取液抑制双酯型生物
碱在肠囊内吸收的可能机理是通过诱导 P-葡糖蛋白来
抑制作为 P-葡糖蛋白底物的双酯型生物碱的吸收. 本实
验可为干姜解乌头毒性的机理研究提供参考.




560 化 学 学 报 Vol. 70, 2012



图 6 干姜提取液对地高辛肠内吸收的影响
Figure 6 Effect of the extract of Rhizoma Zingiberis on the absorptive profile of digoxin (Mean±SD, n＝5)
a: duodenum, b: jejunum, c: ileum, d: colon
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