全 文 ：·论著·
荜澄茄等 3种挥发油对乌头碱经皮渗透的影响＊
李艳杰 ,白一岑 ,马云淑
(云南中医学院中药学院 ,昆明 650200)
　　摘要:目的:研究荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥发油对乌头碱经皮渗透的影响。方法:采用改良 F ranz 扩散池
法 , 以 HPLC 法测定模型药物乌头碱的累积渗透量 ,考察不同浓度的荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥发油对乌头碱的
促渗效果。结果:7%浓度的荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥发油与 3%氮酮的渗透系数(×10-3cm/ h)分别为:10.79 、
5.82 、5.40、3.91 ,与无促渗剂的对照组比较 , 差异均具有显著性意义 , 促渗倍数分别为 3.87、2.09 、1.94 、1.40
倍 , 可见 7%的 3 种挥发油促渗倍数均大于 3%氮酮。结论:7%的荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥发油均能明显促进
乌头碱的经皮渗透。
关键词:促渗剂;乌头碱;荜澄茄油;干姜油;石菖蒲油
Effect of three volatile oils on percutaneous penetration of aconitine through mouse skin in vitro
LI Yan-jie , BAI Yi-cen , MA Yun-shu
(School of Materia Medica , Yunnan University of T raditional Chinese Medicine, Kunming 650200 , China)
　　Abstract:Objectiv e:To study the effect of vo latile oil of F ructus Litseae(FL), Rhizoma Z ingiberis(RZ)and
Rhizoma Acori Talarinowii(RAT)on percutaneous pene tra tion of aconitine through mouse skin in vitro .Methods :
By using improved F ranz diffusion cells , the effects of these 3 volatile oils on the percutaneous penetration of aconi-
tine were observed and compared with azone , and the cumulative amount of aconitine was determined by HPLC.
Results :The penetration coefficient o f aconitine with 7%(v/ v)volatile oil of FL , RZ and RAT and 3% azone were
10.79 , 5.82 , 5.40 , 3.91 , respectively;Compared with the group without penetration enhancers , the differences were
significannt;and the enhancement ratios were 3.87 , 2.09 , 1.94 and 1.40 , respectively , w hich showed the enhance-
ment ratios of 7% of the 3 volatile oils were higher than that of 3% azone .Conclusion :The 7% volatile oils of FL ,
RZ and RAT enhance the permeation of aconitine effectively.
Key words:Penetration enhancers;Aconitine;Vola tile oil of Fructus Litseae ;Volatile oil o f Rhizoma Zin-
giberis;Volatile oil of Rhizoma Acori Tatarinowii
＊国家自然科学基金项目(No.30560187)
通讯作者:马云淑 ,云南省昆明市双桥路 201号云南中医学院中药学院 ,邮编:650200 ,电话:0871-7154594
E-mail:yunshuma2@126.com
　　透皮给药系统是治疗长期性与慢性疾病的简
单 、方便和行之有效的第三代新型制剂 ,它具有避免
肝脏的首过效应和药物在胃肠道的降解 ,减少用药
的个体差异;延长给药间隔;维持恒定的有效血药浓
度 ,降低胃肠毒副反应;使用方便等特点 。但因皮肤
角质层的屏障作用 ,阻碍了某些药物的透皮吸收 ,而
透皮吸收促进剂的使用是增加药物透皮吸收的重要
方法之一 。为了得到效果好 、副作用小的促渗剂 ,现
已开始从中药中研究 、发掘 ,目前研究最多的是萜烯
类化合物 。本实验中选择的荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥
发油多为单萜和倍半萜 ,其作为促渗剂研究均未见
文献报道。
乌头碱是具有很强生理活性的双酯类生物碱 ,
现代药理学研究证明 ,其具有镇痛 、抗炎 、免疫抑制 、
麻醉 、降压等作用[ 1] ,尤其在外用镇痛方面有独到
之处。荜澄茄和干姜属于温里药 ,具有镇痛 、镇静等
作用;石菖蒲属于芳香开窍药 ,具有抗炎 、镇痛等作
用;三种挥发油对乌头碱可起到协同药理作用。本
研究以乌头碱为模型药考察了不同浓度的荜澄茄 、
干姜 、石菖蒲挥发油对乌头碱透皮吸收的影响 ,并以
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促渗剂氮酮进行阳性对照观察 ,为中药促渗剂的研
究与开发提供实验依据。
材料与仪器
1.药品与试剂　乌头碱对照品(中国药品生物制
品鉴定所 , 20mg/支 ,纯度 98%以上 ,批号:110720-
200410);乌头碱为毛茛科乌头(Aconitum carmichaeli
Debx.)的母根主要成分(昆明风山渐医药研究公司 ,批
号:07031817 ,纯度98%);荜澄茄为樟科植物山鸡椒(山
苍树)[ Litsea cubeba(Lour.)Pers.]的干燥成熟果实;干
姜为姜科植物干姜[ Zingiber of ficinale Rosc.]的干燥根
茎;石菖蒲为天南星科多年生草本植物石菖蒲[ Acorus
gramineus Soland.]根茎(云南省药材公司 ,由云南中医
学院生药教研室鉴定)。8%Na2S溶液 、生理盐水 、70%
乙醇 、10mmol/L磷酸盐缓冲液 ,均为分析纯 ,甲醇为色
谱纯。
2.动物　昆明种小白鼠由云南中医学院实验
动物中心提供 , SPF 级 ,许可证号:Xxk(m)2004-16。
体质量(20±2)g ,鼠龄 6-7周 ,10只雌雄兼用。
3.仪器　①TK-12B 透皮扩散试验仪 ,上海锴
凯科技贸易有限公司产品;②高效液相色谱仪 ,德国
Agilent1100Series(DAD);③电子分析天平(Precisa
Xs125A d =0.0001g);④KUDOS-SK250HP 超声
仪 ,上海科导超声仪器有限公司。
方法
1.挥发油提取　荜澄茄经水蒸汽蒸馏后得到的
淡黄色油状液体 ,收率为 1.43%;干姜经水蒸汽蒸馏
后得到的近无色油状液体 ,收率为0.8%;石菖蒲经水
蒸汽蒸馏得到的淡黄色油状液体 ,收率为0.6%。
2.HPLC条件
2.1 　色谱条件 　色谱柱:Eclipse XDB-C18
(250mm ×4.6mm , 5μm);流动相:甲醇∶10mmol/L
KH2PO4=49∶51;流速:1.0ml/min;波长为 240nm。
在此条件下 ,样品峰分离较好 , 且挥发油无干扰 ,
HPLC色谱图见图 1。
　　2.2　标准曲线的制定　精密称取一定量的乌
头碱 ,少量甲醇溶解 ,生理盐水定容 ,配成一系列不同
注:1为乌头碱标准品 ,2为 7%荜澄茄油+乌头碱, 3为 7%
干姜油+乌头碱, 4为 7%石菖蒲油+乌头碱,5为 3%氮酮+乌头碱,
6为不含挥发油乌头碱。
图 1　乌头碱的 HPLC 色谱图
浓度(0.0066 、0.013 、0.033 、0.066 、0.13 、0.23mg/ml)
的溶液 ,进行测定。以峰面积为横坐标 ,进样量(μg)
为纵坐标 ,进行线性回归 ,得回归方程为Y=809.23X+
70.481 , r=0.9998 ,线性范围为 0.23-8.05μg。
2.3　回收率实验　在已知浓度的样品皮肤透
过液中加入一定量的乌头碱对照品 ,测定浓度 ,计算
回收率 , 结果:平均回收率为 99.99%, RSD 值为
0.867%(n =6)。
2.4　精密度实验　用 0.23mg/ml对照品溶液
连续测定 6次 ,计算其浓度 , RSD 值为 0.9793%。
2.5　稳定性实验　用 0.23mg/ml对照品溶液
分别于 0 、1 、2 、4 、6 、8 、12h测定 ,计算其含量 , RSD
值为 0.0244%。
3.离体皮肤的制备　将小鼠断颈处死 ,取腹部
皮肤 ,8%Na2S 脱毛 ,去掉皮下脂肪 ,用生理盐水洗
净 、浸泡 ,置冰箱中冷藏备用 。
4.透皮试验[ 2] 　将处理好的皮肤置于 Franz
扩散池的供给池与接收池结合处 ,使角质层面向供
给池 ,用弹簧夹固定 ,接收池中加入生理盐水 ,在供
给池中加入 12mg/ml乌头碱供试液 1ml(不同浓度
的三种挥发油+乌头碱 70%乙醇液)进行体外透皮
实验 , 在 1 、2 、4 、6 、8 、12h 时将接受液全部取出
(7m l),同时补加 7ml接受液并排尽气泡 。并以空
白皮肤为随行对照 ,氮酮为(Azone)阳性对照 ,不含
挥发油的乌头碱供试液为阴性对照。透皮扩散实验
仪温度(37.0±0.2)℃,磁搅拌子转速(250±5)r/
min ,用HPLC 测定样品浓度 。
　　5.结果的处理　根据公式求得累积渗透量
Qn=(Cn×7+∑n=1
i=1C i×7)/2.92 ,公式中 Cn 为第 n个
取样点测得的药物浓度;Ci 为第 i个取样点测得的
药物浓度 。以累积渗透量 Q对时间 T 作图 ,药物渗
透达到稳态后 ,其中直线部分的斜率为药物的透皮
速率 ,即稳态渗透速率(Jss),药物的渗透系数(Kp)从
下式计算:Kp =Jss/C , C 为供给池的药物浓度[ 3]增
渗倍数(enhancementratio , ER),可从下式得到:ER
=Kp/Kp0[ 4] , Kp为加促渗剂后药物的渗透系数 , Kp0
为药物固有的渗透系数 。
结果
1.不同浓度的 3 种挥发油对乌头碱透皮吸收
的影响　取石菖蒲 、干姜 、荜澄茄三种挥发油 ,配制
成不同浓度挥发油和氮酮的乌头碱溶液 ,对照组为
不含挥发油的乌头碱溶液 ,按透皮试验所述实验方
法进行实验 。表 1为 3种不同浓度挥发油对乌头碱
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溶液 12h的累积渗透量 。
表 1　3种不同浓度挥发油对乌头碱溶液
12h的累积渗透量(mg/ cm2)
样品 累积渗透量
1% 3% 5% 7% 10%(浓度)
氮酮 0.5833 0.6055 0.5900 0.5933 0.4976
石菖蒲 0.7049 0.6835 0.7370 0.8098 0.6889
干姜 0.6592 0.6168 0.8311 0.9825 0.9873
荜澄茄 0.7479 1.6340 1.9656 2.4008 2.9247
本实验考察了 1%-10%的石菖蒲 、干姜 、荜澄
茄挥发油及氮酮的促透效果 ,石菖蒲 、干姜挥发油以
浓度 7%为佳 ,氮酮以 3%为佳 ,其中荜澄茄 、干姜挥
发油对乌头碱的促透作用有一定的浓度依赖性 ,但
7%与 10%无显著性差异 ,从经济方面考虑 ,故实验
结果选择了 3%的氮酮 ,7%的石菖蒲 、干姜 、荜澄茄
挥发油。
2.最佳浓度的 3种挥发油对乌头碱透皮吸收
的影响　取石菖蒲 、干姜 、荜澄茄 3种挥发油 ,配制
成7%的乌头碱溶液 ,含 3%氮酮的乌头碱溶液 ,按
透皮试验所述实验方法进行实验。测定接受池皮肤
透过液中乌头碱的含量 ,计算其渗透系数 、增渗倍数
等 ,结果见表 2;图 2为 3%氮酮 、7%石菖蒲 、7%干
姜 、7%荜橙茄挥发油在不同时间对乌头碱的累积透
过量 。结果表明:12h的平均累计透过量大小为:荜
澄茄油>干姜油>石菖蒲油。荜澄茄的增渗倍数是
不含促渗剂的 3.87 倍 ,干姜为 2.09倍 ,石菖蒲为
1.94倍 ,氮酮为 1.40倍 。所以 ,前三者的增渗倍数
比氮酮的略高。但石菖蒲与氮酮比较 ,两者无显著
性差异。
表 2　荜澄茄等挥发油对乌头碱渗透系数及
增渗倍数的影响(n =4 , x±s)
促进剂 浓度(%) Jss[ μg/(cm2·h)] Kp(×10-3cm/ h) ER
对照组 0 33.43±8.50 12.79±0.71 —
氮酮 3 46.95±11.84＊ 3.91±0.99 1.40
石菖蒲油 7 64.74±10.00＊ 5.40±0.83 1.94
干姜油 7 69.89±10.86＊■ 5.82±0.90 2.09
荜澄茄油 7 129.42±0.68＊＊■■ 10.79±0.05 3.87
　　注:与对照组比较 , ＊P<0.05 , ＊＊P<0.01;与氮酮比较 ,
■P<0.05 , ■■P<0.01。
讨论
本实验证实荜澄茄 、干姜 、石菖蒲挥发油作用
于皮肤后 ,使乌头碱渗透系数 、增渗倍数均增大 ,说
明这些挥发油对乌头碱的透皮吸收具有一定促进
作用 。
图 2　促进剂对乌头碱的经皮渗透曲线
　　离体鼠皮制备时注意不能伤及角质层 ,且在实
验过程中皮肤厚度及角质层对药物的渗透影响较
大 ,因此选用做多个批次以求平均值 。每批实验各
个改良 Franz扩散池上均要使用同一个小鼠的鼠皮
以保证实验的可重复性 ,避免因小鼠个体差异而产
生的实验误差。
荜澄茄 、干姜 、石菖蒲是常用中药 ,挥发油的主
要成分为萜类及芳香族化合物 ,此类化合物作为透
皮吸收促进剂的研究正日益引起人们的重视。
参 考 文 献
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(收稿日期:2007 年 5 月 23 日)
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