全 文 ：收稿日期:2005-12-02;　修订日期:2006-03-23
基金项目:国家 “ 863”计划重点资助项目(N o. 2002AA2Z3217)
作者简介:邹盛勤(1970-),男(汉族),江西奉新人 ,现任宜春学院副教授 ,
主要从事天然药物成分提取与分析研究工作.
反相高效液相色谱法测定连翘中乌索酸和
齐墩果酸的含量
邹盛勤1 , 余济海 2 , 高兴华 3 , 陈　武1
(1.宜春学院生物工程研究所 江西省天然药物活性成分研究重点实验室 ,江西 宜春　336000;
　2.宜春学院理学院 ,江西 宜春　336000;3.宜春学院生物制药 2002级 1班 ,江西 宜春　336000)
摘要:目的 建立同时测定连翘中乌索酸和齐墩果酸含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱(H PLC)法测定其含量。
色谱柱为 Nova-Pak C18(3. 9 mm ×300 mm, 4μm),流动相为甲醇-水 (88∶12), 流速 0. 8 m l /m in, 检测波长 210 nm ,柱温
25℃。结果 乌索酸和齐墩果酸分别在 0. 912 ～ 4. 560 μg(r=0. 999 8)和 0. 312 ～ 1. 560 μg(r=0. 999 6)范围内峰面积与
进样量呈良好的线性关系;乌索酸和齐墩果酸的平均回收率分别为 98. 2 % (RSD =1. 1%)和 97. 8 % (RSD =1. 4 %)。
结论 此法简单 、方便 、快速 、准确 , 可为中药连翘质量评价和控制提供科学依据。
关键词:连翘;　乌索酸;　齐墩果酸;　高效液相色谱
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)10-1872-02
HPLC Determ ination of the Contents ofU rsolic Acid andO leanolic Acid inForsth ia sus-
pense ( Thunb. )Vah l
ZOU Sheng-qin1 , YU J i-hai2 , GAO X ing-hua3 , CHEN W u1
(1. B ioeng ineering Institute of Y ichun College,Y ichun , J iangx i 336000, China;2. School of S ciences, Y ichun
CollegeY ichun, J iangxi 336000 , Ch ina;3. Departmen t of B ioengineering , Y ichun College, Y ichun , 336000,
China)
Abstract:Objective To develop a m ethod fo r the quantitative ana lysis of u rso lic acid and o leano lic acid in Forsy thia suspense
simu ltaneou sly. Methods H PLC w as ca rried ou t on the Nova-Pak C18 co lum n(3. 9 mm ×300 mm, 4 μm) a t 25℃ usingM eOH-
H2O(88∶12) as mobile pha sew ith a flow rate o f 0. 8 μl and detection wave leng th w as set a t 210 nm . R esults The re wa s good
linear re lationship between the peak area and the sam ple content injected at the ranges of 0. 912 ～ 4. 560μg(r =0. 999 8)and
0. 312 ～ 1. 560 μg(r=0. 9996) fo r urso lic ac id and o leano lic acid respective ly . The ave rage recove ry rate of urso lic acid and
o leano lic acid w ere 98. 2 % (RSD 1. 1 %)and 97. 8 % (RSD 1. 4 %), respective ly. Conc lu sion I ts a sim ple, convenien t,
qu ick and accu ra tem e thod, and can a lso be used scientifica lly in the qua lity estim a tion and contro l o f Chinese traditiona lmedic ine
Forsythia Suspense.
Key words:Forsy th ia suspense (Thunb. )V ah l;　Urso lic acid;　O leano lic ac id ;　HPLC
　　连翘 Fructus Forsy th iae为木犀科连翘属植物连翘 Forsy th ia
suspense(Thunb. )Vahl的干燥果实 , 别名旱连子 、大翘子 、空壳 、
连召 、落翘。始载于《神农本草经》, 性平气微香味微苦 , 具有清
热解毒 , 疏散风热 , 消痈散结 、强心利尿和降血压之功效 , 为疮家
圣药。主产于我国东北 、华北 、长江流域至云南等地 ,其中以山西
晋南 , 河南豫西所产不但色泽鲜亮且质量佳 , 为道地药材。连翘
是我国常用的大宗药材 , 主要含有连翘酚 ( forsytho l)、连翘苷
(Ph illy rin)、连翘苷元 (phillygen in);齐墩果酸 (o leano lic ac id,
OLA)、白桦脂酸(be tu linic acid)、乌索酸 (urso lic ac id, UA)、松脂
素(pinoresino l)、甾醇化合物 、马苔树脂醇苷(ma tairesinoside)和
多种烃类 、醛酮类 、醇酯醚类挥发性成分 [ 1～ 3] 。现代药理研究表
明 , 连翘具有广谱抗菌 、抗病毒等作用 ,对丹毒 、颈淋巴结结核 、尿
路感染 、扁桃体炎 、肾炎双球菌等均有抑制作用 [ 4 ～ 6] , 常用于急性
胃炎 , 呼吸道感染等病症。本实验采用乙醇超声提取 , 建立
HPLC法同时测定了连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量 ,该法简单
快速 , 灵敏准确 , 重现性好 , 为控制连翘的内在质量提供了科学
依据。
1　仪器 、材料与试剂
1. 1　仪器 W ate rs515双泵型高效液相色谱仪 , 2996光电二极管
矩阵检测器 ,色谱柱 Nova-Pak C18柱(3. 9 mm ×300 mm, 4 μm),
7725 I进样阀 , Empow er中文色谱工作站 , RO-MB-10D高纯水机
(杭州永洁达膜分离设备厂), FC204分析天平(上海天平分析仪
器厂), FW 100型高速万能粉碎机 (天津市泰斯特仪器有限公
司), 202-26A型数显电热恒温干燥箱 (上海阳光实验仪器有限公
司), KS-1500超声提取仪器 (宁波科盛仪器厂)。
1. 2　材料与试剂 甲醇为色谱纯 (上海陆忠试剂厂), 水为高纯
水 , 乙醇为分析纯 (95%, 江西同盟试剂化工厂 ), 乌索酸和齐墩
果酸对照品 (中国药品生物制品检定所提供 , 批号 110742-
200314、110792-200304, 供含量测定用)。连翘(市售 , 购自宜春
市开心大药房),经宜春学院陈武研究员鉴定为木犀科植物连翘
Forsy thia Suspense(Thunb. )V ah l的干燥果实。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱为 Nova-PakC18 (3. 9 mm ×300 mm, 4μm);流动相为甲醇-水(88∶12, V /V);流速为 0. 8 m l /m in;检测
波长为 210 nm;柱温为 25°C, 进样量 15μl。乌索酸和齐墩果酸
理论塔板数均大于 9 000, 对照品混合溶液及连翘样品溶液的
HPLC色谱图见图 1。
2. 2　溶液的制备
2. 2. 1　混合对照品溶液的配制 精密称取干燥至恒重的乌索酸
1872
时珍国医国药 2006年第 17卷第 10期 LISH IZHEN MEDIC INE AND MATERIA M EDICA RESEARCH 2006 VOL. 17NO. 10　
和齐墩果酸对照品 22. 8 mg和 7. 8 m g, 混合至 10 m l容量瓶中 ,
溶解定容。精密量取 1 m l置于 10 m l容量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 , 摇匀 ,作为乌索酸 、齐墩果酸对照品混合溶液。
图 1　对照品和连翘样品的 HPLC色谱图
2. 2. 2　样品溶液的制备 取连翘样品于 80℃恒温干燥 10 h, 粉
碎 , 精密称取约 4 g, 加入 95%乙醇溶液 40 m l,超声提取 120 m in,
冷却至室温 , 滤过 , 滤渣用乙醇超声洗涤 2次 , 合并过滤液于 50
m l容量瓶 ,乙醇定容 , 摇匀 , 经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤 , 得样品
溶液。
2. 3　线性关系实验 精密吸取对照品混合溶液 4, 8, 12, 16, 20
μl,按 2. 1色谱条件进样并测定峰面积。以峰面积对进样量进行
线性回归 , 乌索酸和齐墩果酸的回归方程分别为:YUA =5. 78 ×
105X +1. 35×103 , r=0. 999 8, YOLA =6. 32×105X - 5. 90 ×103 , r=0. 999 6。表明乌索酸进样量在 0. 912 ～ 4. 560 μg, 齐墩果酸进
样量在 0. 312 ～ 1. 560 μg时 ,线性关系良好。
2. 4　色谱进样精密度实验 精密吸取乌索酸和齐墩果酸对照品
混合溶液 15 μl进样 , 重复 5次 ,测得乌索酸峰面积相对标准偏
差(RSD)为 0. 6 %(n =5), 齐墩果酸的峰面积相对标准偏差为
0. 9 %(n =5), 表明仪器精密度良好。
2. 5　方法重现性实验 精密称取连翘样品 5份 , 按 2. 2. 2项制备
样品溶液 , 在 2. 1色谱条件下 ,精密吸取 15μl进样分析 , 测乌索
酸峰面积的相对标准偏差为 1. 1 %(n =5), 齐墩果酸峰面积的
相对标准偏差为 1. 9 %(n =5),方法重现性好。
2. 6　加样回收率实验 精密称取已知乌索酸和齐墩果酸含量并
干燥至恒重的药材 5份 , 分别加入适量的乌索酸和齐墩果酸对照
品 , 按 2. 2. 2项制备样品溶液 , 进样分析 ,乌索酸和齐墩果酸平均
回收率结果见表 1 ～ 2。
表 1　乌索酸加样回收率实验结果
样品量
m /g
样品中含
量 m /mg
对照品加入
量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1. 1232 4. 35 3. 12 7. 42 98. 3
1. 1125 4. 21 3. 12 7. 29 98. 7
1. 1109 4. 20 3. 12 7. 22 96. 9 98. 2 1. 1
1. 1212 4. 24 3. 12 7. 35 99. 7
1. 1153 4. 22 3. 12 7. 26 97. 4
　　n =5
2. 7　样品中乌索酸和齐墩果酸含量测定结果 精密称取连翘样
品约 4 g,制备样品溶液。精密吸取样品溶液 10 μl, 分别进样 ,平
行实验 5次 , 测定乌索酸和齐墩果酸峰面积 ,外标法计算含量。
结果见表 3。
表 2　齐墩果酸加样回收率实验结果
样品量
m /g
样品中含
量 m /mg
对照品加入
量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1. 1232 3. 68 2. 64 6. 22 96. 2
1. 1125 3. 65 2. 64 6. 23 97. 9
1. 1109 3. 64 2. 64 6. 17 95. 8 97. 8 1. 4
1. 1212 3. 68 2. 64 6. 29 99. 0
1. 1153 3. 66 2. 64 6. 26 98. 5
　　n =5
表 3　样品中乌索酸和齐墩果酸的测定结果 %
编号 采收期 乌索酸含量 RSD
齐墩果酸
含量 RSD
1 青翘 0. 387 0. 9 0. 328 1. 8
2 青翘 0. 378 1. 1 0. 322 1. 9
3 熟 翘 0. 420 1. 0 0. 348 2. 0
4 老 翘 0. 549 1. 2 0. 404 2. 2
　　n =5
3　讨论
3. 1　样品提取方法的选择 原药中乌索酸和齐墩果酸的提取多
采用乙醇回流法 、索氏提取法 , 提取时间长 ,原料和试剂的使用量
大 , 成本高 ,且溶剂易挥发污染环境。本实验尝试采用超声提取
法 , 实验结果表明该法样品处理过程简单 , 提取率高 ,与传统的样
品预处理方法相比 ,具有快速 、环保 、高效等优点。
3. 2　检测波长的确定 取乌索酸和齐墩果酸对照品混合溶液进
样 , 在 190 ～ 500 nm 波长范围进行光谱扫描 , 其最大吸收波长均
为 202. 2 nm (图 2),但由于流动相在短波长处有末端吸收 ,为了
减少干扰 ,提高信噪比 , 提取不同波长的色谱图进行比较 , 选择
210 nm为检测波长信噪比高 ,峰形好 , 干扰小。
图 2　乌索酸和齐墩果酸对照品的紫外吸收光谱
3. 3　不同采收期连翘中 UA和 OLA的含量 对不同采收期连翘
中乌索酸和齐墩果酸的含量检测分析表明 ,老翘中两组分的含量
明显高于青翘和熟翘 ,采收期对中药连翘中乌索酸和齐墩果酸的
含量影响较大。连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量均较高 ,是连翘
的主要活性成分 ,为保证药材的质量 ,应在连翘完全成熟后采收
老翘为最佳。
3. 4　含量测定方法的建立 采用 HPLC法 , 以外标法同时测定
连翘中乌索酸和齐墩果酸的含量 , 方法准确 , 快速 , 灵敏 , 重现性
好 , 可用于连翘的质量评价和控制。
参考文献:
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1873
LISH IZH EN MEDIC INE AND MATERIA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 10 时珍国医国药 2006年第 17卷第 10期