全 文 ：收稿日期:2013-09-08; 修订日期:2014-03-31
基金项目:贵州省中药现代化科技产业研究开发专项( 黔科合社字
［2009］5024 号) ;
贵州省科技厅基金项目( 黔科合 J字［2011］2298 号) ;
贵州省贵阳市科技局科研项目( 筑科合( 2012303) 8 号)
作者简介:罗 君( 1980-) ，男( 汉族) ，贵州遵义人，贵阳中医学院第一附
属医院主管中药师，硕士学位，主要从事中药、民族药质量控制与新药研
究工作．
* 通讯作者简介:骆 衡( 1985-) ，男( 汉族) ，贵州遵义人，贵州省中科院
天然产物化学重点实验室副研究员，博士学位，主要从事肿瘤药理学研究
工作．
贵州南板蓝根提取成分对红细胞凝集的影响
罗 君1，王惟惟2，赵琳珺3，张丽艳4，黄丽荣2，5，骆 衡2* ，杨 丹4
(1．贵阳中医学院第一附属医院，贵阳 贵州 550002;
2．贵州省中科院天然产物化学重点实验室，贵阳 贵州 550002;
3．贵阳新天卫生服务中心，贵阳 贵州 550008; 4．贵阳中医学院，贵阳 贵州 550002;
5． 贵州大学精化中心，贵阳 贵州 550025)
摘要:目的 探讨南板蓝根促凝血效果，为提升南板蓝根的质量标准提供相关的科学依据。方法 运用直接观察法和显微
观察法研究样品提取液在不同的反应温度、时间和稀释倍数下对兔血的促凝集效果。结果 南板蓝根提取液的促凝集效
果具有显著的剂量依赖性，且与反应温度相关;不同采收期、不同药用部位及不同初加工的南板蓝根提取液的促血凝效
果具有显著差异。结论 南板蓝根红细胞凝集反应直接观察和显微观察结果一致，可以尝试运用生物效价的红细胞凝集
活性来表征其抗病毒效果，以反映其质量。
关键词:南板蓝根; 红细胞; 凝集作用; 质量; 贵州
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2014． 07． 028
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标识码:A 文章编号:1008-0805( 2014) 07-1607-02
南板蓝根来源于爵床科植物马蓝 Baphicacanthus cusia
(Nees)Bremek．的干燥根茎及根。性寒、味苦，归心、胃经，具有清
热解毒、凉血消斑的功效［1 ～ 3］。随着南板蓝根抗病毒有效成分腺
苷等化合物的相继分离纯化，使得南板蓝根成为抗病毒的焦点药
物之一［4，5］。目前，《中国药典》仅采用性状和理化鉴别对南板蓝
根进行质量控制，其质量标准有待进一步提升。在适宜的电解质
等条件下，测定样品的红细胞凝集活性效价，可以反映其抑制流
感病毒活性的强弱［3］。因此，能否运用生物效价的红细胞凝集
活性来表征南板蓝根抗病毒效果，以反映其质量成了亟待解决的
共性问题。为此，我们对南板蓝根红细胞凝集活性的条件进行了
优选，并对贵州不同采收期、初加工方法和药用部位南板蓝根进
行了兔血红细胞凝集反应验证，结合腺苷含量分析了其差异，以
期为进一步研究南板蓝根的药效成分及提升其质量标准提供一
定依据。
1 材料与方法
1． 1 仪器与材料 倒置荧光显微镜(尼康)，离心机(贝克曼)，电
子天平(梅特勒 －托利多公司)，精密级数字式酸度计(上海虹益
仪器仪表有限公司)，超声波清洗器(天津恒奥科技公司);水为
Milli － Q超纯水系统制成的超纯水，试剂均为分析纯。家兔购于
贵阳医学院实验动物中心，许可证号 SCXK(黔)2012 － 001。南
板蓝根药材均自采集，经贵阳中医学院魏升华副教授鉴定为爵床
科植物马蓝 Baphicacanthus cusia(Nees)Bremek．的干燥根茎及根
(见表 1)。
表 1 样品及编号
样品
编号
采收期
样品
编号
初加工
方法
样品
编号
药用
部位
1 6 月 6 阴干 8 根
2 7 月 2 烘干 9 茎
3 8 月 7 晒干 10 叶
4 9 月
5 10 月
不同采收期、不同初加工方法样品均采自贞丰县小屯乡，不同药用部位样品采
自台江县台拱镇翁茂村
1． 2 试剂的配制 磷酸盐缓冲液(PBS):取 Na2HPO4 1． 10 g、
NaH2PO4 0． 32 g、NaCl 8． 50g，加水使溶解成 1 000 ml，lmol·L
－1
NaOH溶液或 1 mol·L －1 HCl溶液调节 pH 至 7． 2，分装灭菌，放
冷，4℃保存备用。阿氏液(Alsever＇s 液):取枸橼酸 0． 5g、枸橼酸
钠 8． 0g、葡萄糖 20． 5g、NaCl 4． 2g，加水溶解并稀释至 1 000 ml
(pH6． 2 左右)，分装灭菌，放冷，4℃保存备用。其余试剂均为分
析纯。
1． 3 供试样品的制备 取南板蓝根粉末(过 80 目筛)0． 5 g，精确
称定，置 25 ml容量瓶中，加入 30%甲醇 20 ml，超声提取 30min，
取出，冷却，用 30%甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤
液 15ml，置蒸发皿中，挥去溶剂，用 30%甲醇定容至 2 ml 容量瓶
中［6］。以 6 000 r /min离心 5min，取上清液过滤除菌便获得所需
的南板蓝根提取液样品。
1． 4 红细胞混悬液的制备 取家兔血各数毫升，与等体积的阿氏
液混合，用适量 PBS洗涤 3 次，末次以 6 000 r /min离心 10min，取
红细胞适量，用 PBS制成 l%红细胞混悬液，4℃保存备用。
1． 5 南板蓝根提取液对红细胞凝集的影响 在“V”形、底角呈 90
度的 96 孔微量板上，每孔加入供试液 50μl，每排最后 1 孔加 PBS
50μl作为阴性对照。再向每孔加 1%兔红细胞混悬液 50μl，轻拍
微量板 30 秒混匀，25 ～ 37℃静置 1． 5h观测结果。
1． 6 统计 本测定法以能够引起红细胞出现阳性结果所对应的
最高稀释倍数为凝集反应的判定终点，属于定量统计分析范畴，
具体采用复孔对照测定结果的差值及同批供试液多次测定的差
值对实验误差进行评判。如同批供试液前后排结果相差在 1 个
稀释度以内，结果判定有效;如同批供试液前后排结果相差在 1
个以上稀释度时，应重试。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7 时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期
2 结果
2． 1 不同稀释倍数对南板蓝根提取液促红细胞凝集的影响 对
红细胞混悬液制备过程中阿氏液与 0． 9%氯化钠溶液的使用进
行了对比研究，也可作为红细胞混悬液制备方法的耐受性考察。
南板蓝根药材为供试品，PBS 为本底进行试验，在开放条件下操
作。阿氏液和 0． 9%氯化钠溶液制备红细胞混悬液均得相同的
凝集反应结果，说明所建方法对红细胞混悬液制备方法耐受性良
好。将供试样品稀释成 0 倍、2 倍、4 倍，检测其促红细胞凝集的
差异。结果未稀释的南板蓝根提取液的促凝集效果显著好于稀
释的，表明南板蓝根提取液的促凝集效果具有显著的剂量依赖
性。倒置荧光显微镜下观察结果与之一致。
2． 2 不同温度对南板蓝根提取液促红细胞凝集的影响 取供试
液，于 96 孔微量板上检测其对兔红细胞凝集的影响，分别作 3 次
重复，并设置 1 次空白对照，分别于 4、25、37℃环境温度下观测
2h后的促红细胞凝集的效果。由结果可知，25℃和 37℃反应时，
供试样品的促凝集反应效果要整体强于 4℃。而 25℃与 37℃之
间的促凝集反应效果的差异不明显。进一步用倒置荧光显微镜
(400 ×)对其凝集反应进行观察，也得到一致结果。
2． 3 不同反应时间对南板蓝根提取液促红细胞凝集的影响 取
供试液，分成 4 份加于 96 孔微量板上，分别对其凝集反应观测 0．
5h、1h、1． 5h、2h，以确定最佳观测时间。结果凝集反应在 1． 5h
时后，红细胞的凝集程度达到了稳定，且随时间增加，无明显变
化，说明供试液与红细胞发生凝集反应在 1． 5h 后达到稳定。倒
置荧光显微镜进行观察，也得到一致结果。
2． 4 不同采收期南板蓝根提取液促红细胞凝集的差异 分别从
贞丰县小屯乡采集 6 ～ 10 月的南板蓝根，检测其提取液的促红细
胞凝集效果(图 1)，并分析其差异，结果表明其 6 ～ 8 月采集的样
品的提取液的促血凝效果显著好于其它 2 个月采集的样本。倒
置荧光显微镜观察结果与之一致(图 1)。
图 1 不同采收期提取液促红细胞凝集的差异及显微观察(400 ×)
2． 5 不同初加工方法南板蓝根提取液促红细胞凝集的差异 对
贞丰县小屯乡采集的 7 月南板蓝根样品进行分别进行的样品进
行阴干、烘干和晒干处理，检测其提取液的促血凝效果(图 2)。
结果表明，在三个反应温度时，阴干处理的促血凝效果显著优于
其它两种处理方法。从显微观察的结果也证明这个结果(图 2)。
2． 6 南板蓝根不同药用部位提取液促红细胞凝集的差异 分别
采集贞丰县小屯乡 7 月南板蓝根的不同药用部位进行提取液的
促血凝效果(图 3)，结果表明南板蓝根的根和叶的促血凝效果显
著好于其茎的提取液。
a．阴干 b．烘干 c．晒干
图 2 不同的初加工方法提取液促红细胞
凝集的差异及显微观察(400 ×)
a．根 b．叶 c．茎
图 3 不同药用部位提取液促红细胞
凝集的差异及及显微观察(400 ×)
3 讨论
实验中运用直接观察法和显微观察法对南板蓝根提取液在
不同的反应温度、时间和稀释倍数下对兔血的促凝集效果。结果
表明南板蓝根提取液的促凝集效果具有显著的剂量依赖性，且与
反应温度相关。
南板蓝根中的核苷类成分通过参与并干扰细菌和病毒的基
因表达过程，实验中尚对腺苷含量进行了测定［6］，其结果与红细
胞凝集活性实验以及倒置荧光显微镜观察结果一致，因此，南板
蓝根腺苷与生物效价的红细胞凝集活性存在一定相关性，运用南
板蓝根红细胞凝集活性来表征其抗病毒疗效以反映其质量尚需
进一步完善。
南板蓝根不同要用部位红细胞凝集活性试验结果显示，根和
叶的促血凝效果显著好于其茎，而前者无明显差异，就其资源保
护和药用而言，能否用叶代替根药用，需结合药理药效及临床做
进一步研究。
南板蓝根样品提取液体外促血凝效果与其反应的温度和时
间有一定的关联性，这也是在南板蓝根药用时必须考虑的因素。
参考文献:
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时珍国医国药 2014 年第 25 卷第 7 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2014 VOL． 25 NO． 7