全 文 ：RP-HPLC-ELSD法同时测定白英中蜀羊泉次碱 、
薯蓣皂苷元和氢化勒帕茄次碱
杨红英1 ,孙长山1 ,马　龄2 ,顾广才3 ,齐　伟1 ,孙立新1 ＊①
(1.沈阳药科大学 药学院 , 辽宁　沈阳　110016;2.沈阳市第七人民医院 , 辽宁 沈阳　110003;
3.江苏飞马药业有限公司 , 江苏 南通　226009)
摘　要:目的　建立 RP-H PLC-ELSD法同时测定白英中蜀羊泉次碱(so ladulcidine)、薯蓣皂苷元(diosgenin)和氢
化勒帕茄次碱(5α, 6-dihydroleptinidine)。方法　色谱柱为 Elite C18(200 mm ×4.6 mm , 5 μm), 流动相为乙腈-四
氢呋喃-0.06%三乙胺水溶液(93∶4∶3), 漂移管温度 80 ℃,载气流速 1.9 L/ min。结果　蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷
元和氢化勒帕茄次碱分别在 20 ～ 100、80 ～ 400 、10 ～ 50 μg/ mL 线性关系良好。 3 种成分的平均回收率分别为
96.4%、102.5%、99.3%, RSD分别为 3.0%、3.4%、3.0%。结论　该方法适用于白英药材的质量控制。
关键词:白英;RP-HPLC-ELSD;蜀羊泉次碱;薯蓣皂苷元;氢化勒帕茄次碱
中图分类号:R282.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2010)03-0481-03
　　白英 Solanum ly ratum T hunb.为茄属植物 ,
临床用于多种癌症的治疗[ 1] 。主要成分为甾体皂苷
类 、甾体生物碱及其苷类等 。研究报道薯蓣皂苷元
对人宫颈癌 HeLa细胞有抑制作用[ 2] 。本实验首次
从白英中分得氢化勒帕茄次碱[ 3 , 4] ,并发现其对多
种肿瘤细胞有抑制作用。白英质量控制方法文献报
道有 GC-MS 、HPLC 、UV 法等[ 5 ～ 9] 。甾体皂苷和甾
体生物碱类化合物无紫外吸收或紫外响应弱 ,采用
RP-HPLC-ELSD法测定白英中蜀羊泉次碱 、薯蓣
皂苷元和氢化勒帕茄次碱 ,为白英的质量控制提供
一种重复性较好 、准确度较高的方法。
1　仪器与试药
Eli te高效液相色谱仪(大连依利特分析仪器有
限公司),A ll-tech 2000蒸发光散射检测器(美国奥
泰公司), N3000色谱工作站 , TG332A 型十万分之
一分析天平(湘仪天平仪器厂), 88B 型高速粉碎机
(浙江省瑞安市春海药材器械厂)。
蜀羊泉次碱 ,氢化勒帕茄次碱对照品为本实验
室自行制得(经 T LC 及 HPLC 测定质量分数达
99%以上)。薯蓣皂苷元对照 品(批号 1539-
200001)由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为
色谱纯 ,水为纯净水 ,其他试剂均为分析纯。
不同产地白英药材由沈阳药科大学孙启时教授
鉴定为茄科植物白英 Solanum lyratum Thunb.。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适用性实验:色谱柱为 Eli te
C18(200 mm×4.6 mm , 5 μm),柱温 25 ℃,流动相
为乙腈-四氢呋喃-0.06%三乙胺水溶液(93∶4∶
3),体积流量 1 mL/min ,漂移管温度 80 ℃,雾化气
流速 1.9 L/min ,不分流模式。
蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷元和氢化勒帕茄次碱在
此色谱条件下的保留时间分别是 12.9 、16.0 、20.6
min ,且其与相邻杂质峰的分离度大于 1.5 ,理论塔
板数均大于 5 000 ,色谱图见图 1。
1-蜀羊泉次碱　2-薯蓣皂苷元　3-氢化勒帕茄次碱
1-s oladulcidine　2-diosgenin　3-5α, 6-dihyd rolept inidine
图 1　对照品(A)和样品(B)色谱图
Fig.1　Chromatograms of reference substance(A)
and sample(B)
2.2　对照品溶液的配制:精密称定干燥至恒定质量
的蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷元 、氢化勒帕茄次碱对照品
·481·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期:2009-08-12　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　基金项目:辽宁省科技厅资助项目(2007226011);沈阳市科技局攻关项目(1071164-9-00)作者简介:杨红英(1984—),女 ,山东省沂水人 ,在读硕士 ,主要从事中药质量标准及药动学研究。＊通讯作者　孙立新　T el:(024)24986365　E-mai l:slx 04@163.com
5.0 、20.0 、2.5 mg ,置 50 mL 量瓶中 ,加甲醇溶解并
稀释至刻度 ,摇匀 ,得对照品储备液(100 μg/mL 蜀
羊泉次碱 ,400 μg/mL 薯蓣皂苷元 , 50 μg/mL 氢化
勒帕茄次碱)。
2.3　供试品溶液的制备
2.3.1　白英中总苷的提取[ 10] :干燥白英药材粉碎
过筛 ,取药材粉末约 0.8 g ,精密称定 ,置 100 mL 圆
底烧瓶中 ,加入 90%乙醇 25 mL。水浴热回流提取
3次 ,每次 1 h ,滤过 ,合并提取液 。旋转蒸发至干后
20 mL 水分散 ,以石油醚等量萃取 3次 ,弃去石油醚
层。再以水饱和正丁醇等量萃取 3次 ,合并萃取液 ,
旋转蒸发至干 ,得总苷粗品 ,备用。
2.3.2　白英总苷的水解[ 11] :总苷粗品以 2 mol/ L
HCl溶液 5 mL 混悬 , 100 ℃水浴水解 3 h ,再用氯
仿等量回流萃取 3 次 ,每次 20 min ,蒸干氯仿萃取
液 ,残渣定量转移置 10 mL 量瓶中 ,用甲醇稀释至
刻度 ,0.45μm 微孔滤膜滤过 ,即得供试品溶液 。
2.4　线性关系考察:分别精密吸取对照品储备液
1 、2 、3 、4 、5 mL 置 5 mL 量瓶中 ,加甲醇稀释至刻
度 ,得 3种成分的系列对照品溶液 。吸取各系列对
照品溶液 20 μL ,在上述色谱条件下进入液相色谱
仪分析 ,测定峰面积 ,以对照品峰面积(Y)对浓度
(X)进行线性回归分析 ,得蜀羊泉次碱回归方程为
Y =3.420×103 X -4.186×104(r =0.999 4),线性
范围 20 ～ 100 μg/mL;薯蓣皂苷元回归方程为Y =
1.378×104 X -7.500×105(r =0.999 3),线性范围
80 ～ 400 μg/mL;氢化勒帕茄次碱回归方程为 Y =
3.500×103 X -1.680×104(r =0.999 3),线性范围
10 ～ 50μg/mL。
2.5　精密度试验:取对照品溶液(蜀羊泉次碱 、薯蓣
皂苷元 、氢化勒帕茄次碱的质量浓度分别为 60 、
240 、30μg/mL)进样 20μL ,连续进样 6次 ,测定峰
面积 。结果蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷元 、氢化勒帕茄次
碱的 RSD分别为 1.9%、1.9%、1.7%,结果表明精
密度良好 。
2.6　重现性试验:取白英干燥药材粉末(No.1 ,产
地西安),按“供试品溶液制备”项下操作平行制备 6
份供试溶液 ,进样 20 μL ,测定峰面积。标准曲线法
计算质量分数 ,结果蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷元 、氢化
勒帕茄次碱的 RSD分别为 1.8%、2.0%、1.9%,结
果表明重现性良好。
2.7　稳定性试验:取供试品溶液 ,避光放置 ,按上述色
谱条件 ,分别于 0 、2 、4、8、12 h进样分析 ,蜀羊泉次碱、
薯蓣皂苷元 、氢化勒帕茄次碱的 RSD分别为 1.8%、
1.9%、1.9%,结果表明3种苷元均在 12 h内稳定。
2.8　回收率试验:采用加样回收实验法 ,取已测定
的白英(No.1 ,产地西安)干燥药材粉末约 0.4 g(蜀
羊泉次碱 、薯蓣皂苷元 、氢化勒帕茄次碱的量分别为
0.887 0 、2.313 、0.416 0 mg/g)共 9份 ,精密称定 ,
分别加入相当于原药材中各成分量 50%、100%、
150%的对照品溶液 ,每个质量浓度 3份。按“供试
品溶液的制备”项下方法操作 ,按上述色谱条件测
定 ,计算加样回收率 ,得蜀羊泉次碱平均回收率为
96.4%,RSD 为 3.0%;薯蓣皂苷元平均回收率为
102.5%, RSD 为 3.4%;氢化勒帕茄次碱平均回收
率为 99.3%, RSD为 3.0%(n=9)。结果表明回收
率符合要求 ,该方法准确度良好 。
2.9　样品测定:取 10个产地的白英干燥药材粉末 ,
按“供试品溶液的制备”项下操作 ,在上述色谱条件
下进样分析 ,计算质量分数 ,结果见表 1 。
表 1　各产地白英中蜀羊泉次碱 、薯蓣皂苷元 、
氢化勒帕茄次碱测定结果(n=3)
Table 1　Determination of soladulcidine, diosgenin , and 5α,
6-dihydroleptinidine in S. lyratum(n=3)
编号 产地 质量分数/(mg· g -1)蜀羊泉次碱 薯蓣皂苷元 氢化勒帕茄次碱
1 西安　 0.77 1.99 0.26
2 柳州　 0.53 2.02 0.45
3 武汉　 0.92 2.84 0.33
4 广西　 0.97 2.43 0.58
5 亳州　 1.15 2.89 0.61
6 内蒙古 0.65 1.15 0.17
7 江西　 0.47 1.36 0.40
8 上海　 1.10 1.27 0.67
9 三明　 1.27 2.27 0.67
10 河南　 0.51 2.12 0.21
3　讨论
不经水解测定苷元量时 ,氢化勒帕茄次碱量较
少 ,无法准确定量 ,故采用水解的方法测定。采用
1 、2 、3 mol/L 的盐酸进行水解 ,以 2 mol/L 盐酸水
解各成分量高 。因此采用 2 mo l/L 盐酸进行水解。
水解后以氯仿回流萃取 ,各苷元量较高并且杂质较
少 ,回流萃取不易乳化 ,保证了该方法的准确度 。
在甲醇-水 ,乙腈-水 ,乙腈-四氢呋喃-水等系统下
对色谱条件进行优化。发现在乙腈-四氢呋喃-水系
统条件时 ,各峰与相邻杂质峰完全分离 ,四氢呋喃使
出峰时间变短且峰形更加对称。试用了醋酸 、甲酸 、
三乙胺等改性剂 ,三乙胺可很好地减少峰拖尾 ,故最
终选用乙腈-四氢呋喃-0.06%三乙胺水溶液系统。
蒸发光散射检测器对没有紫外吸收及紫外吸收
弱的皂苷类 、萜类及甾体类化合物来说是一种可靠
·482· 中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
的检测器 。它克服了示差检测器(RID)灵敏度低的
问题 ,且相对质谱(MS)检测器来说运行成本更低 ,
是中药分离分析 、质量控制的重要方法之一。
由实验结果发现白英中 3种苷元的量由大到小
依次为薯蓣皂苷元 、蜀羊泉次碱 、氢化勒帕茄次碱 。
不同产地的白英药材中 3种苷元量的差异较大。其
中安徽亳州和福建三明的白英中 3 种苷元量均较
高 ,但内蒙古的白英中 3种苷元量均相对较低 。这
可能与气候差异有关 ,南部地区年均温度较高生长
期长而使有效成分量增加 。
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RP-HPLC同时测定不同产地独一味药材中 4种环烯醚萜苷
樊鹏程1 , 2 ,李茂星1 , 2 ,贾正平1 , 2 ＊① ,张汝学1 , 2 ,邱建国1 , 2 ,张泉龙1 , 2
(1.兰州军区兰州总医院 药剂科 ,甘肃 兰州　730050;2.国家中医药管理局 临床药学重点学科 , 甘肃 兰州　730050)
摘　要:目的　建立 RP-H PLC 同时测定不同产地独一味药材中 4 种环烯醚萜苷单体量的方法。方法　采用 Sym-
met ry C18色谱柱(150 mm×4.6 mm , 5 μm), 流动相:0 ～ 11 min 乙腈-水(11∶89), 11 ～ 35 min 乙腈-水(11∶89 ～
15∶85)。体积流量:1.0 mL/ min ,检测波长:235 nm。结果　山栀苷甲酯在 5.0 ～ 100 μg/ mL 线性关系良好 ,加样
回收率为 103.1%, RSD为 2.0%。螃蟹甲苷 Ⅱ(phloyo side Ⅱ)在 1.0 ～ 50 μg/ mL 线性关系良好 , 加样回收率为
97.2%, RSD 为1.3%。番木鳖苷甲酯在 1.0 ～ 50 μg/m L线性关系良好 ,加样回收率为 101.3%, RSD为 1.5%。 8-
O-乙酰山栀苷甲酯在 5.0～ 100 μg/ mL 线性关系良好 ,加样回收率为 102.8%, RSD为 1.2%。 10 批不同产地独一
味药材中山栀苷甲酯量为 0.3%～ 1.41%, 螃蟹甲苷Ⅱ量为 0.0%～ 0.45%, 番木鳖苷甲酯量为 0.02%～ 2.3%, 8-
O-乙酰山栀子苷甲酯量为 1.05%～ 2.95%。结论　实验建立的环烯醚萜苷测定方法准确可靠 , 适于独一味药材中
环烯醚萜苷类量的测定。不同产地独一味药材中环烯醚萜苷量存在较大差异。
关键词:RP-H PLC;独一味;环烯醚萜苷
中图分类号:R282.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:0253-2670(2010)03-0483-03
　　独一味来源于唇形科独一味属植物独一味
Lamiophlomis rotata (Benth.)Kudo 的全草或根
及根茎 ,主产于甘肃 、西藏 、青海 、云南 、四川等省区 ,
为传统藏药 ,藏语称“大巴” 、“打巴布”“尕果拉”等 。
其根及根茎或全草入药 ,药材表面枯黄色或黄褐色 ,
质坚硬 、干枯 、气腥臭 ,是我国藏 、蒙 、纳西等民族民
间常用药之一 ,具有止血 、镇痛消肿 、活血化瘀 、补
髓 、行气 、续筋骨等功效[ 1 ～ 3] 。2005 年版《中国药
典》中该药材仅对其中的木樨草素作定量测定[ 4] ,未
对环烯醚萜苷类成分进行测定。近年来研究越来越
集中于其环烯醚萜苷类成分 ,并有报道其主要活性
成分为环烯醚萜苷类成分[ 5 , 6] ,故单纯控制木樨草
素的量不能有效控制独一味药材内在质量 ,以致影
响生产相关产品的质量及药材临床应用的安全有
效 。有报道应用分光光度法测定独一味药材中总环
烯醚萜苷的量[ 7] ,钱大玮等[ 8] 用 HPLC 法测定了独
·483·中草药　Chinese Traditional and Herbal Drugs　第 41 卷第 3 期 2010 年 3 月
①收稿日期:2009-06-08　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　基金项目:兰州军区医药卫生科研基金资助项目(LXH-200409);甘肃省科技攻关项目(2GS054-A43-014-14)作者简介:樊鹏程(1980—),男 ,主管药师 ,硕士 ,主要从事中药分析研究。 E-mai l:fpch2001@yeah.n et＊通讯作者　贾正平　T el:(0931)8994652　E-mai l:jiazp166@sina.com