全 文 ：收稿日期：2014-04-03
基金项目：福建省教育厅资助课题（JA13154），福建中医药大学校管课题（X2013027）
作者简介：林婧（1989—），女，助理实验师，主要从事中药提取及活性成分研究。
通讯作者：范世明（1964—），男，高级实验师。 E-mail：r3570379@163.com
三叶青为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤
（Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg） 的干燥块
根，是我国的特有植物，是福建民间的常用药。 其
性凉，味辛、苦，无毒，具有清热解毒、活血止痛、祛
风化痰、消肿等功效，常用于高热惊厥，小儿感冒
发热、喉痒肿痛、咳嗽、肺炎、肝炎、肠炎、痢疾等疾
病 ［1］。 现代药理研究表明，三叶青提取物具有较好
的抗肿瘤、抗炎、镇痛及解热作用等 ［2-4］。 三叶青化
学成分研究主要集中在黄酮类 ［5］。据文献［6-7］报道，
三叶青总黄酮对肿瘤细胞具有诱导凋亡的作用。
因此， 三叶青中黄酮类成分的含量测定对开发利
用三叶青具有重要的意义。我们以芦丁为对照品，
对不同产地三叶青甲醇提取物中的总黄酮含量进
行测定，考察不同产地三叶青总黄酮的差异性，并
观察其对肝癌细胞（HepG2）增殖的抑制作用。
1 材料与仪器
1.1 材料 三叶青采自或购自台州、泰宁、福安、
重庆、柘荣，经福建中医药大学药学院黄泽豪副教
授鉴定为葡萄科崖爬藤属植物三叶崖爬藤的块
根，又叫金线吊葫芦。 芦丁对照品（中国药品生物
制品检定所，批号：110774-201113）；新生牛血清、
胰酶、磷酸盐缓冲液 （美国 HycLone 公司）；DMEM
高糖（美国 Gibco 公司）；四甲基偶氮唑盐（MTT）、
二甲基亚砜（DMSO）、甲醇（德国 Merck 公司，色谱
纯），水为重蒸水，其它试剂为分析纯。
1.2 细胞株 HepG2（美国 APCC 公司）。
1.3 仪器 UV9100 紫外可见分光光度计 （北京
瑞利分析仪器公司）；ELX800 酶标仪 （美国 Bio－
Tek 公司）；HF212UV CO2 培养箱 （香港力康仪器
设备有限公司）；SW-CJ-1FD 超净工作台（苏州安
泰仪器设备有限公司）；TDL-50B 低速离心机（湖
南湘仪实验仪器开发有限公司 ）；RE-520A 旋转
蒸发器 （上海亚荣生化仪器厂）；TS-100F 倒置显
微镜（日本 Nikon 公司）；DV215CD 型十万分之一
电子天平（美国奥豪斯公司）。
2 方 法
2.1 不同产地三叶青总黄酮含量测定 参考文
献［8］。
2.1.1 供试品溶液的制备 取供试品粉碎，过 40
目筛，精密称取 2 g，置具塞锥形瓶中，加入甲醇
50 mL ，超声提取（250W，40kHz）30 min，放冷，用
甲醇补足减少的重量，摇匀，滤过，取续滤液即得。
平行操作 3 份。
2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取芦丁对照品
0.224 mg， 加甲醇制成每 l mL 含 0.224 mg 的溶
液，摇匀，即得。
2.1.3 标准曲线的制备 吸取对照品溶液 l、2、3、
4、5、6 mL ， 置 25 mL 具塞比色管中， 加甲醇至 6
mL，加 5％亚硝酸钠溶液 l mL，摇匀，放置 6 min，再
加 10％硝酸铝溶液 l 滴，摇匀，放置 6 min，加氢氧
化钠试液 10 mL， 加甲醇至刻度， 摇匀， 放置 15
min， 用紫外-可见分光光度于 500 nm 处测定吸光
度值。 以吸光度值（A）为纵坐标，芦丁对照品的浓
度（C）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程：
A＝3.9103C＋0.041 r＝0.9995
线性范围为 8.96～53.76 μg ／mL，结果在线性
范围内呈良好的线性关系。
2.1.4 样品含量测定 线性取不同产地的三叶青
样品，按 2.1.1 项制备供试品溶液，测定，计算样品
中总黄酮的含量。
不同产地三叶青总黄酮含量及对肝癌细胞增殖的抑制率比较
林 婧 1，黄泽豪 2，许 文 2，蔡巧燕 1，陈 琳 2，纪明妹 2，黄学城 2，范世明 2
（1.福建中医药大学中西医结合研究院，福建 福州 350122；2.福建中医药大学药学院，福建 福州 350122）
关键词：三叶青；总黄酮；HepG2；抗肿瘤作用；细胞毒性
中图分类号：R285.5 文献标志码：A 文章编号：1004-5627（2014）05-0040-02
福建中医药大学学报 2014 年 10 月 第 24 卷 第 5期
Journal of Fujian University of TCM October 2014，24 （5）40
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002966
2.2 观察不同产地三叶青甲醇提取物对 HepG2
细胞的增殖抑制作用 采用 MTT 法测定不同产
地三叶青甲醇提取物对肿瘤细胞的增殖抑制活
性，HepG2 细胞用含 10%新生牛血清、1% 100 g ／
mL 青霉素和链霉素的 DMEM ／高糖培养液培养，
37℃、5%CO2培养箱中培养。 将对数生长期的细胞
HepG2 配制成细胞悬液接种于 96 孔板， 密度为
5×104 个 ／mL，培养 24 h 贴壁后，弃去培养液，设
置对照组及不同产地三叶青甲醇提取液，浓度为：
1 mg ／mL，每组设 3 个复孔，培养 24 h 后弃上清，
每孔加入 100 L 0.5 mg ／mL MTT 的 PBS 溶液 ，
37℃孵育 4 h。 再去上清液， 每孔加入 100 L DM-
SO，震荡 10 min 使结晶溶解后，在酶标仪 570 nm
处测定其吸光度值（OD），根据下式计算细胞抑制
率，结果见表 1。
细胞抑制率＝（对照组平均 OD 值－药物组平
均 OD 值） ／对照组平均 OD 值×
100%
2.3 统计学处理 数据用 x±s 表示，用 SPSS 16.0
统计软件分析， 组间比较用单因素方差分析，P＜
0.05 为差异具有统计学意义。
3 结果与讨论
3.1 通过不同产地三叶青的含量测定，各个产地
的三叶青总黄酮含量存在明显差异， 其中浙江省
台州市、三明市泰宁县、宁德市福安县三地的三叶
青总黄酮含量较高，达 0.42%以上，其抗肿瘤活性
也较强，说明采自这些产地的品质相对较好，适合
开发利用。
3.2 通过三叶青总黄酮含量和抗肿瘤活性的相
关分析表明， 总黄酮含量与三叶青抗肿瘤活性存
有一定的正相关，总黄酮含量越高，对 HepG2 细
胞增殖的抑制活性越强， 说明三叶青黄酮类成分
是其抗肿瘤作用的药效物质基础。
参考文献：
［1］ 郑军献，胡轶娟，梁卫青，等. 紫外可见分光光度法测定三叶
青中总黄酮的含量［J］. 中国中医药科技，2009，16（5）： 386-
387.
［2］ 黄真，毛庆秋，魏佳平. 三叶青提取物抗炎、镇痛及解热作用
的实验研究［J］. 中国新药杂志，2005，14（7）：861-864.
［3］ 丁钢强，郑军献，魏克民 . 三叶青提取物对肝癌细胞 HepG2
及原代大鼠肝细胞的体外毒作用研究［J］. 浙江预防医学，
2005，17（9）：1-3.
［4］ 刘跃银，夏红. 三叶青乙酸乙酯提取物诱导人结肠癌 HT-29
细胞凋亡［J］. 湖南师范大学学报，2012，7（4）：22-28.
［5］ 李瑛琦，陆文超，于治国 . 三叶青的化学成分研究 ［J］.中草
药，2003，34（11）：982-983.
［6］ 冯正权，倪克锋，何煜，等. 三叶青黄酮诱导 SGC-7901 胃癌
细胞凋亡的实验研究［J］. 中国临床药理学与治疗学，2006，
11（6）：669-672.
［7］ 张立明，樊瑞军，杨凤，琴 . 三叶青黄酮诱导 SMMC-7721 肝
癌细胞凋亡的实验研究［J］. 时珍国医国药，2010，21（11）：
2850-2851.
［8］ 范世明，林婧，许文，等. 不同产地三叶青中总黄酮含量的比
较［J］. 福建中医药大学学报，2013，23（3）：44-45.
表 1 不同产地三叶青根的总黄酮含量及对 HepG2
细胞增殖的抑制比较（x±s）
产 地
浙江省台州市
三明市泰宁县
宁德市福安市
重庆市药材市场
南平市顺昌县
安徽省亳州市
贵州省安顺市
宁德市柘荣县
亳州市药材市场
浙江省丽水市
n
3
3
3
3
3
3
3
3
3
3
总黄酮含量 ／%
0.459±0.06
0.452±1.11
0.437±1.67
0.344±0.63
0.265±0.58
0.249±0.64
0.173±0.54
0.167±0.32
0.152±0.42
0.132±0.43
细胞抑制率 ／%
70.61±2.61
66.11±4.85
59.33±3.25
48.50±2.40
33.89±2.61
30.67±1.34
20.21±3.47
21.44±4.43
18.24±4.81
20.24±2.39
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