全 文 ：DOI:10． 13463 / j． cnki． cczyy． 2014． 03． 006
不同产地三叶青提取物解热作用及对大白鼠下丘脑
5-羟色胺、去甲肾上腺素、多巴胺含量的影响
杨雄志，王翰华
(浙江医药高等专科学校，浙江 宁波 315100)
摘要:目的 探讨不同产地三叶青提取物(ETＲ)对酵母致大白鼠发热和下丘脑 5-羟色胺(5-HT)、去甲肾
上腺素(NE)、多巴胺(DA)含量的影响，为三叶青进一步种质优化，发挥地理优势，开发优质资源提供强有力的
科学依据。方法 用荧光分光光度计在 365、385、325 nm处为激发波长，以 485、480、375 nm为发射波长，测定
不同产地三叶青的 5-HT、NE和 DA含量。结果 给药组大白鼠在给予不同产地的三叶青提取物后 1 h体温都
有明显下降，下丘脑组织中 5-HT、NE和 DA的含量明显低于空白对照组。结论 不同产地的三叶青提取物对
酵母致发热大白鼠均有明显的解热作用，其中浙江乐清、舟山地产三叶青解热作用和对影响体温调节中枢介质
5-HT、NE、DA的作用尤为显著。
关键词:三叶青提取物;产地;解热作用;5-羟色胺(5-HT) ;去甲肾上腺素(NE) ;多巴胺(DA)
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标志码:A 文章编号:2095 － 6258(2014)03 － 0393 － 03
［基金项目］宁波市自然科学基金资助项目(2010A610021)。
［作者简介］杨雄志(1955 －) ，男，教授。研究方向:中药质量评价与新药开发。
Antipyretic effect of extracts of Ｒadix Tetrastigmae from different places of production and its effect on
5-hydroxytryptamine (5-HT)，norepinephrine (NE)，Dopamine (DA)in hypothalamus of rats
YANG Xiongzhi，WANG Hanhua
(Zhejiang Pharmaceutical College，Ningbo 315100，Zhejiang Province，China)
Abstract:Objective To explore effect of TＲ extracts from different places of production on febrile rats induced by
active dryyeast and on 5-HT、NE、DA in hypothalamus of rats to provide a more scientific evidence for the antipyretic
and cooling mechanism and the genetic optimization and use of the geographical advantage and the development of
high quality resources of TＲ． Methods The excitation wavelengths were 365、385、325 nm and the emission wave-
lengths were 485、480、375 nm． A method was established for the determination of 5-HT、NE、DA with a fluorescent
spectrophotometer． Ｒesult The temperature of rats in drug-given group fall remarkably after being given drug 1 hour
and 5-HT、NE、DA in hypothalamus fall remarkably too． The temperature and content of 5-HT、NE、DA in Hypothala-
mus of rats in model group are all lower than those in contro1 group． Conclusion TＲ extracts from different places of
production have antipyretic effect in febrile rats induced by active dryyeast． The effects of TＲ extracts from“Leqing”
and“Zhoushan”in Zhejiang Province were more remarkable．
Key words:extracts of Ｒadix Tetrastigmae;place of production;antipyretic effect;5-hydroxytryptamine(5-HT) ;norep-
inephrine(NE) ;dopamine(DA)
三叶青是浙江主产的一种具有地方特色和资源 优势的中药材。在古代，人们通过各类古籍的传承并
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发现，三叶青(Tetrastigmae Ｒadix)为葡萄科植物三叶
崖爬藤(Tetrastigma hemseyanum DielsetGld)的干燥块
根，分布于我国浙江、江西、福建、湖北、广东、广西等
地［1］，有清热解毒、祛风化痰、活血止痛的功能，在临
床用于治疗高热惊厥、腹痛、肺炎、哮喘、肝炎等证疗
效显著［1-4］。本课题组在前期工作的基础上［5］，为了
进一步扩大三叶青在全国可开发利用的资源，笔者经
过全国 5 个不同地区 6 个点三叶青资源的探查，收集
了不同产地的三叶青标本，并细致研究了不同产地三
叶青提取物对酵母致大鼠发热和下丘脑组织中 5-
HT、NE、DA含量的影响，为今后三叶青的种质优化、
临床应用和资源开发等方面提供了强有力的科学依
据。
1 实验材料
1. 1 试验药物 根据三叶青在全国等地的资源分布，
笔者分别在浙江乐清、舟山二地区、江西、福建、湖北、
广西等地分别采集了 6 个不同点的三叶青，经本校中
药鉴定教研室鉴定为葡萄科植物三叶崖爬藤(Tet-
rastigma hemseyanum Diels et Gld)的干燥块根。其标
本标记为浙乐 1、浙舟 2、江西 3、福建 4、湖北 5、广西 6。
不同产地三叶青提取物(Extract of Tetrastigmae
Ｒadix ，ETＲ)的制备:按中药制剂称重、提取等要求，
将 1 000 g药材常规加工粉碎后过 20 目筛，用蒸馏水
回流提取 2 次后，分别将 2 次提取液用旋转蒸发仪浓
缩至相当于含生药 2 g /mL，置冰箱备用。实验时，将
浓缩液按注射液要求制成相应的剂型，以作备用。
1. 2 动物 选用 Wiser 雄性大白鼠，保持体质量为
(200 ± 20)g 的差异。实验用大白鼠均为浙江医科
院动物中心提供。为了实验的稳定和数据的可靠，实
验前，将动物置 5 只 /笼，放于实验室内让其适应环境
1 周。四周环境光照节律 12L∶ 12D(6:00 ～ 18:00) ，
维持室温(22 ± 2)℃，保持动物室安静。室内相对湿
度保持在 30% ～ 40%，每天细心喂常规颗粒饲料及
饮用水，避免发生意外伤亡。
1. 3 试剂 干酵母(梅山马利有限公司，批号:
110618) ;阿司匹林肠溶片(上海信谊药厂有限公司，
批号:110818) ;邻苯二甲醛(上海金穗生物科技有限
公司，批号 110820) ;L-半胱氨酸(中国科学院微生物
研究所产品，批号:110926) ;5-羟色胺(5-HT:Sismg
公司产品) ;NE、DA(Fluda 公司产品) ;5-HT、NE、DA
标准液的制备:首先，按游离胺计算，用 0. l mol /L 的
HCI配成 1 mg /mL 的相应的 5-HT、NE、DA 贮备液，
并冰冻保存。临用时，将贮备液用 0. 1 mol /L的 HCL
稀释成为 1 μg /mL［4］。碱式亚硫酸钠，磷酸，酸性正
丁醇等化学试剂均为市售分析纯。
1. 4 仪器 ＲF-5301PC型荧光分光光度计为日本岛
津公司产品;电子天平为瑞士产品;便携式数字测温
仪为上海医用仪表厂产品。
2 方法与结果
所用实验数据以均数 ±标准差(珋x ± s)表示，均数
间显著性差异用 t检验。
2. 1 不同产地三叶青提取物(ETＲ)对大白鼠酵母发
热的影响［3］ 选取雄性大白鼠若干，并预测体温 3
d，保持 3 次 /d。实验当日时，以测定的大白鼠肛温数
据为基础，取其均值作为正常的大白鼠体温。如果实
验测试体温的大白鼠中，有 2 次体温波动范围大于
0. 3 的实验用大白鼠则被剔除。实验时，用 20%酵母
混悬液以 10 mL /kg量注入大白鼠背部皮下，6 h后测
量其肛温，凡直肠温度上升不到 0. 8 ℃的大白鼠剔除
不用。取合格大白鼠 100 只分为 10 组，将空白对照
组(NS)为 1 组、ETＲ 按高、中、低(6. 0、4. 0、2. 0 g /kg)
剂量分为 3 组、阳性药组(阿司匹林 100 mg /kg)为 1
组，5组中每组均注射给药。给药后，每隔 1 h测量肛温 1
次，连续测量5次。结果见表1。(另外5组留作他用)
表 1 不同产地三叶青提取物(ETＲ)对大白鼠酵母发热的影响(珋x ± s，n = 10)
组 别 剂量 /(g /kg) 正常 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h
空白对照组 — 37． 08 ±0． 226 37． 15 ±0． 470 38． 56 ±0． 542 0 39． 06 ±0． 591 39． 28 ±0． 445 39． 78 ±0． 218
阿司匹林组 0． 1 37． 07 ±0． 342 36． 45 ±1． 287 37． 47 ±0． 467 0# 38． 20 ±0． 589# 38． 40 ±0． 582# 39． 41 ±1． 038
浙乐 1高量 6． 0 36． 83 ±0． 343 36． 15 ±0． 158 37． 19 ±0． 508 0## 38． 13 ±0． 591# 38． 29 ±0． 615# 38． 96 ±0． 348
浙舟 2高量 6． 0 36． 79 ±0． 338 36． 11 ±0． 139 37． 21 ±0． 417 0## 38． 15 ±0． 578# 38． 26 ±0． 567# 38． 97 ±0． 315
江西 3高量 6． 0 36． 80 ±0． 346 36． 19 ±0． 138 37． 86 ±0． 508 0# 38． 13 ±0． 681# 38． 56 ±0． 698 38． 87 ±0． 369
福建 4高量 6． 0 36． 85 ±0． 435 36． 18 ±0． 159 37． 90 ±0． 478 8# 38． 11 ±0． 678# 38． 67 ±0． 637 38． 97 ±0． 378
湖北 5高量 6． 0 36． 89 ±0． 350 36． 16 ±0． 178 37． 92 ±0． 681 0# 38． 38 ±0． 646 38． 81 ±0． 568 38． 95 ±0． 559
广西 6高量 6． 0 36． 81 ±0． 367 36． 09 ±0． 168 37． 89 ±0． 476 0# 38． 28 ±0． 559# 38． 92 ±0． 687 38． 98 ±0． 456
注:与空白对照组比较，#P ＜ 0. 05，#P ＜ 0. 01。
2. 2 不同产地三叶青提取物(ETＲ)对大白鼠下丘脑 组织 5-HT、NE、DA含量的影响［5］ 另外 5 组留作他
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用，在注射给药 1 h后也测肛温，但所不同的是，将给
药的大白鼠快速断头，以灰结节及视交叉之间的中心
点为中心确定下丘脑的位置，称取一定量的下丘脑组
织，立即放入灌氮罐内，速冻于 － 80 ℃冰箱保存，以
留做 5-HT、NE、DA含量的提取和测定用［4］。
测定时，取一定量冰冻的下丘脑组织，放入预先冰
冷的玻璃匀浆器中。按比例(1∶ 30)每 100 mg脑组织
加预冷酸性正丁醇，搅匀，离心。之后二步为:一是取
正丁醇上清液，加正庚烷 2. 5 mL，加 0. 1 mol /L HCI l
mL振荡，离心;取水相，加入 L半胱氨酸与 OPT反应，
用荧光分光光度计在 480 nm/365 nm 处测定 5-HT 荧
光强度。二是取正丁醇上清液，加磷酸缓冲液2. 1 rnL，
加 0. 01 mol /HCI 0. 2 mL，内标管加入 NE、DA 标准液
0. l mL，离心;取水相，在碱性条件下与碘试剂反应，生
成具有荧光性的化合物。用荧光分光光度计在
480 nm/385 nm测定 NE荧光强度。在 375 nm/325 nm
处测定 DA荧光强度。大白鼠下丘脑 5-HT、NE，DA的
含量以 ng /mg鲜脑组织的湿重数表示。结果见表 2。
表 2 不同产地三叶青提取物(ETＲ)对大白鼠下丘脑组
织 5-HT、NE、DA含量的影响(珋x ± s，n = 10) ng /mg
组 别 5-HT NE DA
空白对照组 3． 52 ± 0． 27 1． 68 ± 0． 28 1． 49 ± 0． 25
模型对照组 2． 75 ± 0． 28# 1． 30 ± 0． 16# 1． 16 ± 0． 12#
浙乐 1 高量 1． 98 ± 0． 61## 1． 09 ± 0． 18## 0． 86 ± 0． 25##
浙舟 2 高量 1． 89 ± 0． 51## 1． 10 ± 0． 16## 0． 92 ± 0． 46##
江西 3 高量 2． 05 ± 0． 69## 1． 21 ± 0． 32## 0． 99 ± 0． 32#
福建 4 高量 2． 12 ± 0． 58## 1． 26 ± 0． 23## 1． 12 ± 0． 16#
湖北 5 高量 2． 02 ± 0． 67## 1． 37 ± 0． 16# 1． 20 ± 0． 19#
广西 6 高量 2． 06 ± 0． 67## 1． 38 ± 0． 10# 1． 22 ± 0． 17#
注:与空白对照组比较，#P ＜ 0． 05，##P ＜ 0． 01。
3 小结
十多年来，许多学者借助古人和现代三叶青临床
应用的宝贵经验，对其抗肿瘤、抗病毒和解热作用等方
面进行了大量的临床应用和研究。特别是浙江的高
校、研究机构和社会企业或团体都对三叶青的三大作
用进行了深入研究，发现三叶青还具有提高人体的免
疫功能［6］，取得了一定的显著性突破。充分说明三叶
青在我国是一味具有地方特色、效果显著的中药材。
我国地大物博，中药资源十分丰富，如何更好地
利用三叶青新资源，真正开拓创造三叶青的临床药用
价值，本实验有针对性地选取了五地六点的三叶青作
为实验材料，旨在把我国分布甚广、蕴藏量大、应用前
景好的三叶青开发利用好。本实验结果充分表明不
同产地三叶青提取物确实具有较强的解热降温作用。
与现已证实的体温调节的单胺学说(中枢单胺类神
经递质参与体温调节活动，并且是温度敏感神经元活
动的神经化学基础;5-HT、NE、DA在量的动态平衡可
保持体温的恒定，单胺参与体温调节及致热原通过释
放单胺引起发热)是基本一致的，也是可靠的。
浙江产三叶青提取物对酵母致发热大白鼠体温
升高有显著的降低作用，对大白鼠下丘脑组织 5-HT、
NE、DA含量的高低也有较大的影响［5］。现不同产地
的三叶青提取物对酵母致发热大白鼠体温的作用以
及下丘脑组织 5-HT、NE、DA 含量的影响同浙江产三
叶青的作用与结果基本相似。尽管如此，但仔细加以
分析并对照比较，则给后人提出了启迪和警示。中药
应用的精髓是剂量、炮制和配伍。但不同的产地和不
同的剂量其效果显然是不同的，这说明一中药剂量在
临床的应用是有考究的，不得随意任之;二不同的产
地相同的剂量却产生不同的效果说明中药是有严格
的道地性或区域性，不得任意用之;三本课题三叶青
提取物实验采用的数据都是高剂量，说明中药剂量高
低对实验的效果和稳定性是有一定差异和影响的，对
今后的研究提供了依据。
另外，从本实验结果中得到启示，与外省三叶青
提取物的实验结果对比，浙江省乐清和舟山的三叶青
的提取物在解热和对 5-HT、NE、DA 的影响都占有明
显的优势，这与浙江省中医药研究院对浙江三叶青和
各地三叶青总黄酮含量的测定与比较并得到显著差
异性的结果是一致的［6］。这结果提示三叶青的黄酮
成分与其解热机制可能有关，究竟何因，有待下一步
的研究与探讨。
参考文献:
［1］中国医学科学院药物研究所．中药志 2 册［M］．北京:人民
卫生出版社，1959:2198．
［2］江苏新医学院．中药大词典下册［M］．上海:上海科学技术
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［3］陈奇．中药药理研究方法学［M］．北京:人民卫生出版社，
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［4］杨雄志，王翰华．三叶青提取物的解热作用及对大白鼠下丘
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［5］丁钢强，徐彩菊，孟佳，等．三叶青对小鼠细胞因子及免疫功
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青中总黄酮的含量［J］．中国中医药科技，2009，16(5) :386-
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