全 文 ：第３８卷　第１期 西 南 师 范 大 学 学 报 （自然科学版） ２０１３年１月
Ｖｏｌ．３８　 Ｎｏ．１　　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｓｏｕｔｈｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｎｏｒｍａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ） Ｊａｎ．２０１３
文章编号：１０００－５４７１（２０１３）０１－０１２１－０６
山苍子内生真菌多样性研究
①
游　玲１，　林　娜２，　郭　华２，　廖雪丽２，　魏　琴１
１．宜宾学院 发酵资源与应用四川省高校重点实验室，四川 宜宾６４４０００；
２．宜宾学院 生命科学与食品工程学院，四川 宜宾６４４０００
摘要：采用添加植物组织浸提液的孟加拉红培养基，从山苍子根、茎、叶、果实中分离到２５株内生真菌，其中根内
生真菌５株，茎内生真菌３株，叶内生真菌１２株，果实内生真菌５株，经形态及ＩＴＳ序列鉴定，其至少分属于Ａｓ－
ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ４个属的１１个种，且 Ｈｙｐｏｃｒｅａ属的３株真菌仅在叶、果实中分
离到，Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属的１株真菌仅在叶中分离到，表明山苍子植株对其内生真菌具有明显的选择作用，其内生
真菌的分布体现出明显的种属特异性及组织特异性．
关　键　词：山苍子；内生真菌；多样性
中图分类号：Ｑ９３５ 文献标志码：Ａ
植物内生菌是指那些在其生活史的一定阶段或全部阶段生活于健康植物各种组织和器官内部或细胞间
隙的真菌或细菌，自上世纪９０年代以来，多位研究者从药用植物、农作物中分离到大量内生真菌，特别是
继１９９３年以来在红豆杉中筛选到能够产生其宿主树皮中的重要抗癌物质紫杉醇的内生真菌之后［１－２］，陆
续有大量关于植物内生真菌产生活性代谢产物的报道［３］，如油樟内生真菌可在人工培养条件下产生多种樟
油组分［４］．
山苍子Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ（俗称山鸡椒）为樟科木姜子属的落叶小乔木，广泛分布于南方各省，是我国重要
的香料树种，其主要产物柠檬醛可用于制造紫罗兰酮等系列高级香料，国内外市场需求量很大．我国年产
山苍子油２　０００余ｔ，出口量占世界第一位．通过对山苍子这种重要香料植物内生细菌的研究，结合我们已
完成的油樟、香樟及正在开展的岩桂这３种重要樟科香料植物内生真菌的研究，不仅有助于探明在相似的
地理气候条件下，不同樟科植物内生真菌的区系分布特征，发现内生真菌分布与环境、遗传背景之间的一
些联系，丰富内生菌基础理论，在山苍子栽培及提高山苍子油的产量、油中柠檬醛的含量等方面也具有潜
在的现实意义，同时，分离所得菌种与油樟内生菌、岩桂内生菌一起可初步建立樟科香料植物内生菌的菌
种库，搭建此类微生物资源保护与利用的平台，为宜宾香料植物的进一步开发利用提供理论基础．
１．１　材　　料
１．１．１　样品采集
采自四川宜宾县双龙镇山苍子人工林内，采样时间为２００９年９月，在山苍子林中５０ｍ２ 范围内，选取
① 收稿日期：２０１１－０９－０５
基金项目：四川省科技厅青年基金项目（２０１１ＪＴＤ００３５）；四川省教育厅青年基金项目“山苍子内生菌分离及应用研究”（２００９ＪＹ０１４９）；发
酵资源与应用四川省高校重点实验室基金项目（Ｎｏ．２０１０ＫＦＪ００２）．
作者简介：游　玲（１９８１－），女，四川武胜人，硕士，助理研究员，主要从事应用微生物研究．
DOI:10.13718/j.cnki.xsxb.2013.01.016
无明显植物病害而且树龄接近的植株２０棵分别采集根、茎、叶、果实．采集后马上回实验室进行分离．
１．１．２　植物组织无菌水浸液的制备
取健康植株的根（直径约１～５ｍｍ）、茎（１至２年生的枝条，直径约５～１０ｍｍ）、叶（随机选取）分别打
碎后等重量混合，称取８０ｇ加入２００ｍＬ水，为尽量保留植物组织物质的活性，采用１００ｍＬ三角瓶各分装
５０ｍＬ，１１５℃灭菌２０ｍｉｎ，无菌纱布过滤备用．
１．１．３　分离培养基
孟加拉红培养基＋山苍子植物组织（根５０ｇ、茎５０ｇ、叶片５０ｇ）水浸液＋青霉素５０ｍｇ／Ｌ＋链霉素５０
ｍｇ／Ｌ＋去氧胆酸钠５０ｍｇ／Ｌ．
１．１．４　主要试剂和仪器
ＰＣＲ仪及梯度电泳仪均为Ｂｉｏ－Ｒａｄ公司产品；ＤＮＡ提取扩增所用试剂为上海生物工程技术服务有限
公司产品（Ｓａｎｇｏｎ）；其余试剂均为国产分析纯．
１．２　内生真菌的分离鉴定
山苍子内生真菌的分离：随机挑选根、茎、叶、果实１００ｇ左右，洗净风干，７５％乙醇分别浸泡２，３ｍｉｎ
及６０和６０ｓ，无菌水冲洗６次，无菌滤纸吸干，０．１％升汞分别浸泡５０ｓ和１ｍｉｎ及４０和４０ｓ，无菌水冲
洗６次，加无菌石英砂研磨，梯度稀释至１０－３，每一稀释梯度涂布１０个分离平板．每个样品都取最后１次
无菌水洗液涂于相应平板上，以检测表面消毒是否彻底．定期观察分离平板，挑取单菌落划线纯化于ＰＤＡ
培养基上．
山苍子内生真菌的鉴定：根据文献［５］提供的方法，并参考文献［６］适当修改．提取培养物基因组ＤＮＡ
后，扩增其ＩＴＳ序列．引物采用ＩＴＳ１（５′－ＴＣＣＧＴＡＧＧＴＧＡＡＣＣＴＧＣＧＧ－３′）及ＩＴＳ４（５′－ＴＣＣＴＣＣＧＣＴ－
ＴＡＴＴＧＡＴＡＴＧＣ－３′），ＰＣＲ反应体系和反应条件参照文献［７］进行．扩增产物送上海生物工程技术服务有
限公司（Ｓａｎｇｏｎ）纯化并测序，测定序列长度５００ｂｐ左右，用ｂｌａｓｔｎ对这些序列进行相似性检索，将其鉴定
到属．用ＣｌｕｓｔａｌＸ按照最大同源性对所有纯培养菌株的ＩＴＳ序列排序，采用Ｋｉｍｕｒａ－２［７］计算核苷酸差异
值，并用ＢｉｏＥｄｉｔ　５．０．９进行检验，最后用Ｎｅｉｇｈｂｏｒ－Ｊｏｉｎｉｎｇ法［８］构建系统进化树，自展数为１　０００．
同时，参照魏景超《真菌鉴定手册》［９］，根据ＩＴＳ序列分析结果及菌落的颜色、大小、表面特征、边缘特
征等肉眼可辨的特征对从同一分离器官内分离到的真菌去除冗余菌株．各样点内生真菌的多样性指数
Ｈ＝－ΣＰｉｌｏｇＰｉ，式中Ｐｉ＝Ｎｉ／Ｎ，其中Ｎｉ表示样点某物种的个体数，Ｎ 表示个体总数［１０］．
２　结果与讨论
２．１　内生真菌的分离
在含有山苍子植株水浸液的孟加拉红培养基上，共纯化得到２５株内生真菌，其中根内生真菌５株，茎
内生真菌３株，叶内生真菌１２株，果实内生真菌５株，其中包括１０种具有明显形态差异的菌落类型（表１，
表２）．山苍子植株中分离到的内生真菌种属及数量均少于其他林木内生真菌［１１］，可能是由于山苍子植株
内含量较高的柠檬醛对真菌，特别是黄曲霉有明显抑制作用［１２］，导致环境中的真菌仅有少部分能够进入植
株成为内生真菌．
２．２　内生真菌的分布
提取所有菌株ＤＮＡ，扩增其ＩＴＳ序列并测序后得到２５条有效序列（序列号ＪＮ２５２１０２－ＪＮ２５２１２６，图
１），比对后发现，测得序列与Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ４属１１个种的菌株序
列相似性最高，除１株分离自茎中的内生真菌（序列号为ＪＮ２５２１０４）相似性与Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｏｃｈｒｏｃｈｌｏｒｏｎ相
似性仅为９７％以外，其余序列与对应模式菌株的相似性均大于９９％．
２２１ 西南师范大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　第３８卷
表１　山苍子内生真菌主要形态类型（ＰＤＡ平板）
编号 形态特征 根 茎 叶 果实
１
菌落平铺，致密粉状，正面褐绿色，边缘白色，背面
红色；菌丝白色，有隔膜，分生孢子．
１株：
ＪＮ２５２１１６
２株：
ＪＮ２５２１０５－０６
２
菌落疏松，绿色，表面绒毛状孢子丝，背面粉红色；
菌丝有隔膜．
１株：
ＪＮ２５２１０３
１株：
ＪＮ２５２１０９
３
菌落直径５～８ｍｍ，深绿色，平铺，边缘白色，表面
致密，粉末状；菌丝有隔膜．
１株：
ＪＮ２５２１０６
１株：
ＪＮ２５２１０７
１株：
ＪＮ２５２１２４
４ 菌落白色绒毛状；菌丝有隔膜．
２株：
ＪＮ２５２１２３，
ＪＮ２５２１１８
５
菌落直径１２ｍｍ左右，褐绿色，表面有白色蛛网状菌
丝；菌丝无隔膜，可形成节孢子，孢囊孢子．
１株：
ＪＮ２５２１０２
１株：
ＪＮ２５２１２５
４株：
ＪＮ２５２１１２－１４，
ＪＮ２５２１２２
１株：
ＪＮ２５２１１５
６
菌落直径１０ｍｍ以上，中间及下部绿色，边缘白色、
表面疏松．
１株：
ＪＮ２５２１１０
７
菌落直径１０ｍｍ以上，平铺，褐绿色，边缘整齐，白
色；粉末状，难挑起；菌丝有隔膜，分生孢子．
１株：
ＪＮ２５２１２６
１株：
ＪＮ２５２１０４
１株：
ＪＮ２５２１１１
８
菌落直径６ｍｍ左右，中间黄绿色，边缘褐绿色，平铺，
表面致密粉状，难挑起；菌丝无隔，分生孢子椭圆．
１株：
ＪＮ２５２１１９
１株：
ＪＮ２５２１１０
９
菌落直径８ｍｍ左右，白色丝绒状，中间泛黄，边缘
整齐．
２株：
ＪＮ２５２１１８，
ＪＮ２５２１２１
１０
菌落直径５ｍｍ左右，深绿色，平铺，表面致密，粉末
状；菌丝有隔膜．
１株：
ＪＮ２５２１２０
　　注：“：”后为该菌株ＩＩＳ序列在Ｇｅｎｂａｎｋ中的序列号．
表２　山苍子内生真菌的分布
来　　源 根 茎 叶 果实 合计
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　 ４　 １　 ６　 ２　 １３
Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　 １　 １
Ｈｙｐｏｃｒｅａ　 １　 ２　 ３
Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　 １　 ２　 ４　 １　 ８
合计 ５　 ３　 １２　 ５　 ２５
多样性指数（属一级分类） ０．２６　 ０．２８　 ０．４９　 ０．４６　 ０．５１
　　从内生真菌的种属来看（图１），８株内生真菌与青霉属２个种（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｒｕｓｔｏｓｕｍ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｏｃｈｒｏｃｈｌｏｒｏｎ）及２个未定种的对应序列相似度最高（叶４株，茎２株，果实１株，根１株），占内生真菌总数
的３２％，其中Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｒｕｓｔｏｓｕｍ 其可形成多种次生代谢产物［１３］，具有很好的环境适应能力；１３株内
生真菌（叶６株，茎１株，果实２株，根４株）与曲霉属４个种的对应序列相似度最高，占内生真菌总数的
５２％；这２１株内生真菌在系统发育树上形成４个青霉分支，４个曲霉分支，除Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｏｃｈｒｏｃｈｌｏｒｏｎ分
支上的３株真菌可分为２种ＩＴＳ类型外，所有分支上的内生真菌其ＩＴＳ序列均相同或仅有１～３个碱基差
异．同时，山苍子植株４个部位的内生真菌数量及种属均较少，其多样性远低于其他自然环境或其他植物
（表２），总体上２５株内生真菌仅包括１１种ＩＴＳ序列类型，其中９种类型（２１株）与Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ－
ｕｍ属的８个种对应序列相似度最高，仅有１株叶内生真菌与Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ相似度为
１００％，２株果实内生真菌与Ｈｙｐｏｃｒｅａ　ｌｉｘｉｉ相似度为１００％，１株叶内生真菌与Ｈｙｐｏｃｒｅａ　ｌｉｘｉ相似度为为
９９％，与其他植物内生真菌区系构成相比［１４］，体现出明显的种属特异性．
３２１第１期　　　　　　　　　　　　 游　玲，等：山苍子内生真菌多样性研究
图１　基于ＩＴＳ序列的山苍子内生真菌系统发育树
从内生真菌在植株各部位的分布来看（表２，图１），１２株叶内生真菌分属于Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉ－
ｕｍ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ４个属的６个分支，３株茎内生真菌分属于Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ２个属的
３个分支，５株根内生真菌分属于Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ２个属的４个分支，５株果实内生真菌分属于
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ３个属的４个分支．可见Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属内生真菌在根、
茎、叶、果实４个部位均有分布，是山苍子植株内分布最广的内生真菌，Ｈｙｐｏｃｒｅａ属仅在叶、果实内分布，
Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ属仅在叶内分离到１株．有５个类型的ＩＴＳ序列分支仅包括１株真菌（图１），如分属于皮落
青霉Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｃｒｕｓｔｏｓｕｍ 及枝状枝孢霉Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ　ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ的２株叶内生真菌，分属于青霉
属与曲霉属的２株果实内生真菌；属于青霉属的１株茎内生真菌，这５株真菌仅分布于植株特定部位，为
这些部位的特有内生真菌．理论上，不同种属真菌对不同基质的利用能力、对不同组织的适应能力及其在
植株内不同组织间的迁移能力存在差异，这种差异可导致某些内生真菌对一定组织的偏好，虽然已有研究
对植物内生真菌是否具有组织特异性仍存在争议［１５－１６］，但对山苍子这种植物来说，其内生真菌的分布体现
出明显的组织分布特异性．
分离到的内生真菌中，Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ属真菌为环境中常见真菌，Ｈｙｐｏｃｒｅａ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ
ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｏｉｄｅｓ为常见的植物内生真菌．值得注意的是，果实中含柠檬醛最高，却分离到１株与黄曲霉对
应序列相似性１００％的菌株（根、茎、叶中均未分离到），说明该株菌与其他受柠檬醛抑制的黄曲霉菌有一
定差异，很可能与山苍子内生环境的驯化有关．
３　讨　　论
在内生真菌的分离过程中，发现孟加拉红培养基上生长的真菌菌落总数并不少于ＰＤＡ培养基，且相
比ＰＤＡ培养基，孟加拉红培养基具有限制菌落蔓延的优点，尤其适宜用于真菌的分离．同时，有１株真菌
仅在含有植株水浸液的平板培养基上分离到，说明这株真菌对山苍子细胞物质有明显依赖性，这种依赖性
可能是经植株内环境长期驯化所致，有可能存在的一种情况是，当这些真菌能够方便的获取植株内某种生
长因子维持生长，则产生该物质的代谢途径就可能出现退化，导致其突然转移到人工培养基上时不能顺利
生长，因此这些真菌可能与山苍子植株之间存在更密切的共代谢关系，同时也说明仅用一种培养基，一种
培养方法很难分离出所有内生真菌，需要设计合适的培养基和培养条件，或者开展内生真菌的免培养研
４２１ 西南师范大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　第３８卷
究．目前，对真菌的鉴定正在从以形态鉴定为主过渡到形态鉴定与特征序列鉴定相结合，在试验过程中，
我们也发现某些ＩＴＳ序列完全一致的青霉属及曲霉属内生真菌，其菌落形态或显微形态仍存在明显差异，
说明山苍子植株内存活着多株分属于２个群体的亲缘关系极为接近的不同内生真菌，推测可能是由于在与
植株协同进化的长期过程中，山苍子内生真菌群体内部出现了细微的分化．同时，也验证了其他研究中认
为仅凭ＩＴＳ序列不能将真菌鉴定到种的相关结论［１７］．
山苍子植株中含量较高的柠檬醛可抑制曲霉属真菌特别是黄曲霉菌生长，但我们仍在山苍子的根、
茎、叶、果实中分离到大量曲霉属真菌，甚至包括１株与黄曲霉菌对应序列相似性１００％的菌株，罗曼等认
为柠檬醛对黄曲霉的抗菌机制主要是通过破坏菌丝体、孢子质膜的分子结构，改变其选择通透性实现
的［１８］，推测这些真菌存在某种消解这种破坏作用的机制，尚待进一步证实．
与本地另外３种乔木内生真菌相比，山苍子的内生真菌种属远远是少于白栎及同为樟科植物的油樟、
香樟，且仅有曲霉属内生真菌在油樟、香樟、山苍子中均被分离到，白栎与山苍子没有相同种属内生真菌，
说明植物的遗传特性影响其内生真菌的种属分布，一定程度上，亲缘关系更接近的植物，其内生真菌种属
分布更为相似，这与我们之前的研究结果也是一致的［１９］，同时，山苍子内生真菌种属及数量均远低于上述
３种乔木，推测可能是由于柠檬醛对多种真菌具有广谱抑菌效果，特别是那些在山苍子中没有分离到，但
在白栎及油樟、香樟各部位均有大量分布的种属，如组丝核菌属Ｐｈａｃｏｄｉｕｍ　Ｐｅｒｓ．和痂圆孢属Ｓｐｈａｃｅｌｏｍａ
ｄｅ　Ｂａｒｙ属等，推测柠檬醛对这些种属真菌具有较强的抑制作用，有待进一步研究．
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ｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ａｒｃｔｉｃ　ａｎｄ　Ｏｔｈｅｒ　Ｖａｒｉｏｕｓ　Ｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｎｉｃｈｅｓ［Ｊ］．ＦＥＭＳ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　Ｅｃｏｌｏｇｙ，２００５（６）：５１－６０．
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Ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌｓ　ｏｆ　Ａｇｒｏｓｔｉｓ　ｈｉｅｍａｌｉｓ　Ｉｎｆｅｃｔｅｄ　ｂｙ　Ｅｐｉｃｈｌｏｅ　ｔｙｐｈｉｎａ［Ｊ］．Ａｍｅｒｉｃａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ，１９９１，７８（４）：５２７－５３３．
［１６］ＦＩＳＨＥＲ　Ｐ　Ｊ，ＰＥＴＲＩＮＩ　Ｏ，ＳＵＴＴＯＮ　Ｂ　Ｃ．Ａ　Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　Ｆｕｎｇａｌ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｅｓ　ｉｎ　Ｘｙｌｅｍ　ａｎｄ　Ｂａｒｋ　ｏｆ　Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓ
５２１第１期　　　　　　　　　　　　 游　玲，等：山苍子内生真菌多样性研究
Ｎｉｔｅｎｓ　ｉｎ　Ａｕｓｔｒａｌｉａ　ａｎｄ　Ｅｎｇｌａｎｄ［Ｊ］．Ｓｙｄｏｗｉａ　４５，１９９３：３３８－３４５．
［１７］赵国柱，张天宇，曹爱新，等．基于ｒＤＮＡ　ＩＴＳ序列分析Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ与相似属的关系及Ａ．ｌｅｕｃａｎｔｈｅｍｉ的分类地位
［Ｊ］．菌物学报，２００６，２５（２）：１８４－１９１．
［１８］罗　曼，蒋立科，吴子健．柠檬醛对黄曲霉质膜损伤机制的初步研究 ［Ｊ］．微生物学报，２００１（１２）：７２３－７２９．
［１９］王　涛，游　玲，崔晓龙，等．四川宜宾三种乔木内生真菌的多样性 ［Ｊ］．微生物学通报，２００９，３６（３）：０３３９－０３４４．
Ｏｎ　Ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　Ｆｕｎｇｉ　Ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍＬｉｔｓｅａ　Ｃｕｂｅｂａ
ＹＯＵ　Ｌｉｎｇ１，　ＬＩＮ　Ｎａ２，　ＧＵＯ　Ｈｕａ２，　ＬＩＡＯ　Ｘｕｅ－ｌｉ　２，　ＷＥＩ　Ｑｉｎ１
１．Ｙｉｂｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ　Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ　ａｎｄ　Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ　ａｔ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｉｅｓ　ｏｆ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｙｉｂｉｎ　６４４０００，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｙｉｂｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｏｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｆｏｏｄ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｙｉｂｉｎ　６４４０００，Ｃｈｉｎａ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ｒｏｓｅ　ｂｅｎｇａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ａｄｄｅｄ　ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ　ａｑｕｅｏｕｓ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｆ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ　ｐｌａｎｔ　ｔｉｓｓｕｅ　ｈａｓ　ｂｅｅｎ
ｕｓｅｄ　ａｓ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ，２５ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇａｌ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｕｒｆａｃｅ－ｓｔｅｒｉｌｉｚｅｄ　ｌｅａｖｅｓ，
ｓｔｅｍｓ，ｒｏｏｔｓ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ　ｉｎ　Ｙｉｂｉｎ，Ｓｉｃｈｕａｎ　ｐｒｏｖｉｎｃｅ，Ｃｈｉｎａ，ａｎｄ　５ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｒｏｏｔｓ，３
ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｓｔｅｍｓ，１２ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ，５ｓｔｒａｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｆｒｕｉｔｓ．Ｔｈｅｓｅ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｃｌａｓｓｉｆｉｅｄ　ｉｎｔｏ
Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ，Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ，Ｈｙｐｏｃｒｅａ，Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ　ａｔ　ｌｅａｓｔ　１１ｓｐｅｃｉｅｓ，ａｎｄ　３ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ
Ｈｙｐｏｃｒｅａ　ｗｅｒｅ　ｏｎｌｙ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ　ａｎｄ　ｆｒｕｉｔｓ，１ｓｔｒａｉｎｓ　ｂｅｌｏｎｇ　ｔｏ　Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｏｎｌｙ　ｉｓｏｌａ－
ｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｌｅａｖｅｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｉｎｄｉｃａｔｅ　ｔｈａｔ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ　ｈａｄ　ｃｏｎｓｉｄｅｒａｂｌｅ　ｓｅｌｅｃｔ　ｏｎ　ｉｔｓ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ　ｃｏｌ－
ｌｅｃｔｉｏｎ；ｂｏｔｈ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ａｎｄ　ｔｉｓｓｕｅ　ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ　ｈａｖｅ　ｂｅｅｎ　ｏｂｓｅｒｖｅｄ　ｉｎ　ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ　ｏｆ　ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ
ｏｆ　Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｔｓｅａ　ｃｕｂｅｂａ；ｅｎｄｏｐｈｙｔｉｃ　ｆｕｎｇｉ；ｄｉｖｅｒｓｉｔｙ
责任编辑　陈绍兰　　　　
６２１ 西南师范大学学报（自然科学版）　　　　　ｈｔｔｐ：／／ｘｂｂｊｂ．ｓｗｕ．ｃｎ　　　　第３８卷