全 文 ：第 35卷 第 4期 东　北　林　业　大　学　学　报 Vol.35 No.4
2007年 4月 JOURNALOFNORTHEASTFORESTRYUNIVERSITY Apr.2007
绒白乳菇菌丝体多糖成分及抑菌活性分析 1)
计红芳　宋瑞清
(哈尔滨工业大学 ,哈尔滨 , 150001)
　　摘　要　以热水法提取绒白乳菇菌丝体多糖,其粗多糖中多糖质量分数为 3.92%,还原糖质量分数为 1.11%;纯化
后 , 多糖质量分数为 84.12%,纯度提高了约 21倍 ,还原糖质量分数为 1.59%。初步判断绒白乳菇菌丝体多糖中
含有葡萄糖 、甘露糖 、果糖。绒白乳菇菌丝体多糖液对金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、枯草杆菌有一定抑制作用;对啤
酒酵母 、白色念球菌有微弱抑制作用;对绿色木霉 、黑根霉 、黑曲霉 、杨树烂皮病菌 、杨树叶枯病菌均无抑制作用;对
细菌抑制能力强于真菌。
关键词　绒白乳菇;菌丝体多糖;含量;成分;抑菌效果
分类号　S718.81Polysaccharidesfrom Mycelium ofLactariusvelereusandTheirInhibitingActivity/JiHongfang, SongRuiqing(HarbinInstituteofTechnology, Harbin150001, P.R.China)//JournalofNortheastForestryUniversity.-2007, 35(4).-41 ～ 42AnexperimentwasconductedtoextractpolysaccharidesfrommyceliumofLactariusvelereusbytheboilingwatermeth-od.Thecontentsofpolysaccharidesandreducingsugarwere3.92%, 1.11%inthecrudeextract, and84.12%, 1.59%afterpurification, respectively.ItwasdeterminedthatpolysaccharidesfrommyceliumofL.vellereusincludeglucose, mannoseandfructose.ThepolysaccharidesliquidhasaspecificinhibitingeffectonStaphylococcusaureus, EscherichiacoliandBa-cilussubtilis, aweakinhibitingeffectonSaccharomycescerevisiaeandTritirachiumalbum, andnon-inhibitingeffectonTrichodermaviride, Rhizopusnigricans, Aspergillusniger, CytosporachrysospermaandAlternariaalternate.Theinhibitingefectishigheronbacteriathanonfungi.Keywords　Lactariusvellereus;Myceliumpolysaccharides;Contents;Components;Inhibitingefect
　　绒白乳菇(Lactariusvelereus)属红菇科(Russulaceae)乳
菇属(Lactarius),常与栎属植物形成外生菌根。据报道 , 许多
蘑菇多糖具有抗病毒 、抗细菌 、抗真菌 、抗虫 、抗肿瘤 、抗突变 、
抗衰老 、抗氧化 、降血脂 、增强机体免疫力的功能 [ 1] 。绒白乳
菇虽为有毒真菌 , 但经过浸泡 、煮沸后即可食用 ,其对小白鼠
肉瘤 S-180及艾氏癌的抑制率为 60%[ 2] , 其抗肿瘤效应可
能与多糖的含量及成分有密切关系。本研究对绒白乳菇菌丝
体多糖含量及成分进行了测定 ,并就其抑菌活性进行了深入
研究。国内对松乳菇 、红汁乳菇的多糖研究相对较多 [ 3-6] , 而
未见有关绒白乳菇菌丝体多糖的报道。
1　材料与方法
1.1　试验材料
菌种:绒白乳菇 、杨树叶枯病菌(Alternariaalternate)、绿
色木霉(Trichodermaviride)、黑根霉(Rhizopusnigricans)、黑曲
霉(Aspergillusniger)、杨树烂皮病菌(Cytosporachrysosperma)、
啤酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、金黄色葡萄球菌(Staphy-
lococcusaureus)、枯草杆菌(Bacillussubtilis)、大肠杆菌(Esche-
richiacoli)、白色念球菌(Tritirachiumalbum)均由东北林业大
学提供。
培养基:①PDA培养基———马铃薯 200 g, 葡萄糖 20g,
MgSO4 1.5g, NaH2PO4 3g, 琼脂 20g, 水 1 000mL;②PD培养
1)国家自然科学基金(30271083)和黑龙江省国际合作项目
(WC05C01)。
第一作者简介:计红芳 ,女 , 1978年 5月 ,哈尔滨工业大学 , 博士
研究生。
通讯作者:宋瑞清 ,哈尔滨工业大学 , 博士生副导师 ,东北林业大
学 ,教授。
收稿日期:2006年 8月 11日。
责任编辑:潘　华。
基———在 PDA培养基中去除琼脂;③牛肉膏蛋白胨培养
基———牛肉膏 3g, 蛋白胨 10g, 氯化钠 5g,琼脂 20g, 水 1 000
mL, pH7.0 ～ 7.2;④牛肉膏蛋白胨液体培养基———在牛肉膏
蛋白胨培养基中去除琼脂。
1.2　试验方法
供试菌种培养:绒白乳菇采用培养基②进行液体摇床培
养 ,转速为 120r/min, 25℃培养 20d后 , 8层纱布过滤得菌丝
体;啤酒酵母亦采用培养基②进行液体摇床(120 r/min)培
养 , 25℃培养 24h后备用;其它真菌均采用培养基①, 于 25
℃培养 , 产孢后备用;细菌采用培养基④摇床培养 , 摇床转速
为 120r/min, 28℃培养 24h后备用。
粗多糖提取:将绒白乳菇菌丝体于 50 ℃下烘干 , 粉碎后
100℃水提 3h,提 3次 , 料液比为 1∶50, 提取水溶液浓缩后 ,
真空冷冻干燥。
总糖 、还原糖含量及蛋白含量测定:总糖含量测定采用苯
酚 -硫酸法 [ 7] ,还原糖含量测定采用 DNS法 [ 7] , 多糖含量为
总糖含量减去还原糖含量;蛋白含量测定采用考马斯亮蓝 G-
250法 [ 8] 。
多糖纯化及成分分析:根据多糖类物质易溶于热水而不
溶于高浓度乙醇的特性 , 多糖纯化采用醇析法 , 然后用 Sevage
法去游离蛋白 [ 3] 。取纯多糖 0.1g,适当粉碎后 , 加 4mol/L浓
硫酸 10mL于 100℃水解 8h,配制成终浓度为 0.01g/mL的
糖溶液 , 采用硅胶薄层层析法确定成分 [ 9] 。
抑菌效果测试:采用抑菌圈法 [ 10-12]进行多糖液对供试菌
株生长抑制试验 , 真菌均采用培养基①, 细菌均采用培养基
③,培养 3d后测抑菌圈直径(包括滤纸片直径 1.5cm), 多糖
液质量浓度为 1.0g/mL。
采用悬滴法进行多糖液对真菌孢子萌发抑制试验, 将多糖
液分别与各种真菌孢子悬液(3×106个 /mL)等量混合 , 置于保
湿培养皿中 ,置 25℃下培养 24h后观察。以水作为对照。
DOI :10.13759/j.cnki.dlxb.2007.04.014
孢子萌发抑制率 =[ (对照萌发率 -处理萌发率)/对照
萌发率 ] ×100%。
2　结果与分析
多糖 、还原糖及蛋白含量测定:从 100g绒白乳菇菌丝体
中提取出 21g粗多糖 ,各种糖及蛋白质质量分数见表 1。
表 1　粗多糖中各种糖及蛋白质质量分数 %　
样品 纯化前 纯化后 样品 纯化前 纯化后
总糖 5.03 85.71 还原糖 1.11 1.59
多糖 3.92 84.12 蛋白质 0.58 0.23
　　以苯酚 -硫酸法测定 , 总糖质量浓度 x(mg/L)与吸光度
y之间线性方程为 y=0.003 3x+0.125 5, 相关系数 r=0.997 5,
由此计算出总糖质量分数为 5.03%;以 DNS法测定 ,得到还
原糖质量浓度 x(mg/L)与吸光度y之间线性方程为 y=0.0067x-
0.255 6,相关系数 r=0.997 8, 由此计算出还原糖质量分数为
1.11%;多糖质量分数为 3.92%。以考马斯亮蓝 G-250法
测定 , 得到蛋白质质量浓度 x(mg/L)与吸光度 y之间线性方
程为 y=0.007 2 x-0.075 5,相关系数 r=0.995 1, 由此计算
出蛋白质含量为 0.58%。
21g粗多糖经醇析与去蛋白杂质后得 1.42g纯多糖,经测定
纯多糖中总糖质量分数为 85.71%, 还原糖质量分数为 1.59%,
多糖质量分数为 84.12%,蛋白质质量分数为 0.23%。粗多糖
经纯化后多糖含量提高了约 21倍 ,还原糖含量稍有提高 ,蛋白
质去除率可达 60.34%, 表明纯化的效果较好。
多糖成分测定:以 9种糖为标准样品 ,采用硅胶薄层层析
法分析多糖经水解后的成分。分离的几种糖的比移值(即 Rf
值)分别为 0.202(灰蓝色)、 0.211(黑黄色)、 0.231(棕红
色),经与表 2对照可初步判明为葡萄糖 、甘露糖 、果糖。
表 2　标准糖的薄层层析结果
种类 Rf值 颜色 种类 Rf值 颜色
鼠李糖 0.594 绿黄色 蔗　糖 0.028 黄绿色
阿拉伯糖 0.268 蓝绿黑色 麦芽糖 0.017 黑蓝色
木糖 0.254 黄绿色 葡萄糖 0.206 灰蓝色
果糖 0.224 棕红色 半乳糖 0.039 蓝黑色
甘露糖 0.215 黑黄色
　　多糖液抑菌效果测试:抑菌圈试验结果表明 , 绒白乳菇多
糖液对供试细菌抑制效果好于供试真菌;绒白乳菇多糖液对
金黄色葡萄球菌 、大肠杆菌 、枯草杆菌有一定的抑制作用;对
啤酒酵母 、白色念球菌有微弱的抑制作用;对杨树叶枯病菌 、
绿色木霉 、黑根霉 、黑曲霉 、杨树烂皮病菌无抑制作用(表 3);
悬滴法试验结果表明 ,绒白乳菇多糖液对供试真菌孢子萌发
无抑制作用。
表 3　多糖液对供试菌种的抑制效果 cm　
供试菌种 抑菌圈直径 供试菌种 抑菌圈直径
金黄色葡萄球菌 2.13 叶枯病菌 —
大肠杆菌 1.87 绿色木霉 —
枯草杆菌 1.96 黑根霉 —
啤酒酵母 1.56 黑曲霉 —
白色念球菌 1.60 烂皮病菌 —
3　结论与讨论
经热水法提取的绒白乳菇菌丝体多糖质量分数为
3.92%, 还原糖质量分数为 1.11%;去蛋白纯化后 , 多糖质量
分数为 84.12%, 还原糖质量分数为 1.59%,多糖纯度提高了
约 21倍 , 纯化的效果较好。依据糖标样的 Rf值及颜色 ,初步
判断绒白乳菇菌丝体多糖中含有葡萄糖 、甘露糖 、果糖。该结
果与敖常伟 [ 3]所报道的松乳菇中多糖的成分一致 , 而与柯丽
霞 [ 13]所报道的红汁乳菇与多汁乳菇中多糖的成分略有差别 ,
红汁乳菇与多汁乳菇中多糖的成分主要有葡萄糖 、甘露糖 、半
乳糖 、木糖 、岩藻糖等 , 这可能与种的遗传特性存在差异有关。
凌建亚 [ 14] 、柯丽霞 [ 15]分别对浓香乳菇 、松乳菇的抑菌活
性进行了研究 , 结果表明 2种乳菇对各种细菌 、放线菌 、真菌
均有不同程度的抑制作用。本试验中绒白乳菇菌丝体多糖液
对细菌抑制效果远远好于对真菌的抑制效果 , 对供试真菌生
长及孢子萌发几乎无抑制作用。
据报道 , 许多蘑菇多糖具有抗氧化 、抗肿瘤 、抗病毒 、降血
脂 、增强机体免疫力等各种医药及保健作用 ,例如 ,香菇多糖
具有抗肿瘤 、抗突变 、抗病毒 、降血脂与免疫调节等活性;猴头
菇多糖具有抗肿瘤 、降血糖 、增强机体免疫力等活性;银耳多
糖具有抗衰老 、抗突变 、抗放射线 、降血脂 、降血糖 、增强机体
免疫力等活性;云芝多糖具有抗肿瘤 、抗突变 、抗病毒 、降血
脂 、增强机体免疫功能等活性;竹荪多糖具有降血脂 、抑制肿
瘤细胞生长和提高机体免疫力的活性等等 [ 16] 。绒白乳菇多
糖是否也存在类似的活性 , 还有待于进一步研究揭示。
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42 　　　　　　　　　　　东　北　林　业　大　学　学　报　　　　　　　　　　　　　　　第 35卷