全 文 ：RP-HPLC测定分清五淋丸中齐墩果酸和常春藤皂苷元的含量
王　晔 1 , 　陈建启 2 , 　周　刚1
(1.内蒙古药品检验所 ,内蒙古 呼和浩特 010020;2.乌兰察布市第三医院 ,内蒙古 乌兰察布市 012000)
收稿日期:2006-03-02
作者简介:王　晔(1968～ ),女 ,副主任药师 ,从事药品检验工作 ,电话:0471-6969644。
关键词:分清五淋丸;齐墩果酸;常春藤皂苷元;HPLC
中图分类号:R927. 2　　　　　文献标识码:B　　　　　文章编号:1001-1528(2007)06-0923-02
　　分清五淋丸收载于《中国药典》2005年版一部 [ 1] , 具有
清热泻火 , 利尿通淋之功效。现尚无含量测定方法 , 本实验
参照《中国药典》2005年版一部相关品种项下和有关文献资
料 , 对处方中主药木通所含的齐墩果酸和常春藤皂苷元进行
了 HPLC法含量测定的试验摸索 , 结果满意。可作为分清五
淋丸质量控制指标。
1.样品来源:由内蒙古包头中药有限责任公司提供(批号:
20050601、 20050602、 20050603、 20050612、 20050614、
20050616、20050620、20050621、20050622、 20050623)。
2.仪器与试药:美国 A lltech高效液相色谱仪 , M 626输液泵 ,
UV IS-201型检测器;齐墩果酸和常春藤皂苷元对照品由中
国药品生物制品检定所提供;甲醇为色谱纯试剂;冰醋酸 , 三
乙胺均为分析纯试剂;水为超纯水。
3.色谱条件:A lltech RP-C18色谱柱 (5 μm, 4. 6 mm ×250
mm);流动相:甲醇-水-冰醋酸-三乙胺 (87 ∶13 ∶0. 04 ∶
0. 02);检测波长:210 nm;流速:1. 0 mL /m in;柱温:室温 。
4.含量测定
4. 1　对照品溶液的制备:精密称取齐墩果酸对照品 、常春藤
皂苷元对照品适量 , 加甲醇制成每 1 m L各含 0. 5 m g的混合
溶液 , 即得。
4. 2　供试品溶液的制备:取本品 , 研细 , 取约 10 g, 精密称
定 , 加甲醇 50 mL, 超声处理(功率 250W , 频率 50 kH z)30
m in,滤过 ,残渣用甲醇适量洗涤 ,合并滤液与洗液 ,回收溶剂
至干 , 残渣加水 10 m L溶解 , 用水饱和正丁醇萃取 3次 , 每次
20 mL合并提取液 ,蒸干 , 残渣加甲醇 20 mL,盐酸 2 mL加热
水解 4 h, 水解物加水 10 m L, 用三氯甲烷振摇提取 2次 , 每
次 20 mL,合并提取液 , 回收溶剂至干 , 残渣加甲醇溶解并定
量转移至 5 mL量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤
液 , 即得。
4. 3　测定法:分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 10
μL, 注入液相色谱仪 ,测定 , 即得。
5.方法学考察
5. 1　线性关系考察:分别精密称取齐墩果酸对照品 、常春藤
皂苷元对照品适量 , 加甲醇制成每 1 m L各含 1 mg的混合溶
液。精密吸取该溶液 0. 5, 1. 0, 2. 0, 3. 0, 4. 0, 5. 0 mL置 5 m L
量瓶中 ,加甲醇稀释至刻度 ,摇匀 , 精密吸取 10 μL分别注入
液相色谱仪 ,测定峰面积值。结果对照品峰面积 Y与其进
样量 X(μg)之间呈良好的线性关系 , 齐墩果酸及常春藤皂
苷元线性范围分别为 1. 021 ～ 10. 21 μg和 0. 996 ～ 9. 96 μg,
回归方程分别为:Y =2. 75×106X - 9. 23×104 , r=0. 999 2, Y
=2. 99×106X - 9. 09×104 , r=0. 999 2。
5. 2　精密度试验:精密吸取供试品 (批号:20050601)溶液 ,
连续进样 5次 ,记录峰面积积分值。结果齐墩果酸与常春藤
皂苷元的 RSD分别为 0. 40 与0. 50 。
5. 3　稳定性试验:精密吸取供试品 (批号:20050601)溶液 ,
分别于 0, 4, 8, 12 h进样 , 记录峰面积积分值 , 齐墩果酸与常
春藤皂苷元的 RSD 分别为 0. 47 与 0. 75 , 结果表明供试
品溶液在 12 h内稳定。
5. 4　重复性试验:取供试品 (批号:20050601)5份 , 分别按
[含量测定 ]项下方法操作并测定含量 , 齐墩果酸和常春藤
皂苷元总含量的平均值为 0. 432 m g /g, RSD 为1. 20 。
5. 5　回收率试验:采用加样回收法 ,精密称取已知齐墩果酸
和常春藤皂苷元总含量的供试品 (批号:20050601)5份 , 分
别精密加入齐墩果酸和常春藤皂苷元对照品适量 , 按 [含量
测定 ]方法测定 , 计算 ,齐墩果酸和常春藤皂苷元的平均回收
率分别为 98. 06 和 97. 84 , RSD 分别为 0. 31 和 1. 13 。
结果见表 1。
表 1　 回收率试验结果(n =5)
成分 供试品含量 /m g
对照品加
入量 /m g
测得量
/m g
回收率
/
平均回
收率 /
RSD
/
0. 961 1. 811 97. 92
齐墩 0. 951 1. 801 97. 92
果酸 0. 954 0. 868 1. 804 97. 92 98. 17 0. 51
0. 954 1. 805 98. 04
0. 966 1. 826 99. 07
1. 329 2. 466 98. 69
常春藤 1. 315 2. 742 100. 43
皂苷元 1. 319 1. 152 2. 458 98. 87 98. 64 1. 44
1. 319 2. 430 96. 44
1. 336 2. 474 98. 78
5. 6　样品含量测定:按上述 [含量测定 ]项下方法操作并测
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2007年 6月
第 29卷　第 6期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
June 2007
Vo .l 29　No. 6
定含量 , 结果见表 2。HPLC图谱见图 1。
表 2　 含量测定结果(n=3)
批号 取样量 /g 含量 /m g /g 平均含量 /m g /g
10. 256 9 0. 447
20050601 10. 002 8 0. 426 0. 434
10. 012 3 0. 428
10. 001 2 0. 425
20050602 10. 301 6 0. 447 0. 436
10. 252 6 0. 437
10. 331 8 0. 446
20050603 10. 005 6 0. 428 0. 437
10. 129 8 0. 436
10. 002 3 0. 436
20050612 10. 1136 0. 439 0. 435
10. 102 8 0. 431
10. 056 9 0. 454
20050614 10. 138 8 0. 459 0. 455
10. 201 1 0. 451
10. 458 8 0. 464
20050616 10. 002 3 0. 427 0. 440
10. 012 1 0. 430
10. 389 8 0. 444
20050620 9. 923 5 0. 412 0. 425
10. 001 1 0. 418
10. 423 3 0. 453
20050621 10. 356 8 0. 454 0. 453
10. 312 3 0. 451
10. 483 3 0. 447
20050622 10. 002 1 0. 430 0. 435
10. 023 9 0. 428
10. 000 5 0. 420
20050623 10. 005 6 0. 422 0. 420
10. 019 8 0. 419
6　讨论
6. 1　检测波长的选择:取对照品溶液 , 在 400 ～ 190 nm 波长
范围内进行光谱扫描 , 结果齐墩果酸 、常春藤皂苷元在 205
nm波长处都有最大吸收 , 但由于 205 nm 处溶剂峰干扰较
大 , 经试验选用 210 nm为测定波长 , 以减少溶剂对皂苷元测
定的干扰。
6. 2　流动相的选择:参考《中国药典》2005年版一部木通项
下:以甲醇-水-冰醋酸-三乙胺(87∶13∶0. 04∶0. 02)为流动
图 1　齐墩果酸和常春藤皂苷元 HPLC色谱图
A.对照品　B样品　C阴性样品
1.常春藤皂苷元　2.齐墩果酸
相 ,其中冰醋酸可产生弱酸性环境 , 有利于样品中酸性物质
的分离 ,既可使齐墩果酸与常春藤皂苷元得到良好的分离 ,
又能与其他成分达到基线分离;三乙胺可良好地改善峰形 ,
故选择该流动相。
6. 3　样品提取条件的选择:分别考察了索氏提取 、加热回流
提取 、超声提取等 3种方法对含量的影响 , 索氏提取 4 h, 超
声提取 0. 5 h,回流提取 1 h的结果基本一致 ,而超声提取方
法简单易行 ,且提取副产物少 ,所以选用超声提取法。
参考文献:
[ 1] 　中国药典 2005年版一部 [ S] . 2005:393.
启　事
因邮政资费的增加及审稿成本的提高 ,自 2007年 1月 1日始 ,本刊审稿费调整为每篇 50元。
　　　　　特此敬告
中成药编辑部
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2007年 6月
第 29卷　第 6期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
June 2007
Vo .l 29　No. 6