全 文 ：药学学报 A e ta p ha rm a e eu t iea s , n i e a 19 9 5 ; 3 0 ( 1 1 ) : 8 3 1~ 8 3 7
用核磁共振新技术测定日本续断皂试 E ,的结构
魏 峰 · 雁芝琴{ 高 明 ’ ` 缪振春 ” `
(北京医科大学药学院生药学教研室 , 北京 1 0 0 083 ; ’ . 齐齐哈尔市中医院 , 黑龙江 1 6 10 0 5
· ’ . 军事医学科学院核磁共振实验室 , 北京 1 0 0 8 5 0)
摘要 从日本续断 众那比璐 尹产砚泊朋 iM q . 根的乙醉提取物中得到一个新三菇皂试 ( 5糖试 ) , 命名
为 日本续断皂贰 E l ( aJ 加n d j哪oP n in E , ) 。 用化学方法及 ’ H N M R , ’ 3 e N M R , ’ H 一 ’ H e OS Y , 一维多重接力
C o s Y
,选择性远程 D E盯 和三重共振 N O E 差谱等方法 , 鉴定其结构为 3一。 一 r, 一 L一 毗喃鼠李糖 (1 ~ 3 )一斗
压毗喃葡萄糖 l( ~ 3 ) 一。 一 L 一毗喃 鼠李糖 l( ~ 2 -) a 一 L一毗喃阿拉伯糖一常春藤皂贰 元 2 8一 o 一序 D一毗喃葡萄
糖贰 。
关键词 日本续断 ; 常春藤皂贰元 ; 日本续断皂试 E .
日本续断 从产虹 c朋 厂卿~ M iq . 的根在少数地区作为续断使用 〔` 〕。 其分布广泛 , 资源十分
丰富 。 继川续断 D . 哪尸画由吕 C . Y . C hen g et T . M . iA . 根的化学成分研究侧之后 ,我们从日本续
断根部的乙醇提取物中分离到三个三菇皂贰 l , n 和 川 (都是 5糖贰 ) 。 经光潜和理化常数分析 ,
鉴定化合物 1 为川续断皂贰 E圈 , 化合物 I 和 n 为新的天然化合物 ,根据分子中结合糖的数 目
分别命名为日本续断皂贰 ( aJ op dn isaP op in n) E ;和 E : 。 本 文利用前文川提到的核磁共振新技术
和光谱规律 ,报道化合物 E ;的结构 。 化合物 n 的结构待续报 。
本文于 19 9 4年. 月 2 0日收到 。
, 砚 t : 沈旧药科大学植化教研室 , 沈旧 1 0 15 。
DOI : 10. 16438 /j . 0513 -4870. 1995. 11. 006
药学学报 Ae ta p ha om e ae u ti e a S s ni e a 15 9 9; 3 0 (1 1) : 83 1 一 3 7 8
E ,为白色粉末 , iL e be r m an n 和 M iol hs 反应均呈 阳性 。 其 ” C N M R 谱和常春藤皂贰元的
` ; ,
c N M R谱比较 , 示 E ,的贰元为常春藤皂贰元 。 其酸水解液经径 向纸色谱 ,检 出葡萄糖 ( lG u ) 、
鼠李糖 (R ha m ) 和阿拉伯糖 ( rA a ) 。 其 ’ 3 C N M R 谱 (表 )] 显 示有 5个糖端基碳信号 ( 6 1 06 . 4 ,
1 0 5
.
0
,
10 2
·
9
,
1 0 1
·
3
,
9 5
·
7 pp m )
, 证明为 5糖贰 。 其中 6 1 0 2 · 9和 1 0 ] · 3是 R h a m 的端基碳信
号 ; 其 ` H N M R 谱显示 , 6 6 . 2 1和 6 . 2 7为 R h a m 的端基氢信号 ,所以 , E ,有二个 R h a m 。 6 6 6 . 7是
rA
a 的 5位碳信号 , 6 62 . 2是二个 lG u 的 6位碳信号 。 其 ` 3C N M R 谱与常春藤皂贰元的 ` 3 c N M R谱
比较 , 可知 C 一 28 拨基碳信号 由 6 8] .0 3移至 176 . 4 P m · 说明 C 一 28 成醋试 ; C 一 3碳信影田 。 :73 . 7
移至 8[ . 1 P m , 而其 C 一 23 碳信号则 由 6 6 .8 3移至 63 · 9 P m , 提示其 C 一 3也含有糖链 。 所以 E ,为
双糖链皂贰 , 用 5 % K O H 水解 ,水解液 中只检 出 lG u 。 在其 ` H N M R 谱中 , 糖的端基氢大都重迭
在其它氢的信号中 , 无法准确地推测其结构 。 为此 ·将 E ,全 乙酞化 。 全 乙酞化物的` HN M R 谱
(图 I A ) 中 ,谱峰重迭减少 ,各个糖的端基氢都得到 了较好的分离 , 可准确地推测其结构 。 根据
E ,的全乙酞化物的 ` H N M R 谱 (图 I A ) , 采用核磁共振新技术 , 按前报 2[] 报道的光谱规律 ,确 定化
合物 E ,的结构 。
介 b 1 1. C N M R e h e m i c a l s h i f st o f sa Po g e n i n a n d s u助 r m ul e t i es o f
j a op
n d i Psa op
n i n E
, i n C
, D s N a n d t h e i r a s i gn m
e n st
C E - S u 助 r m o i e 盆i e s E ,
1 3 9
.
1 C 一 2 8一 O 一 s u ga r
2 2 6
.
1 G l u 一 1 9 5
.
7
3 8 1
.
1 2 7 3
.
7
4 4 3
.
5 3 7 8
.
9
5 4 7
.
5 4 7 1
。
7
6 1 8
.
1 5 7 8
。
5
7 3 3
.
1 6 6 2
。
2
8 3 9
.
9 C
一
3
一 O 一 s u即 r
9 4 8
.
2 A r a
一 1 1 0 5
.
0
1 0 3 6
.
9 2 7 5
.
4
1 1 2 3
.
8 3 7 3
.
1
1 2 12 2
.
9 4 6 9
.
6
1 3 ] 4 4 1 5 6 6
.
7
1 4 4 2
.
1 R h a m 一 1 1 0 1
。
3
1 5 2 8
.
3 2 7 1 7
1 6 2 3
.
6 3 8 3
.
6
1 7 47
。
0 4 7 2
.
7
1 8 4 1
.
7 5 6 9
。
9
1 9 4 6
.
1 6 1 8
.
4
2 0 30
.
7 G l u
一
1 1 0 6
.
4
爪 3 3 . 1 2 7 4 。 2
2 2 3 4
.
0 3 8 2
。
4
2 3 6 3
.
9 4 7 1
.
0
2 4 1 4
.
2 5 7 6
。
l
2 5 16
。
2 6 6 2
。
2
2 6 17
.
5 R h a m
一
1 1 0 2
.
9
2 7 2 6
.
4 2 7 2
.
5
2 8 17 6
.
4 3 7 5
.
2
2 9 3 3
.
1 4 7 4
。
l
3 0 2 3
.
4 5 6 9
.
5
6 1 8
.
6
药学学报 ^ ct ap h ar m a e e ut , e a s i n i e a 1 9 9 5 ; 3 0 ( 2 1 ) : 8 3 1一 8 3 7
4
.
7 5 R一 l
3
.
7 1 0,
一
3
勺目川翻、 人动` 一礴畔 , 睡幼动侧
P别M
, 一一丁一一下一一 r 一一了一一飞一一一丁一 - 一 -一 丁 一 下一一下一飞一 -一 r 一 ~ 「 一丁 ~ , 一2的 15 0 1 0 0 5 0 0lF g 1 A . ’ H N M R s eP ct ur m o f ep r a “ t y la t ed aj op n d i sp a op n i n E : ; B一 G · N O E D S a n d
sc l
e e it ve l
o n g r a n g e D E P T s少戈 t ar of 伴ar c e yt 扭 t曰 aj op n d i Ps a ep n i n E , ·
用光谱方法鉴别搪 : E .中所含的 lG u( G ) , A ar ( A ) 和 R ha m ( R ) 的全乙酸化物 的结构差别
在其 ` HN M R 峰型上也能反映出来 ,据此可达到 鉴别它 们的 目的 。 在图 1c 中 , 当照射搪体的端
基质子 ( A 一 1) 信号 6 4 . 30 时 , A 一 3和 A 一 a5 分别为糖体内 3一 H 和 s a 一 H N O E 信号 。 由于 3一 H 表现
为 a 一 e 型双二重峰 ,而 5a 一 H 又表现为变宽的双峰 , 提示 4一 H 位于 e 键 , 据此可确定它是 a 一 A ar 。
在图 I B 中 ,对 6 4 . 6 1的端基氢 ( G , 一 l )进行照射时 , 其 6 3 . 6 2的 s a 一 H ( G ` 一 s a ) N O E 信号表现为
多重峰 (没有完全裂分开 ) , 6 3 . 71 的 3一 H (Ol 一 3) 则为 a 一 a 型三重峰 , 因而为 卜葡萄糖 。 图 Z B一 D
的一维多重接力 COS Y 实验结果也可证明这个 lG u 的存在 , 其选择激发频率置于 6 4 . 61 糖体
端基质子双峰上 。 图2B 为一维 c os y 谱 , 。 4 . 97 的 a 一 a 型三重峰是端基氢的偶合相关峰 ,故归
属于 2 一 H 。 图 ZC 和 D 为一维单接力 、 双接力 COS Y 谱 ,分别产生 3一 H 和 4一 H 的磁接力转移信号 。
由于 -2 H ~ 4一 H 均为 a 一 a 型三重峰及图 lB 中的实验结果 , 可以确定 6 4 . 61 是 份葡萄糖 ( G ` )的
端基盆信号 ( G ` 一 1 ) . 图 I A 中的 6 5 . 5 是另一个葡萄塘 ( G ” )的端基氢信号 ( G ” 一 1 ) 。根据 ’ H 一 ` H
C O 6 Y 谱 (图 3 ) , 6 1 . 1 0和 1 . 1 3甲基质子双峰分别与 6 3 . 8 3 ( R 一 s a )和 6 4 . 0 5 ( R , 一 s a )塘体质子
多重峰显示偶合相关 ,表明有二个 R ha m 。 根据三重共振 N o EDS 谱 ( 图 1E 和 )F 可知二者都是
药学学报 A et aPh 。 r m a e e ut 一 e a s in i e a 1 9 9 5 ;0 3( 1 1 ): 8 3 1~ 8 3 7
a一构型 。
互
、七、户沪认J _一二J犷三一一少、、 。加人气 /: 3. l 7 G` 一 3i认犯t七 /、广了·了二 。
、 一一一一一一一一一一丁一一一一一 -, .——4 . 61 G , 一 1
一 ~一一 J一一_一 . 舒_ 、 ~「 「— 了一 二— — - 一
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{ }一一一荔浏心一儿口}
5
。
5
F ig 2 A
.
IH N M R
r e la y C O S Y s ep
e tr a
s ep e tr um
o f ep r a ce t y 扭沈d aj PO n id 户祖op n in E : ; B ~ G . I D m u l ti P le
of ep ar ce yt at t ed 扭卯 n id 拼必op n in E ; .
用光谱方法测定糖链结构 : 图 lC 为照射 6 4 . 30 A r a 端基质子 ( -A l) 的 N oE 差谱 。 在 己
3
.
4 9 处出现双二重峰 ( S 一 3 ) ; 在 ’ H 一 IH COS Y 谱 (图 3) 中 , 6 3 . 49 处的氢与皂贰元上 的氢 ( 6
1
.
7 8) 显示偶合相关 , 即 6 3 . 49 处的氢是皂贰元上的 3一 H , 故 -a -L 户J a 与皂贰元以 1~ 3贰键相连
接 。 图 lE 为照射 6 5 . 15 R ha m 端基质子 ( R ` 一 l) 的 N o ED s 谱 , 在 6 4 . 0 处出现一个 a 一 a 型三重
峰的糖体间 N O E 信号 。 由 ’ H 一 ` H COS Y 谱 ( 图3) 可决定 6 4 . 0 N OE 信号为 A r a 的 2一 H ( 因为 6
4
.
30 的 A ar 端基质子 A 一 1和 6 4 . 0 的氢显示偶合相关 ) , 因此 ,该 R h a m 与 户“ 是以 1 , 2贰键连
接 。 在图 B] 中 ,照射 6 4 . 6 1 ( lG 一 l) 时 , 分别在 6 4 . 06 和 3 . 71 显示 N oE 信号 。 其中 6 4 . 06 为 -a e
型双二重峰 ,这种峰型只限于 A ar 的3一 H 或 R ha m 的 3一 H , 而 六J a 的 3一 H 信号位于 6 4 . 9 7非贰化
区 ( 见图 I C ) , 故 6 4 · 06 是 R ha m 的 3一 H N O E 信号 , 即端基氢为 6 4 . 61 的 lG u 连接在端基氢为 6
5
.
15 的 R h a m 3位 。 根据图 2一维多重接力 C oS Y 实验结果 ,可知 6 3 . 71 是端基氢为 6 4 . 61 的
G l u 3
一
H
, 处于贰化区 。 在图 10 中 , 当照射 6 3 . 7 1 (e ` 一 3 )时 , 在 6 4 . 7 5 ( R , 一 1 )处产生 N O E 信
号 , 而在图 ] F 中 , 当照射 R h a m 的端基氢 6 4 . 7 5时 , 在 6 3 . 7 1 ( G ` 一 3 )处产生 N o E 信号 , 故 6
4
·
7 5 ( R
, , 一
1 ) 的 R h a m 和 己 4 . 6 1的 G lu 3位相连 。 对 6 5 . 5 5 ( G ” 一 )质子信号加软脉冲的选择性远
程 D E P T 谱 (图 I G ) , 因只显示一个皂贰元 c 一 28 的极化转移信号 ,故在化合物中该 lG u 是以 卜
型与皂贰元 c 一 28 连接成醋贰 。
药学学报 A et a Ph ar m a e e ut i e a S in ie a 1 9 9 5 ; 30( 1 1 ) :8 3 1~8 3 7
_、掀一 {~￡驾檄毓一 卿一
豪叠
季岁兮
l。匕一沂奋墓
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、
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六犷 — ~ — 止. 『 厂 一一 n
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切 · 回 戮 ;丢丢
F i s 3 ’ H 一 ’ H C O S Y s pe e t r u m o f pe r a e e t y la t曰 扭po n d i Pas po n i n E 、 ·
综上所述 ,并结合化合物 E 、的 F A B 一 M S 测得的分子量为 1 2 2。 , 推定 E ,的结构为 : 3一 o 一 a 一吞
毗喃鼠李糖 l( , 3) 一卜 D一毗喃葡萄糖 l( 一 3 )一 a一 L一毗喃鼠李糖 (1 ~ 2 )一 a 一 L一毗喃阿拉伯糖 一常春藤
皂贰元 28 一。 一卜 D一毗喃葡萄糖贰 。
实 验 部 分
熔点用 x T一 4型显微熔点测定仪 ,温度未校正 。 N M R 谱用 J N M 一 G x 40 0型核磁共振仪 ,
官M s 为内标 . PA B 一 M s 用 EJ O L D x 一 30 型质谱仪 。 柱色谱和薄层色谱所用硅胶均为青岛海洋
化工厂生产 。 溶剂系统 : ( 1 ) C H c 一3一 M e 0 H (不同 比例 ) , ( 2 ) n 一 B u OH 一 A e 0 H一 H Z o ( 5 , 1 , 4 ) 。
显色用 10 % H多。 ; 乙醇液喷雾 ,于 1 10 ℃加热 10 m in 。 实验材料采自北京市密云县坡头村 ,楼之
岑教授鉴定植物标本 。
二分离取日本续断根粗粉 1 . 5 k g , 用 6 0% E t 0 H 浸泡 1 5 d , 过滤 ,再加 6 0 % E t o H 浸泡 7 d , 过滤 ,
国收 tE o H 至无醉味 , 依次用 tE o A c 和 ; 一 B u o H 萃取 。 回收 n 一 B u 0 H , 得 n 一 uB 0 H 萃取物 6 5 9 。 将
毕服 入 ct ap h r a, n a e e u r ,。 a s Ln ; c 。 1 9 9 5 ; 3 0川 ) : 8 3 1一 8 3 7
其全部进行硅胶柱色 i普, 月 e He l 3一 M e o H ( 1 0 : z , 1 0 : 3 . 10巧 , 10 : 7 , 一。 : 8 )依次洗脱 . 每份
1 0 0 m l
, 根据 T L C 改变溶齐d比例 。 合并 C HC I ,一M e o H ( 1 0 : 5 )中的第7 0~ 1 0 3份 , 第1 5 1~ 19 5份
和第2 。一 28 1份 。 将第 70 一 土03 份再次进行硅胶柱色谱 ,用溶剂系统 ( 2) 洗脱 , 每份 50 ml , 合并
第 105 一 1 5 2份 , 得化合物 E 、 。 从第1 51 一 1 95 份中得化合物 E Z 。 将上述第220 ~ 28 1份进行硅胶柱
色谱 ,用溶剂系统 ( 2 。洗脱 . 每份 5 0 m l , 合并第 1 4一 1 8 7份 ,得川续断皂贰 E 。
鉴定
E , 白色粉末 , m p 2 2 3一 2 2 6 C 。 溶于 M e o H , e 5H 。N 和 H : o 。 L ie比 r m a n n 和 M o l is h 反应均
呈阳性 。 元素分析分子式 e s oH , 。 0 2 6 · 3H Zo , 计算值% : e 5 5 . 5 7 , H 8 . 0 1 ; 实测值% : e 5 5 . 6 4 ,
H 8
.
0 4
。
F A B
一
M S 涣l得分子量为 1 2 2 0 。 全乙酞化物的 ’ H N M R ( e仪 l , ) 6 p pm : 4 . 3 0 ( I H , d , J =
6
.
7 H z
.
A r a l
一
H )
.
5
.
] 5 ( I H
.
b r s
,
R h a l
一
H )
.
4
.
6 1 ( I H
.
d
,
J 一 8 . 3 H z , G l u l 一 H ) , 4 . 7 5 ( I H . b r s .
R h a ]
一
H )
,
5
.
5 5 (
. 一H , d . J = 7 . g H : , G l u l 一 -11 ) 。 FA B一 M S m / z : ] 2 5 9 ( M + K ) 十 , j 0 9 7 (M 丰 K 一
R h a )
.
8 1 6
·
6 7 4
·
5 0 9
’ 3C N M R 数据见表 1 。
乙酞化物的制备 取 E 4 0 m g , 加 A e Z o 一 c ; H : N ( 2 : 一) 1 2 m l , 室温放置 7 d , T L c 检查为一
个斑点时 ,减压回收溶剂 , 50 % tE o H 重结晶 , 得全乙酞化物 。
酸水解 取 E , 10 m g , 加 10 % 玫 5 0 ; s ml , 于沸水浴中加热 4 h , 冷却 ,放置 , 供糖的鉴定
用 。
碱水解 取 E ; 5 0 m g , 加 5% KO H 一0 m l , 沸水浴中加热 l h , 放冷 , 用 1 0% H多o 。调至中
性 ,减压蒸除溶剂 ,得残留物 ,供糖的鉴定用 。
糖的鉴定 用径向纸色谱 , 酸水解液点样 , 用 : 一 B u o H一 e . H一 e 5H SN一 H : o ( s : l : 3 : 3 )展
开 , 草酸一苯胺显色 , lG u 和 R ha m 显黄色 , A ar 显红色 。 fR 值分别为 lG u 0. 50 , R h a m 0. 6 和
rA
a .0 4 0
。 碱水解液点样 , lG u fR 值为0 . 50 。 以上三种糖的 fR 值及显色均与相应的对照品一
致 。
致谢 中国生物制品检定所质谱室代测 F A砂 M S , 中国科学院化学研究所元素分析室代做元家分析 。
参 考 文 献
1 中国医学科学院药物研究所等编 . 中药志 , 第二册 . 北京 : 人民卫生出版社 , 19 82 : 53 9
2 魏峰 ,楼之岑 ,刘一民等 . 用核磁共振新技术测定川续断皂贰 F 和 H l两个新皂贰的结构及光谱规律研究 .
药学学报 , 1 99 4 , 2。 : 5 2 1
药学学报 ^e ta p ha rm a e o u tie a S i nie a 19 9 5 ; 3 0 (] 一) : 83一 837 37 8
A P PI LC A nO 0 N FE NW E C T H NIQU ES O F NM RI N T HE S TU RC TU E R
E U C I L DA TI O O N F JA O P NI S D PA O PI NE N; IS O LA E T D FRO M
DI PS A C U S JA PO NI C U S M i q
.
Fw o i
· , 匹…回 , M G ao “ a n d Z C M a` o `
( & 流。灵 oj l、 叩 n o c e 子泛。 l 从 ,汾刀哪 · 撇 .廊 g 」了习二耐 子诫 ,。威 , , Z如夕, 夕 1 0 08 3)
A BS T R A C T A n e w t r i te r eP n o i d as op n i n
, n a m ed 孙po n d i详砚 po n i n E 孟 ( 5 s u ga r s ) , w a s is o la t e d
f rom th
e e ht a n ol i e e x tr ac t o f t h e r o o st o f 众那配哪 厂脚己。 诵q . hT e s t r u e t u r e w a s e l u e id a t ed by
c h e m iea l an d s ep ct ar l m e ht ods
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9
.
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H N M R
, 1 3 CN M R
, I H
一 ] H COS Y
,
I D m u lt iP le r e l a y COS Y
,
se le e t iv e lon g r a n ge D E盯 a n d N O EDS , t o be 3一 0 一 以一 L 一 r h a m n o Py r a n os y l ( 1” 3 ) 一卜D一 g l u e o P y r a n o s y l
( l ” 3 )一 a 一 L 一 r h a m n o Py r a n os y l ( 1` 2 )一以一 L 一 a r a bi n o Py r a n o s y l一h e d e r a g e一11一1 2 8一0 一纬一 D一 g l u e o Py r a n o s id e .
K e y w o r ds 从夕& 止创招 声卿 r 潞 ; H e d e r a g e n i n ; J a OP n d i Psa po n i n E I
.
T o w h o m e o r r器OP n d e n e e s h o u l d 吮 a d d r e汉 d ; P r es n t a d d r e s s : D e P a r t n l e n 「 o f P h y t o e } l e n 飞 l s t r y , S h e 一l y a 一1 5 ;
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Q l q ih a r
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S h e n y a n g 1 1 0 0 1 5
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r a ot r y o f N M R
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