全 文 ：网络出版时间:2015 － 11 － 24 11:00 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20151124． 1100． 038． html
三叶青黄酮经 p38MAPK和 NF- κB途径抑制老年小鼠急性肺损伤
刘丹丹1，2，曹 纲1，张 琦2，叶夷露2，韩立凯3，葛卫红1
(1．浙江中医药大学药学院，浙江 杭州 310053;2．浙江医学高等专科学校基础医学部，浙江 杭州 310053;
3．浙江省人民医院病理科，浙江 杭州 310046)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2015． 12． 019
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2015)12 － 1725 － 06
中国图书分类号:R-332;R284． 1;R322． 35;R329． 25;R563;
R563． 8
摘要:目的 探讨三叶青总黄酮(RTFs)对老年小鼠急性肺
损伤(ALI)的保护作用及可能机制。方法 采用老年
C57BL /6J小鼠支气管滴注脂多糖(LPS)诱导 ALI 模型，三
叶青黄酮灌胃给药 3 d。取支气管肺泡灌洗液(BALF)，瑞氏
－吉姆萨染色计算白细胞数，ELISA 检测炎症因子水平;
ELISA和 Western blot分析肺组织 MAPKs、NF-κB蛋白表达，
TransAM检测核蛋白 NF-κB 活性。结果 支气管滴注 LPS
成功诱导 ALI模型，三叶青黄酮可明显减少 BALF 中白细胞
和中性粒细胞数(P ＜ 0. 01)，降低 IL-1β、IL-6、IL-12p40、
TNF-α和 sTNF-R1 的分泌水平(P ＜ 0. 01)，改善肺组织病理
损伤。三叶青黄酮明显抑制肺组织 p38MAPK、NF-κB 的磷
酸化及 NF-κB的 DNA结合活性(P ＜ 0. 01)。结论 三叶青
黄酮抑制 p38MAPK、NF-κB炎症通路，保护 LPS诱导的老年
小鼠 ALI。
关键词:三叶青;黄酮;p38MAPK;NF-κB;脂多糖;急性肺损
伤;老年小鼠
收稿日期:2015 － 07 － 08，修回日期:2015 － 09 － 18
基金项目:浙江省中药现代化专项资助(No 2010350)
作者简介:刘丹丹(1978 －)，女，博士生，副教授，研究方向:中药药
理学，Tel:0571-87692676，E-mail:7559220@ qq． com;
葛卫红(1969 －)，男，博士，教授，博士生导师，研究方向:
中药新产品开发与研究，通讯作者，Tel:0571-86613537，
E-mail:geweihong@ hotmail． com
急性肺损伤(acute lung injury，ALI)/急性呼吸窘
迫综合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)
是临床上常见的呼吸系统急危重症之一，具有发病
急、进展快、病情凶险、病死率高等特点［1］。我国人口
日趋老龄化，老年 ALI的发病率是我国总人口发病率
的 110多倍，严重危害老年患者的身体健康。大量临
床资料分析发现，革兰阴性杆菌感染是引起 ALI，并
导致死亡的主要原因之一。内毒素是革兰阴性杆菌
细胞外膜成分之一，主要致病物质是脂多糖(LPS)。
抗生素可杀灭侵入机体的细菌，但对细菌释放的内毒
素无作用，应用抗生素使细菌裂解和死亡后，可释放
更多的 LPS［2］。MAPKs和 NF-κB是 LPS引起炎症的
两条主要信号通路。MAPKs家族成员主要包括 p42 /
44ERK、JNK和 p38MAPK［3］，均参与机体炎症反应的
发生发展。NF-κB是重要的核內转录因子，在 ALI病
变过程中可引起多种炎症因子的大量释放。因此，以
MAPKs和 NF-κB为靶点的 ALI治疗药物成为当前的
研究热点。本研究旨在探讨三叶青黄酮对 ALI 的保
护作用及其在 MAPKs 和 NF-κB 信号通路上的可能
作用机制。
1 材料与方法
1． 1 材料 实验动物:采用 22 月龄 C57BL /6J 小
鼠(购自上海斯莱克实验动物有限公司)，体质量 45
～ 50 g，随机分为 4 组:对照组、模型组、低剂量组、
高剂量组，每组 14 只。实验试剂:LPS(L2880，大肠
杆菌 055:B5)购自美国 Sigma 公司;Bradford 蛋白
定量试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司;小鼠炎
症因子和 MAPKs信号分子 ELISA 检测试剂盒购自
上海艾莱萨生物科技有限公司;核蛋白抽提和 NF-
κB活性检测试剂盒购自美国 Active Motif公司。
1． 2 三叶青总黄酮的制备 称取三叶青(购自浙
江中医药大学附属医院药房)饮片粗粉 50 g，置于
烧瓶中，加入 5 倍量的体积分数为 0. 6 的乙醇溶液，
水浴提取 2 次，每次提取 1. 5 h，趁热抽滤，滤渣按上
述操作重复提取 1 次。合并提取液，三叶青总黄酮
得率为 33. 2 mg·g －1。旋蒸除去乙醇，得到粗提物
浓缩液，溶于水，利用 HPD826 吸附树脂对三叶青总
黄酮粗提取物进行纯化，收集洗脱液，旋蒸，真空干
燥得三叶青纯化物。称取一定量的纯化物，用乙醇
定容于容量瓶中，得到三叶青纯化物中总黄酮纯度
为 516. 2 mg·g －1。
1． 3 ALI 模型的诱导及给药 参考前人方法［4］，
用 400 μg·g －1的水合氯醛小鼠腹腔注射，麻醉后仰
卧于 45°倾斜的平板上。镊子轻轻拉出小鼠的舌，
移液枪吸取 1 g·L －1的 LPS，以 2. 5 μg·g －1体重的
剂量，滴于小鼠咽后壁，马上捏住小鼠鼻子。20 s
后，松开舌及鼻，放于笼中让其自然苏醒。实验组同
·5271·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12):1725 ～ 30
时灌胃给予三叶青黄酮 40 μg·g －1(低剂量组)和
80 μg·g －1(高剂量组) ，对照组分别给予相等剂量
的生理盐水。持续给药 3 d。
1． 4 支气管肺泡灌洗液(BALF)及肺组织匀浆的
获得 给药 3 d后，7 只小鼠行颈部手术分离气管进
行插管，以 0. 5 mL PBS灌洗 3 次，收集灌洗液，离心
BALF，上清于 － 80 ℃保存，待 ELISA 检测。沉淀用
PBS悬起，血细胞计数仪计算白细胞总数，用瑞氏 －
吉姆萨染色进行细胞分类。取出另 7 只小鼠肺组
织，左肺于 40 g·L －1多聚甲醛磷酸盐缓冲液固定待
病理切片检查。右肺用组织匀浆器研磨后，分别提
取组织总蛋白和核蛋白，保存于 － 80 ℃冰箱中，用
于信号分子表达和活性测定。
1． 5 肺组织切片及 HE染色 肺组织固定 12 h 以
上，常规石蜡包埋，4 μm连续切片。常规脱蜡至水，
苏木精染色 5 min，伊红染色 1 min，梯度乙醇脱水，
二甲苯透明，中性树胶封片。最后由经验丰富的医
生根据炎症细胞浸润、肺水肿、出血和肺泡壁增厚等
病理变化程度进行组织学评分。每个指标分 5 个等
级:0:最小损伤，1:轻微损伤，2:中度损伤，3:严重损
伤，4:最大损伤。
1． 6 ELISA 测定 按照 ELISA 试剂盒说明书操
作，检测 BALF 中的炎症因子和肺组织匀浆中
MAPKs信号蛋白分子的表达。
1． 7 核蛋白的提取和 NF-κB p65 的活性测定 根
据试剂盒说明，方法简述如下:96 孔板中固定 NF-
κB p65 的保守结合位点(5-GGGACTTCC-3) ，加入
核蛋白提取液，封板，室温孵育、洗涤;依次加入 NF-
κB p65 抗体、HRP-标记的二抗孵育、洗涤。最后加
入显色剂，室温避光孵育 2 ～ 10 min终止反应(由蓝
色变为黄色) ，5 min内 450 nm 波长测其吸光度值。
1． 8 Western blot 检测 NF-κB p65 蛋白的表达
配制 PAGE胶，取肺组织总蛋白提取物上样，电泳。
冷却后电转印到 PVDF膜上，洗膜，阻断液封闭。一
抗为 NF-κB p65 兔抗人 IgG，二抗为 HRP 标记的羊
抗兔 IgG，依次孵育洗涤后，感光，ECL 显色，以
GAPDH作内参。用密度比值表示目的蛋白量。
1．9 统计学处理 实验结果以珋x ± s表示，用 Prism 软
件分析、作图。进行多组结果比较时采用单因素方差
分析，进一步采用 q检验法进行两组间的比较分析。
2 结果
2． 1 肺泡灌洗液中的白细胞计数 与对照组相比，
模型组的白细胞总数和中性粒细胞数明显升高(P
＜ 0. 01) ，而三叶青总黄酮可明显降低老年 ALI 小
鼠肺组织的白细胞渗出(P ＜ 0. 01) ，结果见 Tab 1。
Tab 1 Effect of RTFs on leukocyte infiltration in
BALF of aged ALI mice(珋x ± s，n = 7)
Group
Leukocyte
number (× 105)
Neutrophil
number (× 105)
Control 3． 64 ± 0． 26 1． 68 ± 0． 18
Model 19． 05 ± 1． 20## 18． 77 ± 1． 48##
RTFs Low dose 12． 91 ± 1． 10＊＊ 9． 56 ± 0． 91＊＊
High dose 8． 08 ± 0． 81＊＊ 5． 66 ± 0． 52＊＊
##P ＜ 0. 01 vs control;＊＊P ＜ 0. 01 vs model group．
2． 2 BALF 炎症因子水平 ELISA 法定量检测
BALF 中 IL-1β、IL-6、IL-12p40、TNF-α 和 sTNF-R1
的分泌水平(Fig 1)。与对照组相比，支气管滴注
LPS明显提高了小鼠 BALF 中各种促炎因子的分泌
水平(P ＜ 0. 01)。给予三叶青黄酮后，上述炎症因
子的分泌明显减少(P ＜ 0. 01) ，可能和肺组织中巨
噬细胞、上皮细胞和内皮细胞的活性受到抑制有关。
2． 3 肺组织的病理学改变 如 Fig 2所示，对照组老
年小鼠肺组织结构清晰，无明显病理变化。炎症模型
组小鼠肺组织结构严重破坏，血管扩张充血严重，肺
泡腔出血，中性粒细胞等白细胞弥漫浸润，肺泡壁明
显增厚，但给予三叶青黄酮后，病变明显改善。组织
学评分进一步以半定量的方式证明了三叶青黄酮对
ALI老年小鼠的肺组织病理损伤的逆转效果。
2． 4 肺组织中 MAPKs 信号蛋白的表达 如 Fig 3
所示，模型组肺组织中 p38MAPK、ERK、JNK 及其磷
酸化蛋白的表达水平明显升高，但与对照组比较，仅
p38MAPK分子的磷酸化水平大幅升高(P ＜ 0. 01)。
给予三叶青黄酮可明显降低 p38MAPK分子的磷酸化
水平(P ＜ 0. 01) ，而 ERK 和 JNK 的磷酸化水平改变
不明显。
2． 5 肺组织中 NF-κB 的表达和活性水平 与对照
组相比，LPS刺激使 NF-κB 的表达水平、磷酸化水平
和 DNA结合活性都明显升高(P ＜ 0. 01)。但随着三
叶青黄酮给药剂量的增加，NF-κB p65 的表达水平、
磷酸化水平以及 DNA 结合活性均逐渐降低(P ＜
0. 01，Fig 4)。
3 讨论
三叶青是我国民间常用中草药之一，具有抗肿
瘤［5］、免疫调节、抗病毒、抗炎等作用，且毒副作用
小。近年来，三叶青的消炎功效日益成为人们研究
的焦点，三叶青对Ⅱ型胶原所致实验性关节炎小鼠
有一定的治疗作用［6］。三叶青提取物具有较好的
抗炎、镇痛及解热作用，与相关的中医临床功效及主
治相符。三叶青以块根入药，黄酮是三叶青根提取
物中具有抗炎生物活性的主要成分之一。通过超高
·6271· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12)
Fig 1 Secretion of inflammatory factors in BALF
##P ＜ 0. 01 vs control;＊＊P ＜ 0. 01 vs model group．
Fig 2 Histopathologic examination and score of HE-stained lung tissues
##P ＜ 0. 01 vs control;＊＊P ＜ 0. 01 vs model group．
效液相色谱串联三重四级杆质谱法(UPLC-MS /MS)
已测定三叶青根中 10 种黄酮类成分的含量［7］。
支气管滴注内毒素 LPS 可诱导 ALI 动物模型。
LPS刺激促使白细胞，尤其是中性粒细胞向感染病
灶的迁移，加速对免疫反应的调节［8］。同时，LPS 通
过单核巨噬细胞趋化因子-1(MCP-1)的分泌，趋化
并激活静止的肺泡巨噬细胞，引起炎症和 ALI。本
研究发现，老年小鼠支气管滴注 LPS 后，肺间质充
满了活化的肺泡巨噬细胞和中性粒细胞，但三叶青
黄酮给药后 BALF 中白细胞数量明显减少，表明三
叶青黄酮可抑制 LPS 引起的白细胞浸润和向病灶
的迁移。另外，LPS刺激后肺组织充血水肿严重，肺
泡间隔增厚，肺组织评分也快速升高，但三叶青黄酮
给药可逆转这一损伤性变化，可见三叶青黄酮对
LPS引起的肺损伤有明显疗效。
血管内皮损伤在 ALI 的发作中有重要作用，
气—血屏障的破坏，促进中性粒细胞的游出和肺泡
腔的炎性渗出。LPS 诱导的 IL-1β、IL-6、IL-12p40
和 TNF-α 的过量释放，增加了肺组织血管的渗透
性，引起血管内皮细胞损伤［9］。三叶青黄酮灌胃给
药可明显减少上述炎症因子的产生，可见三叶青黄
酮对 ALI血管内皮损伤具有保护作用和抗炎效果。
此外，三叶青黄酮除了抑制 IL-1β、IL-6、IL-12、
p40、TNF-α 等促炎因子的分泌外，还影响 sTNF-R1
的产生。TNF 的所有生物学功能都依赖于 TNFR，
TNFR主要有两种亚型:TNF-R1和 TNF-R2。膜结
·7271·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12)
Fig 3 Expression of MAPKs in lung tissues
#P ＜ 0. 05，##P ＜ 0. 01 vs control;* P ＜ 0. 05，＊＊P ＜ 0. 01 vs model group．
合型 TNFR(mTNFR)在蛋白酶等作用下，可裂解成
sTNF-R1 和 sTNF-R2 等亚型，释放到血液或组织液
中［10］。sTNFR仍有结合 TNF的活性，从而调节 TNF
的生物学功能。当 TNF 释放时，sTNFR 也迅速释
放，这可能作为一种反馈保护机制，以减少直接发挥
作用的 TNF及细胞表面的 mTNFR数量。三叶青黄
酮抑制 TNF 表达的同时，也降低了 sTNFR 的水平，
使两者保持着动态平衡，从而阻碍了炎症的过度发
展，促进组织微环境的稳定。
LPS通过MAPKs 和 NF-κB信号级联途径调节炎
症介质的表达和释放。其中，NF-κB 是宿主抗感染反
应的重要转录因子。静息状态下，NF-κB 存在于细胞
质中，和 IκB 聚合形成异源三聚体。受 LPS 刺激后，
IκB发生降解并释放出 NF-κB 异源二聚体，NF-κB 转
移至细胞核内，启动各种炎症因子基因的转录和翻译，
发挥转录水平的调控作用，促进 ALI 的病变发展［11］。
因此，阻断 NF-κB的活化有望缓解 ALI。本研究证实，
三叶青黄酮灌胃可明显抑制老年 ALI小鼠肺组织 NF-
κB的表达和磷酸化，降低核内 NF-κB的 DNA结合活
性，并呈现浓度依赖性。NF-κB 的活性变化和下游炎
症因子的分泌水平完全一致。因此，NF-κB 是三叶青
黄酮拮抗 LPS所致小鼠 ALI炎症的重要作用靶点。
MAPKs信号通路是介导细胞反应的重要信号
转导系统，MAPKs 家族成员均可对炎症进行调控。
当受到 LPS 刺激后，细胞内的 ERK、JNK 和
p38MAPK被激活，作用于各自的底物，从而影响转
录因子的活性，调控包括 IL-1β、IL-6、IL-12p40、
TNF-α等多种细胞因子的表达。而这些细胞因子又
能激活 MAPKs，最终调控其它炎症介质的生成［12］。
本实验结果显示，三叶青黄酮明显抑制 p38MAPK
的表达和磷酸化，且这种抑制作用呈剂量依赖性，而
对 JNK和 ERK无明显影响。p38MAPK的磷酸化水
平和 NF-κB的磷酸化及 DNA 结合活性呈正相关。
有研究指出，在 MAPK 信号通路中，与 NF-κB 的激
活关系最为密切的是p38MAPK，若p38MAPK的表
达受到抑制，NF-κB 的激活也会受到影响［13］。因
此，p38MAPK 和 NF-κB 都是抗炎机制中的重要环
节，是抗炎药物作用的重要靶点。
·8271· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12)
Fig 4 Expression and DNA binding activity of
NF-κB p65 in lung tissues
A:Relative expression of NF-κB p65 and p-p65 detected by West-
ern blot;B:DNA binding activity of NF-κB detected with TransAM kit．
#P ＜ 0. 05，## P ＜ 0. 01 vs control;* P ＜ 0. 05，＊＊ P ＜ 0. 01 vs model
group．
综上所述，本研究证实三叶青黄酮对 LPS 诱导
的老年小鼠 ALI具有明显抗炎效果，减轻病变，改善
肺功能。p38MAPK和 NF-κB 信号通路是三叶青黄
酮发挥抗炎作用的主要途径。其对 ALI小鼠肺内巨
噬细胞、内皮细胞、上皮细胞等细胞水平的影响还有
待进一步深入研究。
(致谢:感谢浙江中医药大学中药药理实验室、动物实
验中心和浙江医学高等专科学校科研实验中心提供的大力
支持。)
参考文献:
［1］ Gotts J E，Matthay M A． Treating ARDS:new hope for a tough
problem［J］． Lancet Respir Med，2014，2(2) :84 － 5．
［2］ Gutsmann T，Schromm A B，Brandenburg K． The physicochemistry
ofendotoxins in relation to bioactivity［J］． Intern J Med Microbiol，
2007，297(5) :341 － 52．
［3］ Arndt P G，Young S K，Lieber J G，et al． Inhibition of c-Jun N-
terminal kinase limits lipopolysaccharide-induced pulmonary neu-
trophil influx［J］． Am J Respir Crit Care Med，2005，171(9) :
978 － 86．
［4］ 郭 玲，李文静，徐明江，王 宪． 吸入脂多糖诱导小鼠急性
肺炎模型的建立［J］． 北京大学学报(医学版) ，2009，141
(2) :226 － 9．
［4］ Guo L，Li W J，Xu M J，Wang X． A mouse model of acute lung
inflammation induced by lipopolysaccharide inhalation［J］． J Pe-
king Univ (Health Sci) ，2009，141(2) :226 － 9．
［5］ 钟良瑞，魏克民． 三叶青黄酮对肺癌 A549 细胞生长抑制与
MAPKs通路关系的研究［J］． 中国药理学通报，2014，30(1) :
101 － 4．
［5］ Zhong L R，Wei K M． Radix tetrastigma hemsleyani flavone sup-
presses human lung carcinoma A549 cell by regulating MAPKs
pathway［J］． Chin Pharmacol Bull，2014，30(1) :101 － 4．
［6］ 吴安安，倪荷芳． 三叶青对小鼠Ⅱ型胶原关节炎的影响［J］．
南京中医药大学学报，2007，23(5) :307 － 9．
［6］ Wu A A，Ni H F． Effect of Tetrstigma Hemsleyanum on typeⅡcolla-
gen arthritis［J］． J Nangjing TCM Univ，2007，23(5) :307 －9．
［7］ 许 文，傅志勤，林 婧，等． UPLC-MS /MS法同时测定三叶
青中 10 种黄酮类成分［J］． 药学学报，2014，49(12) :1711 －
7．
［7］ Xu W，Fu Z Q，Lin J，et al． Rapid simultaneous determination of
ten major flavonoids in Tetrastigma hemsleyanum by UPLC-MS /MS
［J］． Acta Pharm Sin，2014，49(12) :1711 － 7．
［8］ 梁家红，张水娟，姚 立． 丹酚酸 B 对肺上皮细胞凋亡和急
性肺损伤的影响［J］． 中国药理学通报，2013，29(4) :531 －
4．
［8］ Liang J H，Zhang S J，Yao L． Effects of salvianolic acid B on lung
epithelial cell apoptosis and acute lung injury［J］． Chin Pharma-
col Bull，2013，29(4) :531 － 4．
［9］ Vandenbroucke E，Mehta D，Minshall R，Malik A B． Regulation
of endothelial junctional permeability［J］． Ann N Y Acad Sci，
2008，1123:134 － 45．
［10］ Ijiri Y，Kato R，Sadamatsu M，et al． Chronological changes in
circulating levels of soluble tumor necrosis factor receptors 1 and 2
in rats with carbon tetrachloride-induced liver injury［J］． Toxicolo-
gy，2014，316:55 － 60．
［11］ Galani V，Tatsaki E，Bai M，et al． The role of apoptosis in the
pathophysiology of acute respiratory distress syndrome (ARDS) :
an up-to-date cell-specific review［J］． Pathol Res Pract，2010，
206(3) :145 － 50．
［12］ Moreira-Tabaka H，Peluso J，Vonesch J L，et al． Unlike for hu-
man monocytes after LPS activation，release of TNF-α by THP-1
cells is produced by a TACE catalytically different from constitutive
TACE［J］． PloS One，2012，7(3) :e34184．
［13］ Nick J A，Avdi N J，Young S K，et al． Selective activation and
functional significance of p38 alpha mitogen-activated protein ki-
nase in lipopolysaccharide stimulated neutrophils［J］． J Clin In-
vest，1999，103(6) :851 － 8．
·9271·中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12)
Inhibition effect of flavonoids from Radix tetrastigmae on acute lung injury
of aged mice through p38MAPK and NF-κB pathway
LIU Dan-dan1，2，CAO Gang1，ZHANG Qi2，YE Yi-lu2，HAN Li-kai3，GE Wei-hong1
(1． School of Pharmacy，Zhejiang Chinese Medical University，Hangzhou 310053，China;2． Dept of Basic Medicine，Zhejiang
Medical College，Hangzhou 310053，China;3． Dept of Pathology，Peoples Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou 310046，China)
Abstract:Aim To investigate the protective effect of
flavonoids from Radix tetrastigmae (RTFs)on lipopo-
lysaccharide (LPS)induced acute lung injury (ALI)
of aged mice and the mechanism． Methods Aged
C57BL /6J mice were bronchially instillated LPS to in-
duce ALI． RTFs were orally administered to treat ALI．
After 3 days，bronchoalveolar lavage fluid (BALF)
was collected to enumerate leukocytes with Wright-Gi-
emsa staining，and to detect inflammatory cytokines
with ELISA． ELISA and Western blot methods were al-
so used to detect the expression of MAPKs and NF-κB
in lung tissues． The activity of NF-κB in nucleic pro-
tein extract was detected with TransAM kit． Results
ALI models were successfully induced through LPS in-
stillation． RTFs significantly reduced leukocyte，espe-
cially neutrophil infiltration in BALF，inhibited IL-1β，
IL-6，IL-12p40，TNF-α and sTNF-R1 secretion，and
improved pathohistological change of lung tissues． Be-
sides，RTFs significantly attenuated the phosphoryla-
tion of p38MAPK，NF-κB and the activity of NF-κB．
Conclusion RTFs inhibits LPS-induced ALI through
p38MAPK and NF-κB pathway and exhibits significant
anti-inflammation effect on aged mice．
Key words: Radix tetrastigmae; flavonoids;
p38MAPK;nuclear factor-κB (NF-κB) ;lipopolysac-
charide (LPS) ;acute lung injury (ALI) ;aged mice
网络出版时间:2015 － 11 － 24 11:00 网络出版地址:http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /34． 1086． R． 20151124． 1100． 040． html
玉郎伞查尔酮调控 PI3K /Akt信号通路
抗心肌缺血 /再灌注损伤的作用及机制研究
禤霏霏，黄建春，唐静芝，黄婉苏，黄仁彬
(广西医科大学药学院，广西 南宁 530021)
doi:10． 3969 / j． issn． 1001 － 1978． 2015． 12． 020
文献标志码:A 文章编号:1001 － 1978(2015)12 － 1730 － 05
中国图书分类号:
摘要:目的 探讨玉郎伞查尔酮(YLSC)调控 PI3K /Akt信号
通路抗心肌缺血 /再灌注损伤的作用及机制。方法 40 只
♂ SD大鼠随机分为 5 组:假手术组、模型组、YLSC组、YLSC
+ PI3K抑制剂 wortmannin组(YLSC + WM 组)、PI3K 抑制剂
wortmannin组(WM 组) ，每组 8 只。除假手术组外，其它各
组大鼠均结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型，缺血
收稿日期:2015 － 08 － 05，修回日期:2015 － 10 － 16
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No 81160533) ;广西科技基
础条件平台建设项目(No 12-97-20) ;广西研究生创新课
题(No YCSZ2014104)
作者简介:禤霏霏(1990-) ，女，硕士生，研究方向:心血管病药物，E-
mail:819971485@ qq． com;
黄仁彬(1955 －) ，男，博士，教授，博士生导师，研究方向:
心血管病药物，E-mail:huangrenbin518@ 163． com
30 min，再灌注 120 min。实验结束后，采用比色法测定大鼠
血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)及一氧
化氮(NO)水平，ELISA法测定血清肿瘤坏死因子(TNF-α)的
含量，Western blot 法检测心肌组织中总 Akt(t-Akt)、磷酸化
Akt(p-Akt)及自噬相关蛋白 LC3-Ⅱ的表达，FQ-PCR法分析内
皮型一氧化氮合酶(eNOS)、凋亡因子 caspase-3及自噬相关基
因 Beclin1 的表达量变化。结果 与 I /R 组比较，YLSC 组
CK-MB、LDH 以及 TNF-α血清含量明显降低，NO 水平升高，
Beclin1、caspase-3及 LC3-Ⅱ的表达量均明显下降，同时 Akt 的
磷酸化水平与 eNOS mRNA表达增加，上述各项指标差异具有
统计学意义(P ＜ 0. 05) ，而上述变化能够被 PI3K/Akt 信号通
路的特异性阻断剂 wortmannin 所阻断，且其差异具有统计学
意义(P ＜0. 05)。结论 YLSC通过激活 PI3K/Akt 信号通路
抑制缺血 /再灌注所致的心肌细胞凋亡和过度自噬，从而发
挥对心肌缺血 /再灌注损伤的保护作用。
关键词:玉郎伞查尔酮;调控;PI3K /Akt;凋亡;自噬;心肌缺
血 /再灌注损伤
·0371· 中国药理学通报 Chinese Pharmacological Bulletin 2015 Dec;31(12) :1730 ～ 4