全 文 ：第 27 卷 第 2 期
2011 年 4 月
哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报(自然科学版)
Journal of Harbin University of Commerce (Natural Sciences Edition)
Vol． 27 No． 2
Apr． 2011
收稿日期:2010 － 08 － 22.
基金项目:国家自然科学基金项目(30271083) ，黑龙江省国际合作项目(WC05C01)．
作者简介:计红芳(1978 －) ，女，博士，讲师，研究方向:天然活性产物、食品营养与安全．
绒白乳菇菌丝体多糖提取工艺的研究
计红芳1，张令文1，2，张慧蓉3，王 青3，宋瑞清4
(1．河南科技学院 食品学院，河南 新乡 453003;2．哈尔滨商业大学 食品工程学院，哈尔滨 150076;
3．河南科技学院 实验中心，河南 新乡 453003;4．东北林业大学 林学院，哈尔滨 150040)
摘 要:以绒白乳菇菌丝体为原料，采用水提法提取其多糖，比较了提取温度、提取时间、料液比对绒
白乳菇菌丝体多糖得率的影响;在此基础上进行了正交实验，确定了水提法提取绒白乳菇菌丝体多糖
的最佳工艺条件为料液比 1∶ 25、提取时间 5． 0 h、提取温度 70 ℃;此条件下绒白乳菇菌丝体多糖的得
率可达 1． 195% ．
关键词:绒白乳菇;菌丝体;多糖;提取
中图分类号:TS201 文献标识码:A 文章编号:1672 － 0946(2011)02 － 0231 － 04
Studies on extracting procedure of polysaccharide in mycelium
of lactarius vellereus
JI Hong-fang1，ZHANG Ling-wen1，2，ZHANG Hui-rong3，WANG Qing3，SONG Rui-qing4
(1． School of Food Science，Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，China;
2． School of Food Engineering，Harbin University of Commerce，Harbin 150076，China;
3． Experiment Center，Henan Institute of Science and Technology，Xinxiang 453003，China;
4． School of Forestry，Northeast Forestry University，Harbin 150040，China)
Abstract:Polysaccharide was obtained from mycelium of lactarius vellereus by hot water ex-
traction． The effects of extraction temperature，extraction time，and the powder － to － water
ratio were studied． According to the orthogonal experimental design，the optimum extracting
condition of polysaccharide in mycelium of L． vellereus was showed as followed:the powder
－ to － water ratio 1∶ 25，extraction time 5． 0 h and extraction temperature 70 ℃ ． Under this
condition，the yield of polysaccharide was 1． 195% ．
Key words:lactarius vellereus;mycelium;polysaccharide;extraction
绒白乳菇(Lactarius vellereus)隶属担子菌亚
门(Basidiomycotina)、层菌纲(Hymenomycetes)、伞
菌目(Agaricales)、红菇科(Russulaceae)、乳菇属真
菌，常与栎属植物形成外生菌根．据报道，许多蘑菇
多糖均具有抗病毒、抗细菌、抗真菌、抗虫、抗肿瘤、
抗突变、抗衰老、抗氧化、降血脂、增强机体免疫力
的功能［1］．绒白乳菇提取物对杨树叶枯病菌具有
抑制作用;对小白鼠肉瘤 S180及艾氏癌的抑制率为
60%，其抗肿瘤效应可能与多糖有密切关系［2 － 3］．
目前，国内外对植物源多糖的研究相对较多［4 － 6］，
而有关真菌源，特别是绒白乳菇菌丝体多糖方面的
研究尚未见报道．本文首次对绒白乳菇菌丝体多糖
进行研究，旨在为绒白乳菇的研究开发提供必要的
指导作用．
1 材料与方法
1． 1 实验材料
1． 1． 1 原料
绒白乳菇 由东北林业大学提供．
1． 1． 2 试剂
95%乙醇、无水乙醇、氯仿、正丁醇、丙酮、葡萄
糖、苯酚、浓硫酸、石油醚等均为国产分析纯试剂．
1． 1． 3 仪器
FZ102 型植物粉碎机，天津泰斯特仪器有限公
司;PC －1000 数显式电热恒温水浴锅，上海跃进医
疗器械厂;SHZ － D(Ⅲ)循环水式真空泵，巩义市
英峪予华医疗器械厂;RE52 － 98 旋转蒸发器，上海
亚荣生化仪器厂;FA2004N 电子天平，上海精密科
学仪器有限公司;GZX － DH －30 × 35 电热恒温箱，
上海跃进医疗器械厂;721E分光光度计，上海光谱
仪器有限公司;LD4 － 2A 离心机，北京医用离心机
厂．
1． 2 实验方法
1． 2． 1 绒白乳菇菌丝体多糖的提取工艺流程
绒白乳菇菌丝体→干燥、粉碎、脱脂→热水浸
提→水提液过滤、减压浓缩→乙醇沉淀→复溶→
Sevage法脱蛋白→真空冷冻干燥→绒白乳菇菌丝
体多糖
1． 2． 2 绒白乳菇菌丝体多糖质量分数的测定
1)总糖质量分数的测定:苯酚 －硫酸法［7］
2)还原糖质量分数的测定:DNS法［8］
3)多糖质量分数的计算:多糖质量分数 =总
糖质量分数 －还原糖质量分数
2 结果与分析
2． 1 水提法提取绒白乳菇菌丝体多糖的单因素实
验
在绒白乳菇菌丝体多糖的提取过程中，会受到
诸多因素的影响，如提取温度、提取时间、料液比、
菌丝体粉碎度等等． 在现有研究的基础上，本文研
究了绒白乳菇菌丝体多糖提取过程中的提取温度、
提取时间、料液比三因素的影响情况．
2． 1． 1 提取温度对绒白乳菇菌丝体多糖得率的影
响
固定提取时间 3． 0 h，料液比 1∶ 20，考察提取
温度对多糖得率的影响，设计提取温度为 40、50、
60、70、80、90 ℃(见图 1)． 随着温度的升高，多糖
得率呈先上升再下降的趋势． 温度在 40 ～ 70 ℃之
间时，绒白乳菇菌丝体多糖得率随提取温度的增加
而提高，这是由于多糖的溶解度随着温度的升高而
增大，造成了在一定温度范围内，多糖得率随着温
度上升而提高的结果;当超过 70 ℃时，多糖得率略
有降低，考虑到温度过高会增加能源费用，还可能
会影响到多糖的功效，因此选择 70 ℃为提取温
度．
图 1 提取温度对绒白乳菇菌
丝体多糖得率的影响
2． 1． 2 提取时间对多糖得率的影响
固定提取温度 70 ℃，料液比 1 ∶ 20，考察提取
时间对多糖得率的影响，设计提取时间为 1． 0、2．
0、3． 0、4． 0、5． 0、6． 0 h(见图 2)．提取时间在 1． 0 ～
3． 0 h 之间时，多糖得率随时间的延长而提高;而
在 4． 0 ～ 6． 0 h 之间时，多糖得率随提取时间的延
长没有明显的变化． 这是由于在提取的初期，多糖
能够被不断的浸出;随着提取时间的延长，多糖的
浸出量逐渐升高而最终达到最高点，再延长时间也
无法继续提取出多糖．考虑到提取时间过长会使生
产周期延长，还增加操作费用，因此选择 4． 0 h 为
宜．
图 2 提取时间对绒白乳菇菌丝体
多糖得率的影响
2． 1． 3 料液比对多糖得率的影响
固定温度 70 ℃、提取时间 4． 0 h，考察料液比
对多糖得率的影响，设计料液比为 1∶ 10、1∶ 15、1∶
20、1∶ 25、1∶ 30、1∶ 35(见图 3)．用水提法提取多糖，
其得率随用水量的增加而提高，料液比在1∶ 10 ～
1∶ 20之间时，多糖得率随着用水量的增加而迅速提
高;而在 1∶ 25 ～ 1∶ 35 之间时，多糖得率随用水量的
增加没有明显增加．这是由于虽然多糖能够被不断
浸出，但是作为溶剂的水的量比较少，多糖还没有
完全溶解就已经达到了饱和，这使提取出的多糖无
法完全溶解于其中;增加用水量后，提取出的多糖
溶解量也不断的增大，这就产生了在增大用水量时
·232· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 27 卷
提取率提高的现象，该现象一直持续到用水量达到
可以充分溶解所提出的多糖．考虑到用水量增大会
延长浓缩时间，增加操作费用，因此料液比选为 1
∶ 25．
图 3 料液比对绒白乳菇菌
丝体多糖得率的影响
2． 2 水提法提取绒白乳菇菌丝体多糖最佳工艺条
件的确定
在单因素实验的基础上，确定以料液比、提取
时间、提取温度三因素进行正交实验设计(见表
1)．选用 L9(3
4)正交表进行正交实验，对结果进行
方差分析和显著性检验(见表 2)．
由表 1 可知，在实验范围内的最佳因素组合为
A2B2C2，即料液比 1∶ 25、提取时间 5． 0 h、提取温度
70 ℃的提取条件下所得的多糖得率最高． 极差 R
的数值直观反映出各因素对提取效果影响大小的
顺序为:B ＞ C ＞ A，即提取时间对提取效果的影响
最大，提取温度次之，料液比则影响最小．
表 1 水提法提取绒白乳菇菌丝体多糖正交实验结果
因素
实验号
A
料液比
B
时间 /h
C
温度 /℃
D
空白
多糖得率 /%
1 (1)1:20 (1)4． 0 (1)60 1 0． 878
2 (1)1:20 (2)5． 0 (2)70 2 1． 186
3 (1)1:20 (3)6． 0 (3)80 3 1． 062
4 (2)1:25 (1)4． 0 (2)70 3 1． 069
5 (2)1:25 (2)5． 0 (3)80 1 1． 175
6 (2)1:25 (3)6． 0 (1)60 2 1． 113
7 (3)1:30 (1)4． 0 (3)80 2 0． 893
8 (3)1:30 (2)5． 0 (1)60 3 1． 131
9 (3)1:30 (3)6． 0 (2)70 1 1． 168
K1 3． 126 2． 841 3． 123 3． 222
K2 3． 357 3． 492 3． 423 3． 192 T = 9． 675
K3 3． 192 3． 342 3． 129 3． 261 x = 1． 075
k1 1． 042 0． 947 1． 041 1． 074
k2 1． 119 1． 164 1． 141 1． 064
k3 1． 064 1． 114 1． 043 1． 087
R 0． 077 0． 217 0． 100 0． 023
优水平 A2 B2 C2
为了探索更好的实验条件的取值方向，以各因
素的水平为横坐标，k值为纵坐标绘制因素与水平
直观图，结果见图 4．
由图 4 可知，各因素均有 k 值的最高点，即为
最优水平点． 因此实验所得的提取条件是最优水
平．
图 4 因素与水平直观图
表 2 正交实验方差分析表
方差来源 平方和 Q 自由度 f 均方和 V F值 临界值 Fα 显著性 贡献率 /%
A 0． 009 2 0． 0045 9． 000 F0． 05(2，2)= 19． 000 8． 33
B 0． 078 2 0． 039 78． 000 F0． 01(2，2)= 99． 000 * 72． 22
C 0． 020 2 0． 010 20． 000 * 18． 52
e 0． 001 2 0． 0005 1． 000 0． 93
T 0． 108 8
·332·第 2 期 计红芳，等:绒白乳菇菌丝体多糖提取工艺的研究
由表 2 可以看出，三因素中提取时间、提取温
度对多糖得率的影响显著;料液比对多糖得率的影
响不显著．
2． 3 验证实验
按正交实验确定的最佳提取条件，即料液比 1
∶ 25、提取时间 5． 0 h、提取温度 70 ℃进行提取，测
得的多糖得率为 1． 195%质量分数，比正交实验结
果中的较优组 1． 186%高，表明此正交实验得出的
最优组合是符合实际的．
3 讨 论
通过单因素和正交实验确定水提法提取绒白
乳菇菌丝体多糖的最佳提取工艺条件为:料液比
1∶ 25、提取时间 5． 0 h、提取温度 70 ℃，此条件下多
糖得率可达 1． 195% ．各因素对提取效果影响的主
次顺序为:B ＞ C ＞ A，即提取时间对提取效果的影
响最大，提取温度次之，料液比则影响最小．通过方
差分析可知，三因素中提取时间、提取温度对多糖
得率的影响显著，料液比对多糖得率的影响不显
著．
参考文献:
［1］ 赵国华，陈宗道，李志孝，等． 活性多糖研究新进展［J］． 食
品与发酵，2001，27(7) :45 － 48．
［2］ 崔 波，马 杰，李良晨，等． 河南的红菇科真菌资源研究
(1) ［J］． 河南科学，1998，16(2) :193 － 198．
［3］ 计红芳，张令文，宋瑞清． 绒白乳菇发酵液提取物对杨树叶枯
病菌几种重要酶活性的影响［J］． 北京林业大学学报，2009，
31(4) :52 － 55．
［4］ 李 健，李 敏，刘 宁，等． 超声辅助提取莱菔多糖的工艺
研究［J］．哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2009，25(5) :
583 － 585．
［5］ 季宇彬，陈海继，汲晨锋． 青龙衣多糖的提取及单糖组分和质
量分数测定［J］． 哈尔滨商业大学学报:自然科学版，2006，
22(4) :1 － 7．
［6］ 王 翀，吴 涛． 羊栖菜多糖提取与含量的测定［J］．哈尔滨
商业大学学报:自然科学版，2006，22(1) :11 － 12．
［7］ 张惟杰． 复合多糖生化研究技术［M］． 上海:上海科学技术
出版社，1987．
［8］ 袁志发，周静芋． 试验设计与分析［M］． 北京:高等教育出版
社，2003:467．
(上接 230 页)
赵丽娟［6］及作者在诱导中国春 － 长穗偃麦草 1E
二体附加系染色体畸变研究［7］中观察到的染色体
异常行为相似．说明 E组附加系对与 2C 杀配子染
色体的作用非常敏感，达到了利用 2C 杀配子染色
体诱导小麦 －长穗偃麦草染色体畸变的目的，为进
一步筛选和鉴定易位系和缺失系提供了基础和材
料．
参考文献:
［1］ 刘树兵，贾继增，王洪刚，等． 利用生化及分子标记确定长
穗偃麦草(ElytrigiA elongatum，EE． 2n = 14)染色体与小麦染
色体的部分同源性［J］． 遗传学报，1999，26(1) :37 － 42．
［2］ ENDO T R，GILL B S． Somatic karyotype heterochromatin dis-
tribution and nature of chromosome differentiation in common
wheat． Tricticun aestium L． em Thell． ［J］． Chromosoma
(Berl) ，1984，89:361 － 369．
［3］ ENDO T R． Gametocidal chromosomal and their induction of
chrosome mutations in wheat［J］． Japanese Journal of Genetics，
1990，65:135 － 152．
［4］ 李集临，徐香玲，徐 萍，等． 利用中国春 －山羊草 2C 二体
附加系与中国春 －偃麦草 5E二体附加系杂交诱发染色体易
位与缺失［J］． 遗传学报，2003，30(4) :345 － 349．
［5］ KYNAST R S，FRIEBE B，GILL B S． Fate of multicentric and
ring chromosomes induced by a new gametocial factor located on
chromosome 4M’g’of Aegilops geniculata［J］． Chromosome
Research，2000，8:133 － 139．
［6］ 赵丽娟，赵丽伟，于金海，等． 2C杀配子染色体对减数分裂
的作用及分析［J］． 黑龙江农业科学，2007(3) :4 － 6．
［7］ 曲 敏，张延明，张雪婷，等． 利用杀配子染色体2C诱导中
国春 －长穗偃麦草 1E 二体附加系染色体畸变的研究［J］．
食品科学，2007，28(10) :342 － 347．
·432· 哈 尔 滨 商 业 大 学 学 报 (自 然 科 学 版 ) 第 27 卷