全 文 ：2012 年第 1 期 37
收稿日期:2011-07-26
基金项目: 丽水市科技成果转化项目 (2010NH0205)
作者简介: 吉庆勇 (1979 －) ，男，大学本科，研究方向为中药材种植、新品种选育。E-mail:healthhome@ 126. com。
文献著录格式: 吉庆勇，华金渭，程文亮，等． 人工种植和野生三叶青中总黄酮含量的比较 ［J］． 浙江农业科学，2012 (1) :37 － 38．
人工种植和野生三叶青中总黄酮含量的比较
吉庆勇1，华金渭1，程文亮1，朱 波1，王喜周2，李美美3
(1. 浙江省丽水市农业科学研究院，浙江 丽水 323000;2. 丽水学院 医学院，浙江 丽水 323000;
3. 浙江省医学科学院，浙江 杭州 323000)
摘 要:采用紫外可见分光光度法测定了人工种植和野生三叶青地下块茎中总黄酮的含量。分析结果表明，
农科院人工种植与野生三叶青地下块茎中都含有较高的黄酮，人工种植三叶青黄酮含量相当于或高于野生三叶
青，两者含量没有显著差异 (P = 0. 05)。说明浙江丽水人工种植三叶青品质优良，可以大面积推广种植。
关键词:三叶青; 总黄酮; 含量测定
中图分类号:S 567 文献标志码:A 文章编号:0528-9017(2012)01-0037-02
三叶青 (Tetrastigmatis hemsleyani Diels et Gilg)
为葡萄科植物三叶崖爬藤地下块茎，属于我国特有
植物，分布在浙江、江西、云南等省份。其性凉，
味辛、无毒，常用于治疗高热惊厥，小儿感冒发
烧、肝炎、支气管炎及支气管哮喘等症，对一些病
毒性疾病，慢性和迁延性疾病有很好的功效［1 － 2］。
三叶青中的化学成份主要有黄酮、黄酮苷、淀粉、
还原糖、甾类化合物、氨基酸等［3］，其中黄酮是
重要的生理活性物质，具有很好的抗肿瘤细胞增殖
和诱导肿瘤细胞凋亡等作用［4 － 5］。
随着对三叶青药用价值的深入研究，市场需求
量必然进一步增加，而野生资源由于过度采挖，已
濒临灭绝状态。因此，既要保护数量极少的野生三
叶青资源，又要满足市场需要，促进其可持续发
展，开展三叶青的人工种植十分必要。丽水市农科
院近年来开展三叶青引种栽培和野生驯化，已人工
种植 20 余亩。本文采用紫外可见分光光度法测定
丽水地区不同区域野生和人工种植三叶青中的黄酮
含量，并对结果进行了分析［6］，以期为今后大面
积的三叶青人工种植提供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂
UV-120-02 型紫外-可见分光光度计 ( 日本岛
津) ;BP-II-5 分析天平 ( 上海医用激光仪器厂生
产) ，SHZ-C 型水循环式多用真空泵 ( 巩义市英峪
予华仪器厂) ;202A-2 电热干燥箱 ( 上海阳光试验
仪器有限公司) 等。芦丁标准品 ( 中国药品生物
制 品 检 定 所， 批 号 100080-200306 ) ， 乙 醇、
NaNO2，Al (NO3)3，KOH 均为分析纯。
1. 2 试验材料
于 2011 年 3 月至 4 月，从丽水松阳县、丽水
莲都区、丽水景宁县、丽水青田县、丽水农科院栽
培基地实地采集三叶青样品，全部为鲜品 ( 编号
为:S1-人工、S2-人工、 S3-人工，均为农科院三
叶青种植基地 5 年生样品，野生样品编号为 S4-松
阳、S5-景宁、S6-莲都、S7-青田)。
1. 3 方法
1. 3. 1 测定波长的选择
取对照品和供试品分别置 25 mL 容量瓶中，加
5%亚硝酸钠 1 mL，摇匀，放置 6 min，加氢氧化
钠 10 mL，再加水至刻度，摇匀，放置 15 min，以
紫外可见分光光度法测定在 200 ～ 700 nm 区间扫描
吸收曲线。供试品溶液在 500 nm 处有最大吸收，
与芦丁对照溶液吸收曲线相似，故选用 500 nm 为
测定波长［7］。
1. 3. 2 对照品溶液的制备
精密称取芦丁对照品 2. 80 mg 置于 50 mL，加
70%乙醇溶解，定容至刻度，摇匀，得浓度为
0. 056 mg·mL － 1的芦丁对照品溶液。
1. 3. 3 标准曲线的绘制
精密吸取 0. 3，0. 5，0. 7，0. 9，1. 1，1. 3 mL
DOI:10.16178/j.issn.0528-9017.2012.01.029
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芦丁对照溶液，分布置于 10 mL 容量瓶中，方法同
1. 3. 1，测定吸光值，得标准曲线为 C = 9. 137 ×
10 － 2 A － 4. 524 × 10 － 3，其线性范围为 8. 02 ～
39. 35 mg，r2 = 0. 998 9。
1. 3. 4 供试品溶液的制备与含量测定
取本品粉碎，过 60 目 (0. 25 mm) 筛，精密
称取 0. 50 g，置圆底烧瓶中，加乙醇 50 mL，加热
回流提取 2 次，每次 1 h，取出冷却，过滤，滤液
挥发干，残渣用适量乙醇溶液转移到 10 mL 容量瓶
中，加乙醇稀释至刻度，摇匀即得。精密量取
0. 5 mL，分别置 10 mL 量瓶中，按 1. 3. 1 中方法测
定吸光度，试验重复 3 次。
1. 3. 5 重现性试验
精确称取三叶青样品 3. 0 g，处理后在 500 nm
处测定吸光度，重复 5 次，回归方程法计算平均总
黄酮的质量浓度，其 RSD 为 1. 67%。该试验方法
重现性较好。
1. 3. 6 稳定性试验
精密称取 0. 4 mL 供试品溶液于 10 mL 刻度试
管中，加 5%亚硝酸盐溶液 1. 0 mL，摇匀放置 5 ～
6 min; 加1. 5 mol·L － 1氢氧化钠溶液 5. 0 mL，加
70%乙醇至满刻度，摇匀放置 10 min; 取2. 0 ～
3. 0 mL 显色液于比色皿中在 500 nm 之间扫描测定
吸光度，每隔 0. 5 h 测定 1 次，共测定 7 次，样品
提取液 3 h 稳定性较好。
1. 3. 7 精密度试验
精密称取芦丁标准溶液 1 mL，同 “标准曲线
的绘制”操作，连续测量 6 次，测定吸光度值，
RSD 为 2. 12%。
1. 3. 8 加样回收率试验
精密吸取芦丁对照溶液 1. 0，1. 5，2. 0 mL 各
3 份，分别加入供试品溶液 3 mL，处理后在500 nm
处测定吸光度，计算总黄酮含量，得其平均回收率
为 99. 76%，RSD 为 2. 61%。
2 结果与分析
人工种植与野生三叶青总黄酮的含量比较见表
1。人工种植三叶青总黄酮含量最高为 S2 基地，含
量达 11. 226 8 mg· g － 1，平均为 10. 194 3 mg·
g － 1。野生样品平均总黄酮含量为 10. 160 1 mg·
g － 1，其中丽水松阳样品含量最高，达到 10. 925 9
mg·g － 1，丽水莲都最低，仅为 9. 162 5 mg· g － 1。
研究结果表明，人工种植三叶青总黄酮含量与野生
三叶青无显著差异 (P ＞ 0. 05)。从黄酮含量看，
人工种植三叶青可以替代野生三叶青，弥补三叶青
野生资源的不足，为开发三叶青中药产品提供优质
原料。
表 1 人工种植与野生三叶青中总黄酮的
含量 (n = 3)
编号
含量 /
(mg·g － 1)
(珋x ± s) /
(mg·g － 1)
RSD /
%
S1-人工 9. 361 1 10. 1943 ± 2. 3 2. 6
S2-人工 11. 226 8
S3-人工 9. 995 0
S4-松阳 10. 925 9 10. 1601 ± 2. 1 3. 3
S5-景宁 10. 174 5
S6-莲都 9. 165 2
S7-青田 10. 376 4
3 小结和讨论
三叶青作为一种珍稀的中药，化学成分复杂，
其开发利用尚处起步阶段，其中所含主要化学成分
黄酮具有显著的生物学活性，具有很好的抗菌、抗
病毒、抗肿瘤的特点。对野生与人工种植产品总黄
酮含量的分析、比较，科学评价人工种植三叶青的
质量，对控制三叶青药材质量，深入开展三叶青的
种植驯化研究及资源利用有重要意义，为开发利用
三叶青资源和确保人工种植的品质提供了科学的
依据。
参考文献:
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(责任编辑:张瑞麟)