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九头狮子草对小鼠的抑菌、止痒、抗炎作用



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〔2014-05-17 修回〕
(编辑 安冉冉 /曹梦园)
九头狮子草对小鼠的抑菌、止痒、抗炎作用
罗忠圣 周 镁1 黄秀平1 秦拴梅1 范菊娣1 覃容贵1
(贵阳新天药业股份有限公司药物研究所,贵州 贵阳 550018)
〔摘 要〕 目的 研究九头狮子草的抑菌、止痒、抗炎作用。方法 采用平皿二倍稀释法,观察九头狮子草的体外抑菌作用;采用右旋糖酐致小
鼠瘙痒模型、磷酸组织胺对豚鼠局部皮肤致痒耐受试验,观察九头狮子草的止痒作用;采用二甲苯致小鼠耳廓肿胀模型,新鲜鸡蛋清致小鼠足跖肿胀
模型,观察九头狮子草的抗炎作用。结果 九头狮子草对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作用。九头狮子草各
剂量均可明显降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间(P<0. 05) ,中、高剂量能显著提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈(P<0. 05)。各剂
量均能显著降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度(P<0. 05) ,提高肿胀抑制率;各剂量均能显著降低新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀度(P<0. 05) ,提
高肿胀抑制率;中、高剂量能显著降低炎性足前列腺素(PG)E2 含量(P<0. 05) ,提高 PGE2 抑制率。结论 九头狮子草具有良好的抑菌、止痒、抗炎
作用。
〔关键词〕 九头狮子草;抑菌;抗炎;止痒
〔中图分类号〕 R961 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)03-0555-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 03. 017
基金项目:贵州省科技厅联合基金项目(黔科合 LG〔2011〕030-K2009-29)
1 贵阳医学院药学院中药学教研室
通讯作者:覃容贵(1970-) ,女,教授,博士,硕士生导师,主要从事中药
资源及药理研究。
第一作者:罗忠圣(1971-) ,男,副主任药师,主要从事中药制药及新药
研究。
九头狮子草为爵床科植物九头狮子草全草,主产贵州,其
性味辛、凉,功用主治为祛风、清热、化痰、解毒,用于治疗风热
咳嗽、小儿惊风、喉痛、疔毒、乳痈。与其他药物配伍使用,治疗
肺热咳嗽、虚热咳嗽、小儿吐奶并泄青、男子尿结、咽喉肿痛、痔
疮、蛇咬伤、黑疱疔、妇女白带、经漏等〔1 ~ 3〕。在贵州黔东南地
区,九头狮子草常被世居苗族妇女习用于治疗妇科泌尿系统感
染,本文研究其抗菌、止痒、抗炎作用。
1 材料与方法
1. 1 动物及药物 昆明种小鼠,清洁级,雌雄各半,体质量
20 ~ 25 g;健康豚鼠,清洁级,雌雄各半,体质量 200 ~ 250 g。以
上动物均由贵阳医学院实验动物中心提供,合格证号:SYXK
(黔)2002—0001。九头狮子草干燥药材,购自贵阳市万东药材
市场,经贵阳医学院药学院生药教研室龙庆德副教授鉴定为正
品,药材标本保留于贵阳医学院药学院中药标本馆。九头狮子
草用 70%乙醇回流提取 2 次,每次 2 h,减压浓缩,挥干乙醇,用
蒸馏水配成 1. 5 g /ml (含生药量)的药液,按需稀释。右旋糖
酐(批号:T11092204 四川科伦药业股份有限公司) ;赛庚啶乳
膏(批号:20120819 常州四药制药有限公司) ;新霉素氟轻松乳
膏(批号:广东恒建制药有限公司) ;氢化可的松注射液(批号:
20110903 天津金耀氨基酸有限公司) ;扑尔敏(批号:20110703
华中药业股份有限公司) ;地塞米松(批号:111108 浙江仙琚制
药有限公司)。
1. 2 实验菌株及培养基 金黄色葡萄球菌(ATCC25923)、肺
炎链球菌、绿脓杆菌(ATCC28753)、大肠杆菌(ATCC25922) ,由
贵阳医学院微生物学教研室提供。营养肉汤培养基,上海康瑞
生物科技有限公司,批号 120221;营养琼脂,上海盛思生化科技
有限公司,批号 121118。
1. 3 仪器 数显电热培养箱,303A-型,武汉精华科教仪器有
限公司;电热恒温箱 WSZ-134-75,型号 HH-BH,天津实验仪器
厂;不锈钢手提式压力蒸汽灭菌器,YXQ-SG46-280SA,上海博
迅实业有限公司医疗设备厂;超净工作台,型号 SW-CJ-1F,苏
净集团安泰公司;UV-2401 紫外分光光度计,日本岛津。
1. 4 方法
1. 4. 1 体外抑菌实验 采用平皿二倍稀释法〔4〕。取金黄色葡
萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌四株菌分别接种到普
通营养肉汤中,在 37℃恒温培养箱中培养 24 h,使菌活化繁殖,
·555·罗忠圣等 九头狮子草对小鼠的抑菌、止痒、抗炎作用 第 3 期
测定菌液中活菌数并稀释成 5×105CFU /ml 供试菌悬液,备用。
将已稀释好的实验药物分别加入冷却至 55℃左右的灭菌培养基
中,混匀,制成不同浓度的药物平板。取金黄色葡萄球菌、肺炎
链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌等实验菌悬液,分别划种于不同浓
度的含药平板,37℃培养 18 h,观察记录最小抑菌浓度(MIC)。
1. 4. 2 止痒实验
1. 4. 2. 1 对右旋糖酐致瘙痒小鼠的影响〔5〕 取昆明种小鼠 50
只,雌雄各半,随机分成五组,每组 10 只。分别为空白对照组
(蒸馏水) ,九头狮子草低、中、高剂量组(15、22. 5、30 g /kg) ;赛
庚啶乳膏阳性对照组。各组小鼠腹部剃毛 2 cm×1 cm,分别将
受试药液或对照液均匀涂于剃毛区,每天 2 次,连续 3 d。末次
给药 30 min 后,于各组小鼠尾静脉注射 0. 02% 右旋糖酐
5 ml /kg。以小鼠前爪搔抓头部,后爪搔抓躯干,嘴咬全身各部位
作为搔痒反应指标。观察并记录每只小鼠 30 min 内各组小鼠
瘙痒次数及瘙痒持续总时间。
1. 4. 2. 2 对磷酸组胺致痒豚鼠的影响〔6〕 取健康豚鼠 50 只,
雌雄各半,随机分成 5 组,每组 10 只。分别为空白对照组(蒸
馏水) ,九头狮子草低、中、高剂量组(10、15、20 g /kg) ,新霉素
氟轻松乳膏阳性对照组(0. 1 g /足)。实验前 1 d,将各组豚鼠
左后足背部剃毛,将左后足浸泡在药液中 10 min 取出,模型对
照组给予等量蒸馏水,阳性组涂新霉素氟轻松乳膏,每日 2 次,
连续 2 d。第 3 天用 0 号砂纸擦伤豚鼠右后足背部剃毛处,擦
伤程度以损伤表皮,不伤真皮,皮肤轻度渗血为度,面积约
1 cm2,局部再给药 1 次,末次给药后 10 min,开始于创面处滴
0. 01% 磷酸组织胺每只 0. 05 ml,此后每隔 3 min 依次按
0. 01%,0. 02%,0. 03%,0. 04%…磷酸组织胺浓度递增,每次均
为 50 μl /只,直至豚鼠出现回头舔右后足为止。以豚鼠出现回
头舔右后足时所给予的磷酸组织胺总量为致痒阈,记录并比较
各组的致痒阈。
1. 4. 3 抗炎实验
1. 4. 3. 1 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响〔7〕 小鼠分组及
给药同 1. 4. 2. 1,阳性对照组给予氢化可的松(0. 006 g /kg)。
于末次给药后 40 min,每只小鼠右耳内外侧涂二甲苯 0. 03 ml
致炎,左耳不涂为正常耳对照,1 h 后脱颈椎处死,沿耳廓基线
剪下双耳,用 8 mm打孔器冲下左耳及右耳同一部位的圆片,分
别称重,以两耳的质量之差作为肿胀度,计算肿胀抑制率:肿胀
抑制率=(空白对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度)/空白
对照组平均肿胀度×100%。
1. 4. 3. 2 对新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀的影响〔7,8〕 小
鼠分组及给药同 1. 4. 2. 1,阳性对照组给予地塞米松
(0. 01 g /kg)。于末次给药后 40 min,每只小鼠右后足跖皮下注
射 10%新鲜鸡蛋清 0. 03 ml。致炎 4 h 后处死动物,在踝关节
上剪下后足,精密称取左右两后足质量,以两足的质量之差作
为炎症肿胀度。将炎性足充分剪碎后称重并置于生理盐水中
浸泡 2 h,3 000 r /min 离心 10 min,取上清液 0. 2 ml,加
0. 5 mol /L的氢氧化钾-甲醇溶液 2 ml,50℃下异构化 20 min,用
甲醇稀释至 4 ml,于波长 278 nm 处测定其 OD 值,以每克炎症
组织相当的 OD值表示 PGE2 的相对含量。计算肿胀抑制率及
炎症组织 PGE2 抑制率,肿胀抑制率计算方法同 1. 4. 3. 1,前列
腺素(PG)E2 抑制率=(空白对照组炎性组织 PGE2 含量-给药
组炎性组织 PGE2 含量)/空白对照组组织 PGE2 含量×100%。
1. 5 统计学方法 采用 SPSS17. 0 软件进行 t 检验及秩和
检验。
2 结 果
2. 1 体外抑菌实验 九头狮子草对四种病原菌的抑制作用强
度依次为:大肠杆菌(MIC = 7. 8 mg /ml)、金黄色葡萄球菌
(MIC=31. 2 mg /ml)、绿脓杆菌(MIC = 62. 5 mg /ml)、肺炎链球
菌(MIC=125 mg /ml)。
2. 2 止痒实验 与空白对照组比较,九头狮子草各剂量均可
明显降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间
(P<0. 05)。见表 1。与空白对照组致痒阈〔(17. 5±4. 95)μg〕比
较,九头狮子草低、中、高剂量〔(33. 5 ±9. 98)、(143 ±34. 21)、
(232. 5±30. 79)μg〕均能显著提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈
(P < 0. 05)。阳性对照组亦能提高豚鼠的致痒阈〔(270 ±
15. 81)μg〕。
2. 3 抗炎实验 与空白对照组比较,九头狮子草各剂量均能
显著降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度(P<0. 05) ,提高肿胀
抑制率。见表 2。九头狮子草各剂量均能显著降低新鲜鸡蛋清
所致小鼠足跖肿胀(P<0. 05) ,提高肿胀抑制率;中、高剂量能
显著降低炎性足 PGE2 含量(P<0. 05) ,提高 PGE2 抑制率。见
表 3。
表 1 对右旋糖酐致小鼠瘙痒的影响(x±s,n=10)
组别
30 min
瘙痒次数(次)
瘙痒持续
总时间(s)
空白对照组 18. 2±3. 41 167. 5±41. 65
阳性对照组 8. 9±2. 661) 67. 0±25. 331)
低剂量组 15. 8±2. 75 123. 4±28. 78
中剂量组 11. 7±1. 981) 108. 7±35. 421)
高剂量组 9. 5±3. 231) 92. 6±32. 761)
与空白对照组比较:1)P<0. 05,下表同
表 2 对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响(n=10)
组别 肿胀度(x±s,mg) 肿胀抑制率(%)
空白对照组 13. 90±3. 16 -
阳性对照组 3. 48±1. 92 75. 0
低剂量组 9. 76±4. 621) 29. 8
中剂量组 8. 96±4. 161) 35. 3
高剂量组 5. 60±2. 271) 59. 7
表 3 新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀的影响(x±s,n=10)
组别
肿胀度
(mg)
PGE2 含量
肿胀抑
制率(%)
PGE2 抑
制率(%)
空白对照组 11. 32±2. 13 0. 899±0. 044 - -
低剂量组 5. 62±0. 741) 0. 788±0. 037 50. 35 12. 32
中剂量组 2. 92±0. 321) 0. 694±0. 0271) 74. 20 22. 81
高剂量组 1. 16±1. 551) 0. 608±0. 0391) 89. 75 32. 37
阳性对照组 0. 86±0. 051) 0. 524±0. 0241) 92. 40 41. 71
·655· 中国老年学杂志 2016 年 2 月第 36 卷
3 讨 论
阴道炎是阴道黏膜及黏膜下结缔组织的炎症,在各年龄层
次的妇女均可发生。目前西医治疗阴道炎主要应用抗生素和
化学药物,近期疗效较好,而长时间口服抗生素会产生毒副作
用,若通过阴道给药又常引起菌群失调导致真菌性阴道炎等,
因此临床应用受到一定的限制。而中药治疗阴道炎临床疗效
良好,标本兼治,起效迅速,愈后无复发,经济方便,安全可靠。
九头狮子草为贵州省少数民族地区民间治疗妇科泌尿系统感
染的草药,疗效良好。本实验结果表明九头狮子草对金黄色葡
萄球菌、肺炎链球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作
用;可降低右旋糖酐所致小鼠的瘙痒次数及瘙痒持续总时间,
并提高磷酸组胺所致豚鼠的致痒阈,具有显著的止痒作用;能
降低二甲苯所致的小鼠耳廓肿胀度,提高肿胀抑制率,能降低
新鲜鸡蛋清所致的小鼠足跖肿胀度,提高肿胀抑制率,还能显
著降低炎性足 PGE2 含量,提高 PGE2 抑制率,具有显著的抗炎
作用。以上结果与其临床应用和功能主治相吻合,为九头狮子
草治疗阴道炎提供了充分的实验依据。九头狮子草在抗菌的
同时兼有抗炎、止痒作用,这对各种原因引起的阴道炎来说可
以达到标本兼治疗的效果。
前期研究结果表明九头狮子草有良好的解热作用,其水提
液,石油醚部位及水部位均具有解热作用,石油醚部位及水部
位为解热有效部位,解热作用机制可能与降低血清中 IL-6 水平
和下丘脑 cAMP、PGE2 含量有关〔9,10〕。因此,推测九头狮子草
抗炎作用也与降低 IL-6 的水平有关。
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〔2014-08-11 修回〕
(编辑 安冉冉 /曹梦园)
苦荞麦提取物对糖尿病模型大鼠肾脏的保护作用及机制
柳 春 王艳杰 刘 洋 苗兰英 赵丹玉 张瑞鹏 徐 峰1 李 刚2
(辽宁中医药大学生物化学教研室,辽宁 沈阳 110032)
〔摘 要〕 目的 观察苦荞麦提取物对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病模型大鼠肾脏的保护作用及机制。方法 采用 STZ诱导建立糖尿病大
鼠模型,于第 3 周开始分别给予苦荞麦高、中、低(200,100,50 mg·kg-1·d-1)剂量和氨基胍(100 mg·kg-1·d-1)灌胃治疗,共治疗 12 w。采用
CRE-EN试剂盒检测血清肌酐含量;采用考马斯亮蓝法检测尿蛋白含量;用公式法计算内生肌酐清除率;采用免疫印迹法测定肾脏组织中羧甲基赖氨
酸(CML)的蛋白表达水平。结果 与模型组相比,苦荞麦各剂量组和氨基胍组糖尿病大鼠主要代谢症状多饮、多食、多尿、体重下降得到明显改善
(P<0. 01) ,并且各治疗组大鼠内生肌酐清除率升高,血肌酐和尿蛋白水平下降(P<0. 01)。与正常组比较,模型组肾脏组织 CML的蛋白表达水平显
著升高,苦荞麦各剂量组及氨基胍组肾脏组织中 CML的蛋白表达水平降低,以氨基胍组降低明显(P<0. 01)。结论 苦荞麦的提取物能够提高内生
肌酐清除率并降低血肌酐和尿蛋白水平,降低肾组织 CML的表达水平,从而改善糖尿病模型大鼠肾脏功能。
〔关键词〕 苦荞麦;糖尿病;肾功能
〔中图分类号〕 R285. 5 〔文献标识码〕 A 〔文章编号〕 1005-9202(2016)03-0557-03;doi:10. 3969 / j. issn. 1005-9202. 2016. 03. 018
基金项目:辽宁省科学技术计划项目(2006301039) ;辽宁省科技厅博士
启动课题(20121100)
1 沈阳药科大学 2 日本三益制药株式会社
第一作者:柳 春(1963-) ,女,博士,教授,博士生导师,主要从事中医
药对脏腑功能调控作用的信号转导机制研究。
及时有效地减少尿蛋白,提高内生肌酐清除率是逆转和延
缓糖尿病肾病(DN)发展,保护肾功能的关键。中药苦荞麦具
有降血糖、降血脂、抗氧化、镇痛抗炎、改善微循环等多种药理
作用〔1〕,对 DN的治疗具有良好的应用前景,因此进一步观察
其对 DN的肾脏保护机制。
1 材料和方法
1. 1 实验动物 雄性 Wistar 大鼠 80 只,5 周龄,体重 120 ~
130 g,由日本九动株式会社提供,微生物控制等级为 1 级。饲
养于普通级动物实验室,室温 22℃ ~ 23℃,相对湿度 60% ~
·755·柳 春等 苦荞麦提取物对糖尿病模型大鼠肾脏的保护作用及机制 第 3 期