全 文 ：实用中西医结合临床2008年4月第8卷第2期
●中西药苑●
三叶青对小鼠免疫性肝损伤保护作用的研究
杨雄志
（浙江医药高等专科学校 宁波315100）
摘要：目的:探讨三叶青对卡介苗(BCG)和脂多糖(LPS)诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用。方法:静脉注射BCG和LPS
诱导小鼠免疫性肝损伤。在注射LPS前,小鼠腹腔注射不同剂量的三叶青(10、15、20mL/kg),连续10d后,取血清,检测血清谷丙转
氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的活性,测定肝组织匀浆中脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶
(SOD)活性。结果:不同剂量的SYL治疗组小鼠血清ALT、AST、LDH活性及肝组织匀浆MDA含量均低于模型组,且肝组织损伤
不同程度地减轻。结论:三叶青对BCG和LPS诱导的小鼠免疫性肝损伤具有一定的保护作用。
关键词：三叶青;卡介苗;脂多糖;免疫性肝损伤;保肝作用
Abstract：Objective：TostudytheprotectiveefectofSanyeqing(SYQ)onexperimentalliverinjuryinducedbyCalmete-Guerin
bacilusvaccine(BCG)andLipopolysaccharide(LPS)inmice.Methods：ExperimentalliverinjurywasinducedbyCalmete-Guerin
bacilusvaccineandLipopolysaccharideinmalemicebyinjectingviatailvein(50!g/kg),andadministeringLPS (10μg/mouse)10d
later.TherapeuticgroupsweregivenrespectivelywithSYQ (10,15,20mL/kg)beforeadministrationofLPS.ThelevelofALT,ASTand
LDHinserumweremeasuredbyautooxdationmethod.andthelevelofSODwasmeasuredbypymgalolautooxdationmethod.Results：
ThethreeexperimentalgroupswerefoundwithsignificantdecreaseintheelevationofserumALT，ASTandLDHlevelandthecontentof
MDAintheliverplasma.Thelivertissuedamageswerealsoameliorated.Conclusion:SYQhasprotectiveefectagainsttheexperimental
liverinjuryinducedbyBCGandLPSinmice.
Keywords：SYL；BCG；LPS；Immunologicalliverinjury；Hepatoprotection
中图分类号：R285.5 文献标识码：B 文献编号：1671-4040(2008)02-0088-02
三叶青为葡萄科 植 物 三 叶 崖 爬 藤 (Tetrastigrna
HemsleyanumDiesetGilg)的块根，主要分布于我国浙江、江
西、福建、台湾、广东、广西、四川、贵州及云南等地，具有清热
解毒、祛风化痰、活血止痛之功，主治高热惊厥、腹痛、肺炎、
哮喘、肝炎及跌打损伤等症。民间素有用三叶青治疗黄疸及
急、慢性肝炎有较好的疗效[1]。近年，许多学者在成分及药理
等方面作了大量的研究[2~5]。为进一步探明三叶青生物活性及
治病机理，在前基础上[6]，笔者以小鼠为对象，应用BCG+LPS
制作急性免疫性肝损伤模型，选择血清酶学血清超氧化物歧
化酶(SOD)、肝脏脂质过氧化物丙二醛(MDA)为测定指标，从
多方面观察三叶青提取液对小鼠急性免疫性肝损伤的保护
作用及其机制，使其为今后中药制剂的开发及临床应用提供
理论依据。
1 材料和方法
1.1 动物 昆明系小鼠，雄性，4~5周龄，体重(20±2)g，购自
浙江省实验动物中心。
1.2 药品和试剂 三叶青提取液（SYQ生药含量2g/mL，本
校药物研究中心研制）；1%联苯双酯（DDB，北京协和制药
厂）；卡介苗冻干粉（BCG，上海生物制品研究所），临用前以
无菌生理盐水配成 12.5mg/mL；联苯三酚、细菌脂多糖
（LPS）、硫代比妥酸（TBA）和四乙氧基丙烷（TEP）购自Sigma
公司；血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）和乳酸脱氢
酶（LDH）测定试剂盒购自南京建成生物制品研究所。其余试
剂均为国产分析纯。
1.3 仪器 UV7250紫外分光光度计(中国，上海)；O1ympus
AU640全自动生化分析仪(日本)。
1.4 方法
1.4.1 受试动物分组及药物用量 实验动物随机分为6组，
每组12只。各组药物用量为：正常组(NS)动物不给任何药，
只给等量生理盐水，不作任何处理；损伤对照组
(NS+BCG+LPS)，NS10mL；阳性对照组(DDB+BCG+LPS)，
DDB20mL/kg；三叶青 A组、三叶青 B组、三叶青 C组
（SYQ+BCG+LPS）用不同剂量的三叶青提取液，SYQ剂量依
次按生药量10、15、20mL/kg。BCG+LPS为造模药物。
1.4.2 小鼠免疫性肝损伤模型的建立[6] 除正常组外，其余
各组小鼠均经尾静脉注射BCG(1mg/0.2mL）适量,3h后，正常
组小鼠腹腔注射等容生理盐水10mL/kg,给药组小鼠分别给
不同剂量SYQ(10、15、20mL/kg)，连续10d。最后1次给药3h
后，经尾静脉注射LPS（10g/0.2mL）适量,诱导小鼠肝损伤。
24h后,小鼠眼眶取血,分离血清待测。同时脱颈椎处死小鼠,
迅速取出肝脏并制备成肝匀浆待测MDA含量和SOD酶活。
1.4.3 血清酶活性测定 血清 ALT、AST、LDH活性均用
OlympusAU640全自动生化分析仪测定。
1.4.4 肝组织 MDA含量的测定 采用硫代巴比妥酸(TBA)
改进法测肝组织匀浆MDA含量：肝组织用冰冷的0.15%氯
化钠溶液制成10%的肝匀浆，加等体积的SDS摇匀后，依次
加入20%醋酸缓冲液和0.67%TBA，摇匀后95℃水浴1h，离
心，取上清液于532nm波长下比色，以四乙氧基丙烷(TEP)为
标准液，建立TEP标准曲线(r=0.998，P<0.001)，得直线回归
方程：Y=0.005661+0.0004989X[(Y为OD值，X为10nmol/L
TEP的用量（#L）]。测定样本OD值，计算每克肝组织(湿重)
MDA的生成量(nmol/g)。
1.4.5 肝组织 SOD酶活的测定 测肝组织匀浆 SOD活性
采用邻苯三酚自氧化一微量进样法：采用微量进样器调节邻
苯三酚的体积，严格控制其自氧化速率为0.070A/min。测试
管加入 pH8.2的 50mmol/L的 Tris-HCl缓冲液 4.5mL，肝
组织匀浆 10$L，45mmol/L邻苯三酚 10%L迅速摇匀，在
UV7250紫外分光光度计上325nm处测吸光值，每30秒测1
次，测3min。计算△A/min和SOD活性。
1.4.6 统计学方法 实验数据用 SPSS8.0统计软件进行方
差分析，数据以(X±S)表示。
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DOI:10.13638/j.issn.1671-4040.2008.02.021
实用中西医结合临床2008年4月第8卷第2期
2 结果
2.1 SYQ对 BCG+LPS诱发的肝损伤小鼠血清 ALT、AST、
LDH活性的影响 见表1。由表1结果可以得出：(1)损伤对
照组较正常组各项指标均显著升高（P<0.05，P<0.01），表明
BCG+LPS染毒后对小鼠肝细胞造成了严重的损伤，动物模
型建立成功。(2)阳性对照组与损伤对照组相比有显著差异
(P<0.01，P<0.05)，DDB阳性对照有效。(3)SYQ的B组和C
组与损伤对照组比较各项指标均有所降低，有统计学意义(P
<0.01，P<0.05)，说明SYQ能减少肝细胞内酶的逸出，对肝细
胞有较明显的保护作用；其中C组效果更为显著。
表1 肝损伤小鼠血清ALT、AST和LDH比较 (X±S) U/L
组别 剂量/mL·kg-1 ALT AST LDH
正常组 33.28±4.36 37.25±11.18 249.22±62 0
损伤对照组 109.18±9.82** 84.69±12 3* 452.58±97.86*
三叶青A组 10 108.28±10.21 79.62±10.26 273.49±66 98
三叶青B组 15 85.35±4.38Δ 71.21±10.35Δ 289.16±78.88Δ
三叶青C组 20 63.72±4.58ΔΔ 65.37±9.51ΔΔ 268.45±22.15ΔΔ
阳性对照组 20(DDB) 64.65±4.78ΔΔ 62.02±4.68ΔΔ 259.06±58.16Δ
注：与模型组比较，*P <0.05，**P <0.01；与正常组比较，ΔP <0.05，ΔΔP <
0.01。
2.2 SYQ对 BCG+LPS诱发的小鼠肝损伤组织中 MDA含
量和SOD活性的影响 小鼠依次尾静脉注射BCG+LPS后，
损伤对照组小鼠肝匀浆 MDA含量升高 61.2%(P <0.001)，
SOD水平降低49.5%(P<0.01)，不同剂量的SYQ给药组小鼠
肝匀浆MDA含量低于损伤对照组，SOD水平高于损伤对照
组，其中SYQ剂量为20mL/kg时，效果极为明显。见表2。
3 讨论
注射微量的BCG和LPS可诱导小鼠严重的免疫性肝损
伤模型，类似于人类肝炎发生的病理生理过程，是筛选保肝
药物较为理想的模型之一[7]。小鼠尾静脉注射BCG和LPS
表2 肝损伤小鼠MDA含量和SOD活性比较 (X±S)!mol/L
组别 剂量/ mL·kg-1 MDA SOD
正常组 35.26±7.32 68.15±12.76
损伤对照组 56.85± .25* 34.36±12.89*
三叶青A组 10 42.06±2. 8ΔΔ 56.12± 8.79Δ
三叶青B组 15 37.85±621ΔΔ 65.46±22.18ΔΔ
三叶青C组 20 36.46±3.12ΔΔ 61.18± 2.87ΔΔ
阳性对照组 20（DDB） 48.64±5.91Δ 51.96±18.94Δ
注：与模型组比较，*P<0.01；与正常组比较，ΔP<0.05，ΔΔP<
0.01。
后，引起小鼠血清转氨酶和LDH的显著升高，肝匀浆MDA
的含量显著升高，SOD水平明显降低，表明造模成功。不同剂
量的SYQ给药组小鼠血清AST、ALT、LDH的水平降低，肝
损伤不同程度减轻，表明SYQ对BCG和LPS诱导的小鼠免
疫性肝损伤具有良好的防护作用。
参考文献
[1]江苏新医学院.中药大词典(下册)[M].上海：上海科技出版社，
1996.2123
[2]伍昭龙,吕江明,李春艳,等.三叶青对CCl4致肝损伤大鼠血清五项
生化指标水平的影响[J].甘肃中医学院学报，2006,23(4)：11-13
[3]李瑛琦,陆文超,于治国.三叶青的化学成分研究［J］.中草药,2003,
34(11)：982-983
[4]钟晓明,毛庆秋,黄真,等.三叶青提取物对四氯化碳致急性肝损伤
小的保护作用及急性毒性实验[J].中成药,2006,28(3)：4 2-424
[5]沈乃.超氧化物歧化酶测定[A].见：徐叔云，卞如潦，陈修.药理实验
方法学[M].第2版.北京：人民卫生出版社,1991.502-504
[6]杨雄志,张庆珍.“水三仙”口服液对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
的研究[J].实用中西医结合临床，2005,5(3)：7-8
[7]许建明,徐叔云,梅俏,等.褪黑素对小鼠免疫性肝损伤的保护作用
[J].中国药理学通报，1998,14(5)：452-454
（收稿日期：2007-10-21）
乌司他丁对腹腔镜胆囊切除术患者肝功能的保护作用
及其对IL-6和IL-8的影响
朱春辉 张倩倩
（浙江省台州医院路桥院区 台州318050）
关键词：胆囊切除术;腹腔镜;乌司他丁;肝功能保护;IL-6；IL-8
中图分类号：R69 文献标识码：B 文献编号：1671-4040(2008)02-0089-02
近年来研究表明腹腔镜胆囊切除术(LC)对肝功能有一
定影响，表现为术后肝脏血清酶学指标升高 [1,2]。乌司他丁
(ulinastatin,UTI)是一种存在于人尿中的蛋白酶抑制剂，能有
效抑制多种水解酶的活性、细胞因子和炎症介质的释放，对
多种脏器具有保护作用[3]。本研究旨在观察UTI对LC患者
肝功能的保护作用及其对细胞因子 IL-6和 IL-8水平的影
响。现报道如下：
1 材料与方法
1.1研究对象 选择我院 2004年 11月 ~2006年 10月行
LC治疗的患者60例，男37例，女23例，年龄32~65岁，平
均年龄45岁，ASA分级I~Ⅱ级。所有患者术前肝功能检查
正常且无胆管梗阻或感染，无急慢性肝炎和胰腺炎。随机分
为乌司他丁治疗组和对照组，两组患者均为30例。两组患者
在ASA分级、年龄、性别和术中气腹时间等方面无显著性差
异(P>0.05)。
1.2研究方法 所有病例均采用相同的气管内全麻，用万可
松、硫喷妥钠和司可林诱导插管，安氟醚和万可松维持麻醉。
乌司他丁治疗组在术前、术中及术后第1~3天给予乌司他丁
（国药准字H20040506）20万U+100mL生理盐水静脉滴注；
对照组给予等量生理盐水静脉滴注。
1.3研究指标检测
1.3.1肝功能检测 两组病人分别于术前、术后第l、3、5天
清晨 7点抽取外周静脉血检验肝功能，包括谷丙转氨酶
(ALT)和谷草转氨酶(AST)。
1.3.2 IL-6和 8的含量测定 两组患者均于术前、术后第
l、3、5天各取血标本行酶联免疫吸附测定法 (ELISA)测定
IL-6和IL-8的含量。
1.4统计学方法 结果用均数±标准差(X±S)表示，采用
SPSS10.0统计软件进行t检验及 2检验。
2 结果
两组病人术后第1、3天ALT和AST均较术前明显升高
(P<0.05)，但乌司他丁治疗组升高程度明显低于对照组(P<
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
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