全 文 ：计算回收率(见表 5)。
2. 3. 5 稳定性试验:精称供试品 1. 00g，依法制成供试品溶
液，按照表 6 时间设置，分别测定其吸光度(见表 6)。
表 6 稳定性试验
实验编号 时间(min) 吸光度(A) ＲSD%
1 0 0. 435 0. 57
2 10 0. 438
3 20 0. 437
4 30 0. 439
5 40 0. 440
6 60 0. 439
7 90 0. 433
3 讨论
本实验在纯化黄酮的过程中采用了碱溶酸沉法并利用乙
酸乙醇除杂，步骤较为复杂，故而重复率试验偏差较大，但对
于茉莉花中黄酮类成分提取不影响，证明本方法有效可行。
提取浓缩后的成分经盐酸镁粉检测确认为黄酮类化合物。继
而以芦丁为对照品，利用三氯化铝比色法显色后，在 500nm
处检测黄酮吸光度，线性关系良好，显色在 90min 内稳定，且
操作简便，重复性好。利用多功能超声提取器能够高效提取
出茉莉花中的总黄酮类成分。实验室常用的黄酮提取方法主
要包括加热回流提取法制备〔8〕，该法提取时间长，操作复杂，
并且不能一次进行较大量药材的提取操作，不适合进一步产
品的开发利用。本试验利用超声提取，并结合多功能超声提
取器，能够进行较大量产品的提取操作，且与回流提取法相比
较超声法具有高效简便的有点，与回流法相比，对黄酮有较高
提取率。经正交试验设计后，优化得到超声时间为 45min，与
回流法相比用时明显缩短。故此法具有高效节能的明显特
点，并在 1 次提取过程中得到较大量的黄酮，为进一步的试验
提供原料基础。
参考文献
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j. issn. 1002-1124. 2005. 08. 021.
响应面法优化三叶青总黄酮的提取工艺研究
卢舜飞1，汪亮亮2，童应鹏3，叶挺梅2* (1. 浙江丽水学院医学与健康学院 丽水 323000;2. 浙江丽水学院生态
学院 丽水 323000;3. 浙江工业大学药学院 杭州 310014)
摘要:目的 优选三叶青总黄酮的提取工艺。方法 以液料比、乙醇浓度、提取时间、提取温度 4 个单因素为考察基础，利用响应面法优化并
建立了三叶青总黄酮最佳的回流提取工艺。结果 液料比对总黄酮提取量的影响最大，提取时间次之。最佳工艺条件为:液料比 14. 25mL·
g － 1，乙醇浓度:50. 7%，提取时间:1. 975h，提取温度:89. 4℃。结论 采用响应面分析法优选三叶青总黄酮的提取工艺稳定、合理、可行。
关键词:三叶青;总黄酮;提取;响应面
中图分类号:TQ460. 4 文献标识码:A 文章编号:1006-3765(2015)-09-05102-0034-05
作者简介:卢舜飞，女(1974 －)。学历:硕士。职称:副教授。主要从事中西医结合基础研究。联系电话:13757098722
通讯作者:叶挺梅。职称:教授。主要从事中草药技术开发及天然药物研究工作。E-mail:lsxylu@ 163. com
基金项目:浙江省自然科学基金项目(LQ12H29001);浙江省自然科学基金项目(LQ14H290001)
浙江省科技厅重大科技专项社会发展项目(2011C03002)
Optimization of Total Flavonoids Extraction from Ｒadix Tetrastigmae by
Ｒesponse Surface Methodology
LU Shun-fei1，WANG Liang-liang1，TONG Ying-Peng3，YE Ting-Mei2* (1. Lishui University College of Medi-
·43·
海峡药学 2015 年 第 27 卷 第 9 期
cine and Health，Lishui 323000，China;2. Lishui University College of Ecology，Lishui 323000，China;
3. College of Pharmaceutical Sciences，Zhejiang University of Technology，Hangzhou 310014，China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To optimize the extraction technics of total flavonoids from Ｒadix Tetrastig-
mae. METHODS Based on single factor experiments，extraction conditions includ liquid-solid ratio，ethanol con-
centration，extraction time and extraction temperature were optimized using response surface methodology. ＲESULTS
The main factor of influencing total flavonoids extraction was liquid-solid ratio followed by extraction time. The op-
timal extraction conditions were as follows:liquid-solid ratio 14. 25mL·g －1，ethanol concentration 50. 7%，extraction
time 1. 975h and extraction temperature 89. 4℃ . CONCLUSION Optimization of total flavonoids extraction from
Ｒadix Tetrastigmae by response surface methodology was steady，reasonable and practicable.
KEY WOＲDS:Ｒadix Tetrastigmae;Total flavonoids;Extraction;Ｒesponse surface methodology
三叶青(Tetrastigma hemsleyanum Diel et Gilg)是葡萄科崖
爬藤属植物三叶崖爬藤的干燥块根。其性寒，味苦辛。具有
清热解毒、活血止痛、祛风化痰、抗炎消肿等功效。常用于治
疗小儿风热咳嗽、高热惊厥、肺炎、肠炎、疔疮毒疖与跌打损伤
等〔1〕。三叶青主要含有黄酮类、淀粉、还原糖、甾体类化合物
和氨基酸等生物活性成分〔2，3〕。现代药理学研究表明，黄酮
是三叶青中具有重要生理活性的主要有效成分，黄酮类化合
物具有抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、护肝、降血压、降血糖、降血
脂、提高免疫力、延缓衰老等作用〔4 ～ 6〕。因此，黄酮被广泛应
用于医药、食品、化妆品等领域。
响应面分析法(Ｒesponse surface methodology，ＲSM)是一
系列的确定性试验拟合一个响应面用来模拟真实的极限状态
的曲面，简便的进行可靠性分析〔7〕。通过响应曲面法确定不
同因素和交互作用在工艺过程中对响应值的影响，从而得到
最佳提取工艺〔8〕，是近年来应用很广泛的一种分析方法。目
前，应用响应面法优化三叶青总黄酮的提取工艺研究鲜有报
道。本研究运用响应面法对三叶青总黄酮的提取工艺进行优
化，为有效开发和利用三叶青黄酮类物质提供指导。
1 材料与方法
1. 1 材料与仪器 三叶青，购自丽水市万丰中药材购销中
心，保存在阴凉干燥处。乙醇(分析纯，杭州富强化工仪器有
限公司)、亚硝酸钠(分析纯，杭州富强化工仪器有限公司)、
硝酸铝(分析纯，杭州富强化工仪器有限公司)、氢氧化钠(分
析纯，广州市度特化工有限公司)，芦丁对照品，中国药品生
物制品检定所，批号:097-8604。所用水为蒸馏水。
HHS型电热恒温水浴锅(上海博迅实业有限公司医疗设
备厂);723C 可见光分光度计(上海新茂仪器有限公司);
SPN202F电子天平(梅特勒-托利多(常州)称量设备系统有
限公司)。
1. 2 实验方法
1. 2. 1 原料处理:将三叶青块根洗净后 60℃烘干，粉碎(60
目)，样品被密封保存于 4℃干燥容器中。
1. 2. 2 三叶青总黄酮的提取工艺:称取预处理的适量三叶青
粉末，乙醇溶液适量提取，抽滤，定容，吸取一定体积的黄酮提
取液，测定黄酮含量〔9〕。参照下式进行总黄酮含量计算:总
黄酮含量 Y(%)=(A × B × V /W)× 100。
式中:A 为提取总黄酮的质量浓度(mg·mL －1);B 为提
取液的稀释体积倍数;V 为提取液体积(mL);W为三叶青干
粉质量(g)。
1. 2. 3 单因素考察设计:按预先设计的方法提取三叶青总黄
酮，选取液 /料比(9 ∶ 1、12 ∶ 1、15 ∶ 1、18 ∶ 1、21 ∶ 1)，乙醇浓度
(30%、40%、50%、60%、70%)，提取温度(75℃，80℃，85℃，
90℃，95℃)，提取时间(1、1. 5、2、2. 5、3h)等因素进行实验，分
析对三叶青总黄酮含量的影响。
1. 2. 4 响应面法实验设计:在单因素实验的基础上，可知乙
醇体积分数 50%、料液比 1∶ 15(g·mL －1)、提取温度 90℃和
提取时间 2h为三叶青总黄酮提取的最佳单因素。为进一步
优化三叶青总黄酮提取工艺，运用 Box-Behnken design实验设
计原理，进行响应面四因素三水平优化实验，实验数据应用
Design-Expert 8. 0. 6 软件进行分析〔9〕，以三叶青总黄酮含量
为响应值进行响应面分析(见表 1)。
表 1 响应面因素水平编码表
因素
编码水平 Level
－ 1 0 1
液料比 12∶1 15∶1 18∶1
乙醇浓度 40% 50% 60%
提取时间 1. 5 2 2. 5
提取温度 85 90 95
2 结果与分析
2. 1 单因素实验
2. 1. 1 液料比对三叶青总黄酮含量的影响:由图 1 可知，当
液料比在 9 ～ 15mL·g －1的范围内，随着液料比增大，三叶青
中总黄酮含量也逐渐增大，但是液料比再增大反而不利于三
叶青中总黄酮的提取。说明在一定范围内增加提取溶剂用量
有利于有效成分溶出，故选择液料比为 15mL·g －1。
2. 1. 2 乙醇浓度对三叶青总黄酮含量的影响:由图 2 可知，
三叶青总黄酮含量随着乙醇浓度的升高而增大，当乙醇浓度
为 50%时，三叶青总黄酮含量达到最高值，再增加乙醇浓度
将不利于三叶青总黄酮的溶出。本文在实验过程发现，在乙
醇浓度较低时，提取液较粘稠，难以过滤，有可能是三叶青中
·53·
Strait Pharmaceutical Journal Vol 27 No. 9 2015
的淀粉类物质发生糊化，将三叶青总黄酮包裹住，不利于溶
出;此外，三叶青总黄酮的极性中等，在过高或过低浓度的乙
醇中溶解度都较差，因此溶出度较小，而 50%乙醇的极性可
能与三叶青总黄酮最接近，故选择 50%乙醇作为提取溶剂。
图 1 液料比对三叶青总黄酮含量的影响
图 2 乙醇浓度对三叶青总黄酮含量的影响
2. 1. 3 提取时间对三叶青总黄酮含量的影响:由图 3 可知，
在提取时间为 2h之内，三叶青总黄酮含量随着提取时间延长
而升高，再延长提取时间，三叶青总黄酮含量将下降，这可能
是由于总黄酮成分降解造成的，故选择提取时间为 2h。
图 3 提取时间对三叶青总黄酮含量的影响
图 4 提取温度对三叶青总黄酮含量的影响
2. 1. 4 提取温度对三叶青总黄酮含量的影响:由图 4 可，在
水浴温度升到 90℃之前，三叶青总黄酮含量都逐渐升高，但
是提取温度在 95℃的时候，总黄酮含量却急剧下降，这也可
能是三叶青总黄酮的降解引起的，故选择提取温度为 90℃。
2. 2 响应面法分析
2. 2. 1 回归模型的建立与分析:响应面法分析实验结果(见
表 2)，用 Design-Expert 8. 0. 6 软件进行回归分析，建立三叶青
总黄酮含量(Y)与液料比(A)、乙醇浓度(B)、提取时间(C)、
提取温度(D)的回归模型为:Y = 0. 13 － 0. 014A － 1. 758E －
003B － 5. 217E － 003C － 3. 775E － 003D － 2. 500E － 004AB －
4. 000E － 004AC － 1. 600E － 003AD － 0. 010BC + 2. 250E －
004BD － 1. 250E － 003CD － 0. 030A2 － 0. 012B2 － 0. 035C2 －
0. 028D2。
对 29 个实验点回归分析结果(见表 3)可知，回归模型为
极显著的(P ＜ 0. 0001)，相关系数(Ｒ2 = 0. 9754)较高，而失拟
项不显著(P = 0. 8344 ＞ 0. 05)，说明该模型可用于三叶青总
黄酮含量分析和预测。对三叶青总黄酮含量的影响为液料比
(A)＞提取时间(C)＞提取温度(D)＞乙醇浓度(B)。
表 2 响应面分析试验结果
试验号
编码值
A B C D
总黄酮含量
/mg·mL －1
1 0 － 1 0 － 1 0. 0999
2 0 0 － 1 1 0. 0697
3 0 1 0 1 0. 0825
4 0 1 － 1 0 0. 0973
5 0 － 1 － 1 0 0. 0771
6 1 0 1 0 0. 0475
7 － 1 0 1 0 0. 0719
8 － 1 1 0 0 0. 1035
9 0 1 0 － 1 0. 0892
10 0 － 1 0 1 0. 0923
11 － 1 0 0 － 1 0. 0917
12 0 0 0 0 0. 1413
13 0 0 － 1 － 1 0. 0745
14 0 － 1 1 0 0. 0855
15 0 0 1 1 0. 0607
16 1 － 1 0 0 0. 0775
17 0 0 0 0 0. 1329
18 0 1 1 0 0. 0649
19 0 0 0 0 0. 1241
20 1 0 － 1 0 0. 0611
21 1 0 0 1 0. 0469
22 1 0 0 － 1 0. 0583
23 1 1 0 0 0. 0769
24 － 1 0 － 1 0 0. 0839
25 － 1 0 0 1 0. 0867
26 0 0 0 0 0. 1251
27 0 0 1 － 1 0. 0705
28 0 0 0 0 0. 1291
29 － 1 － 1 0 0 0. 1031
·63·
海峡药学 2015 年 第 27 卷 第 9 期
表 3 三叶青总黄酮提取量方差分析结果
方差来源 平方和 自由度 均方和 F值 显著性水平
A 2. 48E-03 1 2. 48E-03 80. 13 ＜ 0. 0001
B 3. 71E-05 1 3. 71E-05 1. 2 0. 2923
C 3. 27E-04 1 3. 27E-04 10. 54 0. 0059
D 1. 71E-04 1 1. 71E-04 5. 52 0. 034
AB 2. 50E-07 1 2. 50E-07 8. 07E-03 0. 9297
AC 6. 40E-07 1 6. 40E-07 0. 021 0. 8878
AD 1. 02E-05 1 1. 02E-05 0. 33 0. 5745
BC 4. 16E-04 1 4. 16E-04 13. 43 0. 0025
BD 2. 03E-07 1 2. 03E-07 6. 54E-03 0. 9367
CD 6. 25E-06 1 6. 25E-06 0. 2 0. 6602
A2 5. 71E-03 1 5. 71E-03 184. 32 ＜ 0. 0001
B2 9. 47E-04 1 9. 47E-04 30. 57 ＜ 0. 0001
C2 8. 05E-03 1 8. 05E-03 259. 73 ＜ 0. 0001
D2 5. 06E-03 1 5. 06E-03 163. 37 ＜ 0. 0001
残差 Ｒesidual 4. 34E-04 14 3. 10E-05
失拟项 Lack of Fit 2. 39E-04 10 2. 39E-05 0. 49 0. 8344
误差 Pure Error 1. 95E-04 4 4. 86E-05
总离差 Cor Total 1. 80E-02 28
模型 Model 0. 017 14 1. 23E-03 39. 66 ＜ 0. 0001
模型的确定系数:0. 9754
模型的调整确定系数:0. 9508
2. 2. 2 交互作用分析:数据经 Design-Expert软件绘制响应面
图和等高线图(见图 5)，以研究各参数的相互作用对总黄酮
含量的影响。若曲线越陡，提示该因素对总黄酮含量的影响
越明显;等高线形状反映两因素交互作用强弱，交互作用强呈
椭圆形，影响较显著，圆形则相反〔10〕。并且从等高线图能够
看出存在极值的条件应该是在圆心处。从图 5 可以看出，乙
醇浓度和提取时间的交互作用强，等高线呈椭圆形，说明对黄
酮的提取影响显著，其余各因素间的交互作用均不显著。
图 5 提取时间和乙醇浓度对三叶青总黄酮提取
影响的交互影响
2. 2. 3 最佳工艺和验证:通过 Design-Expert8. 0. 6 软件分析
得到三叶青总黄酮最佳提取条件为:液料比 14. 28mL·g －1，
乙醇浓度:49. 6%，提取时间:1. 97h，提取温度:89. 7℃。在此
条件下预测总黄酮含量为 0. 132548mg·mL －1。根据所得的
分析数据进行 3 组验证实验，得到总黄酮平均含量为
0. 1330mg·mL －1，实际与预测的总黄酮含量较接近，充分验
证了所建模型的正确性，说明三叶青中总黄酮的提取工艺优
化可以采用响应面分析法。
3 结论
本研究在单因素实验的基础上，设计了四因素三水平共
29 个试验点安排试验，利用 Design Expert软件设计响应面实
验优化三叶青总黄酮的提取工艺。结果表明，液料比对总黄
酮提取量的影响最大，提取时间次之，均有显著性意义。最优
工艺条件为:液料比 14. 25mL·g －1，乙醇浓度:50. 7%，提取
时间:1. 975h，提取温度:89. 4℃。验证实验结果表明，三叶青
总黄酮提取平均含量实测值(0. 1330mg·mL －1)与预测值
(0. 132548mg·mL －1)基本相符，充分验证了所建模型的可靠
性，说明采用响应面分析法可优化三叶青总黄酮的提取工艺，
本研究优选出的最佳实验条件，对今后有效开发和利用三叶
青中的总黄酮有一定的指导意义。
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几种易混淆中药饮片的经验鉴别
郑 东，苏志坚，褚思娟(福建省厦门市中医院 厦门 361009)
摘要:目的 论述几种调剂中易混淆的中药饮片的性状鉴别要点。方法 对几组易混淆中药，从药物基源、性状鉴别、功能与主治等方面进行
辨析。结果和结论 易混淆品种的经验鉴别可以作为临床调剂简便而有效的鉴别方法，提高从业人员的中药饮片鉴别水平。结论 易混淆中
药品种的对比鉴别对提高临床安全用药具有一定意义。
关键词:易混淆;中药饮片;性状鉴别
中图分类号:Ｒ282. 71 文献标识码:B 文章编号:1006-3765(2015)-09-05138-0038-03
作者简介:郑 东，男(1975. 12 －)。毕业于福建中医药大学。职称:
副主任药师。从事中药学。联系电话:13799789966
中药饮片是中药材经过按中医药理论、中药炮制方法，经
过加工炮制后的，可直接用于中医临床的中药。中药饮片是
我国人民预防疾病、治疗疾病的一个重要的手段、方法和有力
武器，为我国人民的卫生健康事业做出了重大贡献，虽然目前
我国卫生事业有了长足的发展，各种诊疗技术日益丰富，但是
在很多经济不发达地区、边远地区依然缺医少药，中药在人类
疾病治疗中仍然发挥着重要作用。中药饮片调剂是临床诊疗
工作的一个组成部分。在中药饮片调剂工作中经常会遇到一
些外观形状、颜色、质地等性状特征相似的饮片，其不易区分，
极易混淆，如:细辛与徐长卿，佩兰与泽兰，大血藤与鸡血藤，
桔梗与生晒参，蒲黄与海金沙等。给调剂工作带来一定难度
和困扰，在工作中如不认真加以鉴别就会导致证准方对药不
灵，降低治疗效果，甚至产生毒副作用。为了防止装错斗、配
错药等差错事故发生，本文笔者总结了在中药饮片调剂工作
中常见易混淆的中药饮片:细辛与徐长卿、牛至与荆芥、苦杏
仁与桃仁、佩兰与泽兰、大血藤与鸡血藤、桔梗与生晒参、蒲黄
与海金沙 7 组中药饮片的性状鉴别异同点供大家参考，以利
于中药饮片调剂人员在工作中便于识别。保证用药安全及临
床疗效。归纳总结如下:
1 易混淆中药饮片
1. 1 细辛和徐长卿
1. 1. 1 细辛来源于马兜铃科植物马兜铃科植物北细辛 Asa-
rum heterotropoides Fr. Schmidt var. mandshuricum (Maxim. )
Kitag.、汉城细辛 Asarum seoulense Nakai 或华细辛 Asarum 的
干燥根或根茎。其主要含有挥发油〔1〕。具有祛风散寒、通窍
止痛、温肺化饮的功效。徐长卿来源于萝藦科植物徐长卿
Cynanchum paniculatum (Bge.)Kitag. 的干燥根和根茎。其含
有丹皮酚、异丹皮酚等，具有祛风化湿、止痛止痒的功效。
1. 1. 2 性状鉴别特点:细辛和徐长卿饮片性状共同点为两者
均为不规则的段，表面灰棕色或浅黄白色，根表面均具有纵皱
纹，质脆，易折断。断面黄白色。气辛香，麻舌。不同点在于
细辛根茎有环形的节，根细长，密生节上，断面平坦，味辛辣。
而徐长卿有纤细的须根，断面粉性，香气特异，味辛。
1. 1. 3 显微鉴别特点:细辛其外侧常残留一有皮细胞。皮层
宽广，壁细胞充满淀粉粒;有油细胞，含油滴，内皮层明显，可
见凯氏点;较粗的根有时可见石细胞。中柱鞘为 1 列薄壁细
胞，次生组织不发达，初生木质部四原型，与韧皮部相间隔，韧
皮部内侧隐约可见形成层细胞。徐长卿其外皮层细胞表面观
类多角形，垂周壁细波状弯曲。细胞间有一类方形小细胞，侧
面观呈类长方形。分泌细胞类圆形或长椭圆形。内皮层细胞
类长方形，垂周壁细波状弯曲。
1. 2 牛至和荆芥
1. 2. 1 牛至来源于唇形科植物牛至属牛至 Origanum vulgare
L. 的全草〔2〕，其主要含有挥发油、齐墩果酸、胡萝卜苷等〔3〕。
具有解表理气、清暑利湿的功效。荆芥来源于唇形科植物荆
芥的干燥地上部分，其主要含有挥发油，具有祛风解表、透疹、
炒炭止血的功效。
1. 2. 2 性状鉴别特点:牛至和荆芥性状共同点为两者均为不
规则的段，茎呈方柱形，表面淡黄绿色或紫棕色，密被细毛。
不同点在于牛至聚伞花序顶生，气微香，气微苦，而荆芥穗状
轮伞花序顶生。气芳香，味辛凉。
1. 2. 3 显微鉴别特点:牛至茎横切面表皮细胞方形外被角质
层，有非腺毛，外壁具疣点，并有小腺毛。皮层细胞 4-5 列，有
厚角细胞;内皮层细胞 1 列，整齐，较大。髓部呈空腔。荆芥
茎横切面表皮细胞外壁厚而角质化;气孔少数;腺毛柄为单细
胞，头部类圆形，腺鳞头部类圆形，柄极短，单细胞;非腺毛壁
具疣状突起，茎四棱处表皮内侧为厚角组织。中柱鞘纤维束
断续成环，壁微木化。形成层明显。木质部较宽，导管及木纤
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海峡药学 2015 年 第 27 卷 第 9 期